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膜蛋白表达常见问题解答
Ins_bf0c01c3
2023/11/24
私聊
生命科学仪器综合讨论
膜蛋白表达是生物学和医学领域中一个重要的研究课题,但很多人对此并不十分了解。本文将为大家解答关于膜蛋白表达的常见问题,帮助大家更好地理解这一领域的基本概念、研究方法和应用前景。
Q1:
义翘神州膜蛋白
VLP
平台是利用什么系统表达的?
A1:VLP
平台我们采用的是
HEK293
细胞表达的,获得的蛋白更接近天然构象,更有利于客户进行后续的研究和应用。
Q2:
膜蛋白
VLP
产品可以做体内生物素标记吗?
A2:
可以的,可以选择在蛋白上加
AVI
标签或者选择对
VLP
本身生物素化,体内定点生物素标记,具体根据您的需求选择。
Q3:
抗体与抗原结合在胞外,全长的多次跨膜蛋白意义大吗?
A3:
多次跨膜蛋白在细胞膜上多次跨越,在胞外形成多个胞外区,比如
Claudin18.2
、
CD20
、
CD133
都有两个
ECL
(
extracellular loops
),每个
ECL
都有特定功能甚至会相互影响。全长可以保证蛋白构象天然完整,而且
ECL
展现完全,帮助筛选靶向多次跨膜蛋白抗原的理想抗体。给大家看下面两张图,全长的意义就显而易见了,结构完整,功能上也有保证。这么看,全长也不是我们
ACRO
一直在强调全长,而是客户需要全长的多次跨膜蛋白,满足客户需要的产品是
ACRO
的初衷。我们也比较过,单独的胞外
ECL
区蛋白活性确实比全长蛋白差。
Q4:
相比其他非
Nanodisc
产品,
Nanodisc
有什么好处吗?
A4:Nanodisc-
膜蛋白与去垢剂
-
膜蛋白相比,的确有不同。首先,原理上,
Nanodisc
膜蛋白是将膜蛋白除去去垢剂之后组装在类细胞膜的
Nanodisc
上。其次,应用上,我们都知道,去垢剂会溶膜从而对细胞产生损伤,
Nanodisc
版本的膜蛋白因不含去垢剂,可以进一步扩展到用于细胞试验、
CAR
阳性率检测,应用范围是更广的。另外,我们
ACRO
使用的
Nanodisc
技术已经获得专利持有方的授权,在研发过程中是可以放心使用的。
Q5:VLP
和
Nanodisc
平台下的多次跨膜蛋白怎么去除非特异抗体?
A5:
非特异抗体的影响不容忽视,使用
VLP
和
Nanodisc
平台下的膜蛋白的确可能产生非特异抗体,我们这两个平台均有对应的用于反筛去除非特异抗体的空白对照:
VLP-
膜蛋白有同型对照产品空白
VLP
;
Nanodisc
有两款
MSP1D1
空白产品,其中一款
MSP1D1
作为
tag free
膜蛋白的同型对照,如果使用生物素化的
Nanodisc-
膜蛋白,另一款
MSP1D1
可以作为同型对照。
Q6:VLP
相关蛋白能适合冻干保存吗?
VLP
的用于免疫有什么注意事项?比如能否乳化,对佐剂类型有没有要求?
A6:
包膜
VLP
产品我们目前都是液体
-70
°
C
保存,干冰发货;非包膜
VLP
我们是冻干保存的。
VLP
免疫主要是需要注意佐剂量的选择,因为
VLP
本身是可以增强免疫原性的,跟常规蛋白不同。
Q7:VLP
和
Nanodisc
产品稳定性如何。冷冻长时间保存可以吗?
A7:VLP
和
Nanodisc
本身的稳定性是很好的,是可以在
-70
°
C
长期保存的。
Q8:
如何确认
VLP-Claudin18.2
表达的是该目标蛋白,纯度如何评估?产品上的电镜图片,怎么确认颗粒上有该蛋白
?
A8:Claudin18.2-VLP
我们会通过
anti-Claudin18.2
特异性的抗体进行检测验证。纯度我们通过电泳
/HPLC/DLS
电镜进行评估。常规负染电镜因分辨率低是没办法看到
VLP
上是否有
Claudin18.2
的。
义翘神州搭建了基于
HEK293
表达系统的
VLP
(
virus-like particle
)技术平台,能够将目的膜蛋白完整展示在
VLP
表面,使其能够像普通蛋白一样进行检测,已上线的
Claudin 18.2
、
GPRC5D
、
Claudin 6
等产品均展示出良好活性。义翘神州目前可以为客户提供
膜蛋白定制服务
,助力药物研发进程。
多次跨膜蛋白开发技术平台:
https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein
VLP
形式的膜蛋白表达服务:
https://cn.sinobiological.com/services/membrane-protein-expression-service
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