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抗体纯化的方法及步骤

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2023/10/31

生命科学仪器综合讨论

抗体纯化的原理是依据抗体的生物学特征，如抗体分子的电荷、大小、疏水性等，选用合适的方法将目标抗体分子从初始混合物中分离纯化出来。

抗体纯化方法包括亲和层析法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法和疏水作用层析法等。选用何种纯化方法取决于抗体的来源、时间、成本以及抗体的最终用途等。

抗体纯化的方法及步骤

抗体是一类免疫蛋白，可识别并结合特定抗原，在生物研究以及临床应用中，纯化得到高质量的抗体十分重要。

一、凝胶过滤层析法

凝胶过滤层析法的原理是基于抗体分子的不同大小，利用不同孔径的凝胶过滤介质将目标分子（抗体）与较大分子（如蛋白质等杂质）分离开来。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的凝胶柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，较大分子无法通过凝胶柱而流出。

3. 目标抗体分子大小适中，可通过凝胶柱并被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从凝胶柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

二、亲和层析法

亲和层析法的原理是利用抗体分子与抗原之间的特异性结合来实现目标抗体的纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先包含特异性结合配体(如蛋白A、蛋白G等)的亲和层析柱中。

2. 目标抗体与配体之间发生特异性结合。

3. 使用洗脱缓冲液将非特异结合的组分洗脱掉。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从亲和层析柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

三、离子交换层析法

离子交换层析法的原理是利用目标抗体分子与离子交换柱中固定的离子之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的离子交换柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使与固定离子相同电荷的分子无法通过离子交换柱而流出。

3. 目标抗体由于表面电荷不同，能够通过离子交换柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变pH或盐浓度等条件，将目标抗体从离子交换柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

四、逆向相色谱法

逆向相色谱法的原理是利用目标抗体分子与逆向相色谱柱中固定的疏水基团之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的逆向相色谱柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱而流出。

3. 目标抗体由于表面疏水性不同，能够通过逆向相色谱柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变溶剂极性等条件，将目标抗体从逆向相色谱柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

抗体纯化是一项关键技术，在抗体制备过程中十分重要。每种方法都有其特点和适用性，义翘神州可根据您的具体需求选择合适的抗体纯化方法，保证交付高质量、高纯度的纯化抗体。

更多抗体纯化详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-purification

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