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【分享】氨基柱的使用和保养

核桃

2007/05/11

液相色谱（LC）

氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

柱效检测：

我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相：
10％乙酸乙酯＋90％正己烷流速1.0
标准溶液：
乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯
检测波长254nm

这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。

氨基柱的使用：

需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

氨基柱的清洗

简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。

平时在正相条件下使用：

首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
平时在反相条件下使用：

缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。

用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。

这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等LUNA氨基柱的使用方法

1. 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA
氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。

2. 正相使用

2.1 新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。

2.2 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。

2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。

3 反相使用

3.1 先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。

3.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。

3.3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。

3.4 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH 3.0-7.0

3.5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

3.6 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

4 色谱柱的冲洗：简单说起来，正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。

5 色谱柱的保存

5.1 正相使用时，将柱子冲洗干净后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。

5.2 反相使用时，如短期不用，可用甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。

6 色谱柱的再生

6.1 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。

6.2 方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：

95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。

6.3 方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：

95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水

再走流动相即可

分
该帖子已被版主-xue2009加2积分，加2经验;加分理由:鼓励分享经验

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核桃

第1楼2007/05/11

色谱柱最基础的一种分类是根据柱填料类型分为正相柱反相柱

正相柱多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶流动相为非极性溶剂。

反相柱主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，流动相为极性溶剂

比较有意思的是键合—CN，-NH2等官能团的一类所谓正相柱, (甚至有些的特殊填充的硅胶极性柱) 在反相条件下的使用这对于不少难以在反相柱达到分离分析目的的情况下变得非常有用.

在反相条件下这些色谱柱的色谱分离规律与常规反相柱有显著差异目前对改类色谱柱的分离规律研究极少根据本人使用经验这儿以保留时间随着有机相比例的变化为例说明改类色谱柱特殊分离性能一般反相色谱柱与有机相比例呈简单线形即提高有机相比例保留时间变短而在这些正相柱上的保留时间与有机相比例呈现抛物线型即最短的保留时间有一最适值当然这只是本人目前所测定的10几个非常大极性物质的测定结果尚需更广范围的实验证实

对保留时间的影响因素中盐浓度 ph值的影响非常显著这可能与分析物较大极性有关也有可能与改类色谱柱的保留机理有联系

0

剑神一笑

第2楼2007/05/11

分享是一种美德

0

lojik2000

第3楼2007/05/12

谢谢楼主分享

0

olifor2010

第4楼2010/07/14

[quote]原文由 核桃(pjs123) 发表:色谱柱最基础的一种分类是根据柱填料类型分为正相柱反相柱

正相柱多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶流动相为非极性溶剂。

反相柱主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，流动相为极性溶剂

比较有意思的是键合—CN，-NH2等官能团的一类所谓正相柱, (甚至有些的特殊填充的硅胶极性柱) 在反相条件下的使用这对于不少难以在反相柱达到分离分析目的的情况下变得非常有用.

在反相条件下这些色谱柱的色谱分离规律与常规反相柱有显著差异目前对改类色谱柱的分离规律研究极少根据本人使用经验这儿以保留时间随着有机相比例的变化为例说明改类色谱柱特殊分离性能一般反相色谱柱与有机相比例呈简单线形即提高有机相比例保留时间变短而在这些正相柱上的保留时间与有机相比例呈现抛物线型即最短的保留时间有一最适值当然这只是本人目前所测定的10几个非常大极性物质的测定结果尚需更广范围的实验证实

对保留时间的影响因素中盐浓度 ph值的影响非常显著这可能与分析物较大极性有关也有可能与改类色谱柱的保留机理有联系[/quo非常感谢！正研究CN的保留规律呢！

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qqwdxbz

第5楼2010/09/30

感谢!正在用氨基柱，也感觉得盐浓度对保留时间影响很大

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