美白类化妆品中有效成分的检测和探寻
引言
护肤品作为一种日用化妆品，具有美白、保湿、控油、抗衰老、抗光老化、祛斑以及美颜等功[1]。近年来，我国的护肤品行业发展迅速，也在消费层次上有了越来越高的要求，这也使得公众的“颜值”经济得到了快速的发展。根据欧睿信息咨询公司数据显示，2019年中国美容与个人护理品零售额达到了4500亿人民币，护肤品在市场上的占有率高达50%。同时据英敏数据显示，中国在2015至2019年亚太区新品中宣称含美白提亮类化妆品的占比第一（占比 29%），其次为日本和韩国[2]。而美白类化妆品由于其产品配方中美白功能性原料的合理搭配，因此日渐受消费者的重视，尤其是近几年来涌现出了一批成分党，所以对化妆品中成分的美白机理分析和功效验证越来越受到人们的关注。
1 美白类化妆品中的主要成分和检测方法
目前市面上美白类护肤品中的主要美白成分有烟酰胺、维生素C、熊果苷、杏仁酸、谷胱甘肽等。
1.1 烟酰胺
烟酰胺可通过液质联用法测定其在美白类护肤品中的含量。选用中国食品药品研究院的烟酰胺样品（纯度为99.9%）和某品牌的美白护肤品进行分析检测，采用API4000型三重四极杆质谱仪（美国AB公司）进行分析。将固体样品粉碎后混匀，液体试样同样混合均匀。使用分析天平精密称取1g上述处理好的样品，转移到50 mL的容量瓶中，加入40 mL去离子水，用超声波清洗器处理10 min左右，处理好用定容至刻度线，将容量瓶摇匀后在0.22
的滤膜过滤后留下上清液作为待测试剂[3]。设置25、30、35、40 ℃温度梯度的柱温，选用Capcell Pak C18作为色谱柱，控制进样量为10 μL，流速为0.2 mL/min。通过分析可以得到烟酰胺的定量离子对色谱和如下的基质效应计算公式：
(1)
在式子中ME为基质效应的值；A为纯溶剂中化合物的响应值；B为样品基质中添加相同含量目标化合物的响应值。ME > 1时基质增强效应，ME < 1时基质抑制效应，ME = 1时没有基质效应。从结果可知，烟酰胺存在基质增强效应。
图1 烟酰胺的定量离子对色谱[3]
对得到的数据进行拟合，以各烟酰胺的响应信号强度为纵坐标（y），对应目标化合物的浓度为横坐标（x）进行线性回归计算即可得到烟酰胺信号强度和浓度的线性方程式，从结果来看，方程的相关系数 R2 可达 0.9999，目标化合物的平均回收率在79.1% 到84.5% 之间，相对标准偏差在4.4% 到7.0% 之间，表明该方法回收率和精密度可满足试验要求。
1.2 维生素C
1.2.1滴定法
通过滴定法测量样品中维生素C的含量虽然方便，但由于该活性物质在空气中暴露太久会被氧化，导致测试的结果偏低，因此该方法只能进行简单的相对比较，无法进行实际含量的测定。
取适量某品牌的美白护肤品并溶于 2% 草酸中，在避光条件下充分混匀30 min，过滤后的滤液即可用于滴定，重复三次测量取平均值。由于样品维生素C具有还原性，而蓝色染料 2,6- 二氯酚靛酚具有的氧化性可将样品维生素氧化。又因为该染料会在酸性环境下呈现蓝色，因此当溶液中的维生素C全部反应完全后可以观察到溶液变成红色，最后再根据根据滴定草酸样品所用的蓝色染料 2,6- 二氯酚靛酚溶液的量，结合公式便可计算出护肤品中维生素 C 的含量[4]。
1.2.2荧光分光光度法
使用荧光分光光度法测定样品中维生素C含量所用药品和仪器虽然少，测定结果的准确度也稍微比滴定法高，但测定过程中涉及到的操作较多。
其适量的某品牌护肤品并在加入偏磷酸 - 冰醋酸溶液，充分混匀，加入适量活性炭，剧烈震荡20 min后过滤，再取一定量滤液加入定量的硼酸-醋酸钠溶液，在充分摇匀后静置 10 min，最后将样品稀释到定量浓度即可得到待测样品溶液。按照步骤制定维生素 C 的标准曲线溶液。在样品溶液和标准曲线溶液中分别加入定量的邻苯二胺，试液混合之后在避光条件下反应35 min 后边即可用荧光分光光度法进行测定，重复上述过程3次。由于维生素C可以与活性炭反应，可以被氧化成脱氧抗坏血酸，并与邻苯二胺进行反应生成喹喔啉，最后利用分光光度计在激发波长351 nm和发射波长 432 nm处测定喹喔啉的荧光强度。结合公式便可计算出苹果果肉中维生素C的含量。
1.3熊果苷
可通过高效液相色谱法（HPLC）测定样品中熊果苷的含量。选用某品牌的美白类护肤品作为样品，安捷伦 1260 高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）作为测试仪器。首先先配置供试品溶液，取0.5 g样品于100 mL锥形瓶中，移液管移取50 mL去离子水，然后转至超声波清洗器处超声30 min（250W，频率 40 kHz），维持溶液温度在室温。用去离子水补出剩余的质量，采用0.22
的微孔滤膜进行过滤，即可得到待测样品溶液。同时，取分析纯的熊果苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成 0.2 mg/mL的对照品溶液，即可得到对照品溶液。在仪器方面，采用Shiseido Capcell PAK色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），控制进样量为5
，体积流量为 0.8 mL/min，柱温为 30 ℃，即可测得待测样品溶液和熊果苷标准样品的色谱图（图2中样品为富含熊果苷的雀舌茶样品）[5]。
图2 雀舌茶样品溶液 (A、B)和熊果苷对照品 (C) 色谱图[5]
从结果来看，通过连续测试6次取平均值可以发现熊果苷峰面积的RSD为 0.85%，线性标准回归方程为Y=2.8189X-0.2719 (R2=0.99997)，在浓度范围为50.349 ~ 402.788 μg/mL内呈现出良好的线性关系。
2总结
美白类护肤品因具有烟酰胺、维生素C、熊果苷等活性物质，可在皮肤表面上抑制是制酪氨酸酶的活化，阻断酶的活性而抑制黑素的生成（熊果苷）或是利用活性物质的还原性，直接还原黑色素（维生素C），亦或是阻碍黑素小体在黑素细胞与角质形成细胞间的传递（烟酰胺）。虽然从结果来看各种活性物质都能有美白的作用，但各种活性物质的机理却各不相同。本文中也仅仅讨论了烟酰胺、维生素C和熊果苷等物质，在真实生活中仍需谨慎考虑自身的Fitzpatrick 皮肤分型、试剂与皮肤的生物学机理和个人生活环境（日光强度、温度、湿度等）等多方面综合考虑。
引用文献
[1] 缑卫军, 焦永杰. 国内护肤品发展现状与趋势分析[J]. 精细与专用化学品, 2020, 28(09): 1-5.
[2] 王蓓. 关于美白类化妆品的研究进展[J]. 中国石油和化工标准与质量, 2020, 40(06): 123-124.
[3] 杨玉平, 谢柏艳. 液质联用法同时测定保健食品中维生素B1、维生素B6、烟酸、烟酰胺和咖啡因的含量[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(09): 124-129.
[4] 连敏, 王勇. 苹果维生素C含量几种测定方法比较[J]. 河南农业, 2023(25): 37+50.
[5] 倪芹, 王汝雄, 李俊璇, et al. HPLC法测定雀舌茶中熊果苷的含量[J]. 云南民族大学学报(自然科学版): 1-9.
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研！
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启：ICS2024第十三届光谱网络会议！
推荐收藏！盘点中药材及饮片检测解决方案
