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微生物涂抹技术

冰饼兵

2024/03/02

食品毒素/微生物检测

微生物沉降涂抹作业指导书
1 参考标准：
GBT 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法
GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准
2 涂抹操作（菌落总数、大肠菌群）：
2.1配制药品：生理盐水（试管中+棉签）或直接采购无菌涂抹棒、PCA、VRBA
2.2培养基灭菌：PCA------121℃，15分钟；VRBA------无需灭菌，煮沸即可，生理盐水------121℃，15分钟
注：灭菌后的生理盐水需冷却彻底后才可以进行涂抹操作
2.3涂抹操作：
2.3.1取待测物（人员手部、操作案板、工器具表面等）涂抹面积为5*5cm2；
2.3.2涂抹后将与手部接触的棉签棒的部分折掉；
2.3.3检样作出2~3个稀释度：
1mL（原液）
→无菌平皿中（10-1），2板菌落，2板大肠=4板
→9mL灭菌生理盐水中（10-2），2板菌落，2板大肠=4板
→于10-2试管中吸取1mL，加入9mL灭菌生理盐水中（10-3），2板菌落，2板大肠=4板
注：菌落倒入配置后灭菌的PCA，15~20mL，大肠倒入配制后灭菌的VRBA，15~20mL
2.3.4培养：待琼脂凝固后放入培养箱中，平皿倒置（除霉菌PDA外，其余平皿均倒置培养），36±1℃，大肠培养24小时，菌落培养48小时。
2.3.5查板计数：于N+1天，查大肠结果，N+2天，查菌落结果。
3沉降菌（菌落总数、霉菌）
3.1配制培养基：PCA、PDA；
3.2倒板：按照计划沉降点数，计算所需培养基及倒板的数量，PCA约20mL/板，PDA不得少于20mL/板（培养时间长，琼脂少就干巴了）；
3.3沉降：车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min（操作时，周围不得有人员走动，防止结果不准）；
3.4收板：将手部用75%酒精消毒后再收板，切忌触碰到平板内琼脂
3.5培养：PCA,36±1℃,培养48小时?DA,28℃,培养5天；
3.6查板计数：于N+2天，查菌落结果，N+5天，查霉菌结果。

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