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人鼠嵌合型单克隆抗体制备原理及优点
Ins_bf0c01c3
2024/03/13
私聊
生命科学仪器综合讨论
人
-
鼠嵌合抗体:利用
DNA
重组技术将鼠源单抗的轻链、重链可变区插入含有人抗体恒定区的表达载体中,转化哺乳动物细胞进行表达所产生的单克隆抗体。人
-
鼠嵌合抗体的人源化程度可达到
70%
,完整的保留了鼠源单抗的可变区及亲本活性,人抗体恒定区的引入则降低了免疫原性。
人鼠嵌合抗体基本原理
是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠
VL
(轻链可变区)和
VH
(重链可变区),经过基因重组分别与人的
CL
(轻链恒定区)和
CH
(重链恒定区)区基因按照一定的方式相拼接,克隆到表达载体中构建鼠
/
人轻重链基因表达载体,并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体。
对于其他类型的人源化抗体,其优势在于,技术路线简单,易于操作;抗体完整性好,在体内滞留时间长;鼠源抗体的亲和力和特异性都得到保留,在临床上得到了良好的反应。
构建人鼠嵌合抗体主要包括:克隆鼠抗体可变区基因,钓取人抗体恒定区基因,拼接鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因以及构建载体和宿主细胞。
人鼠嵌合型单克隆抗体制备优点:
①不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力,而且使鼠源性成分减少
70%
左右;
②其人源
Fc
段能有效介导生物学效应功能,如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(
Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity
,
ADCC
)、补体依赖性细胞毒作用(
Complement dependent cytotoxicity
,
CDC
)等;
③能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等,以利用其不同的生物学特点及理化特性;
④由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区,缩短操作和研制周期;
⑤操作相对简单。
嵌合抗体
主要有三种类型:
1
、嵌合
IgG
抗体
目前嵌合抗体的研究主要集中在嵌合
IgG
(
Immunoglobulin G
)抗体。其构建基本原理是从生产某种鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中得到目的抗体
V
区(
variable region
)基因,再与人类的
C
区(
constant region
)基因重组并克隆到合适载体中,然后转入受体细胞表达(如图
1
)。
在构建嵌合抗体时应根据不同目的选择不同的
C
片段。这是因为不同类型的人抗体
C
区与补体和
Fc
(
fragment crystallizable,Fc
)相互作用的能力以及引发细胞溶解的功能不尽相同。在体内免疫系统中,抗体的
Fc
段和效应细胞相互作用,发挥特异的生物学功能。例如
IgE
(
Immunoglobulin E
)可介导炎症反应等,
IgM
活化补体的能力强,
IgG1
的补体活化能力比
IgG3
强,且在
ADCC
作用(
antibody dependent cell mediated cytotoxicity
)触发能力上也比
IgG3
强。在与
Fc
受体的结合能力上
IgG1
和
IgG3
比较强,
IgG4
次之,而
IgG2
几乎检测不到。
2
、嵌合
Fab
和
F(ab')2
抗体
嵌合
Fab
(
antigen-binding fragment, Fab
)和
F(ab')2
(具有两个抗原结合表位的片段)抗体的优势就是渗透力强。
Fab
嵌合抗体制备原理为:将功能性抗体
L,H
链的
V
区基因与人的轻链
k
和
H
链
CH1
进行重组,克隆到表达载体中,在转入宿主细胞表达。不过对于大多数该类型的抗体来说,由于亲和力较低,分子量小,容易被肾小球过滤而从血液中消失,因此大多数不适合单独使用于临床治疗。
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