仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
多克隆抗体纯化的原理、流程和方法详解
Ins_bf0c01c3
2023/10/31
私聊
生命科学仪器综合讨论
多克隆抗体纯化原理
是依据抗体的生物学特性,一般通过
Protein A
或
Protein G
的方法从动物血清中纯化抗体。但某些使用场景对抗体的质量要求很高,需要利用抗原亲和层析从总
IgG
抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体,最终获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。
抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。抗血清被收集后,可通过硫酸铵沉淀法对其进行初步纯化,移除许多粘性蛋白,尽可能减少这些杂质对后续亲和层析纯化的影响。不同的纯化方法经常联合使用,用于从血清中纯化高质量的多克隆抗体。
①
Protein A/G
纯化
Protein A
、
Protein G
和
Protein L
是三种细菌蛋白,具有能与抗体高效结合的特性。这些蛋白经过基因工程技术重组表达,常用于不同物种关键抗体类型的亲和纯化。
Protein A/G
纯化是一种快速高效的多克隆抗体纯化方法,其原理是能与不同物种的
IgG
恒定区发生结合,从而除去血清蛋白和
IgM
抗体。应该注意的是,终产品包含总
IgG
抗体和特异性抗体。
义翘神州已生产了
Protein A
和
Protein G
琼脂糖纯化树脂,可用于纯化小鼠
IgG2a/2b/3
、大鼠
IgG2c
、人
IgG1/2/4
和兔
IgG
等多种来源的抗体。
②抗原亲和纯化
在
Protein A/G
纯化步骤后,抗原亲和纯化可进一步用于制备具有特异性高和纯度高的多克隆抗体。这种高灵敏度和高特异性的多克隆抗体适合用于
IHC
和
IF
等免疫学检测实验,即使在较低的稀释比下使用,也不会增加信号背景。
抗原亲和纯化,首先将抗原固定至树脂上,然后目的抗体与抗原发生特异性结合,最后洗脱得到目的抗体,以达到纯化多克隆抗体的目的。与
Protein A
法相比,此方法识别的是抗体的可变区,能高度识别和结合目的抗体,常用于多克隆抗体的纯化。
多克隆抗体的纯化主要包括以下几个步骤:
①收集细胞上清液或培养上清液:多克隆抗体是通过免疫动物(如小鼠、兔子等)产生的,因此首先需要收集包含抗体的细胞上清液或培养上清液。
②蛋白
A/G
层析:将收集到的上清液通过蛋白
A/G
层析柱进行纯化。蛋白
A/G
是常用于捕获免疫球蛋白的亲和色谱基质,可以选择性地结合抗体。
③洗脱:通过改变洗脱缓冲液的
pH
值或盐浓度等条件,将结合在蛋白
A/G
柱上的抗体洗脱下来。
④纯化筛选:使用各种纯化筛选方法,如凝胶过滤、离子交换层析、尺寸排阻层析等,进一步去除杂质并提高抗体的纯度。
⑤浓缩和储存:对纯化后的抗体进行浓缩处理,通常使用离心浓缩或超滤浓缩等方法。最后,将抗体在适当的储存缓冲液中保存,确保其稳定性和活性。
更多
多克隆抗体纯化
详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-purification
相关话题
1
抗体纯化的方法及步骤
2
单克隆抗体技术基本原理及流程详解
3
蛋白过镍柱纯化的科学原理及详细步骤
4
蛋白标签的作用及其常见类型优缺点详解
5
大肠杆菌表达系统和酵母表达系统:各自的优缺点
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些?
资料
2024/02/27
【转帖】常吃海带让你秀发飘飘
2008/09/04
【诚征版主】流式细胞仪新版开张,诚征版主!
2006/06/30
实验室纯水制备小常识
分享
2012/04/28
【每日一题14】【有奖问答】
讨论
2012/01/02
《细胞》:2011年度五大研究发现
分享
2012/01/12
【求助】多肽类检验
2013/04/25
解决液氮罐温度过低引起的设备结霜问题
原创
2023/12/13
【我们不一YOUNG】第一次做生物实验
原创
2024/07/08
【我们不一YOUNG】蛋白质浓度测定方法大全
原创
2024/07/06
【我们不一YOUNG】HTS酶抑制剂筛选的流程介绍
分享
2024/07/05
太空微重力环境下癌症药物研究系统进口航空航天随机定位微重力模拟仪AJ001X
分享
2024/07/05
弱光成像或体内发光实验Atik TE科研制冷CCD相机
原创
2024/07/05
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
‘有奖问答’对错题’:用抽样方案(30,0)对产品批进行连续验收,当批不合格品率为1%时,方案的接收概率为73.97%,则平均检出质量为( )。
讨论
2024/07/05
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
如何做好体系工作?
分享
2024/07/01
多人主检的报告,检测审核应该怎么签字
求助
2024/07/05
EI源的灯丝镉厂家通用吗?
求助
2024/07/03
辽宁沈抚新区--生命之环
原创
2023/10/31
色谱柱更换之后问题二:不能自动进样
第十六届原创
2023/10/31
不同环氧树脂对水稻叶片超微结构的影响
第十六届原创
2023/10/31
色谱柱更换之后问题一:GC设置与运行方法不一致
第十六届原创
2023/10/31
F1等级砝码检定的主要步骤
第十六届原创
2023/10/31
计量标准档案管理的基本要求
第十六届原创
2023/10/31
Mi-Wave平衡相位检测器
仪器微课堂
2023/10/31
实验室如何来规范物资采购管理
第十六届原创
2023/10/31
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...