氨基柱测5009.8葡萄糖果糖这个方法变更，峰分离不开

应助达人

五个峰连着，分离度很低。流动相之前是按照国标的配置，后面查资料说增加有机相可能会好点。然后就把乙腈：水的比例增加到了85:15，然后分离度还是很低。又怀疑是柱效问题，恢复柱效之后也没有好转。请问老师们还有什么可以优化的地方吗?
答：楼主，对于反向色谱，流动相中有机相比例越高，出峰越快，在分离度不好的前提下，增加有机相只会适得其反。标准上用的是氨基柱，4.6 mm?250 mm，粒径5μm ，流动相初始比例为乙腈 水=70 30(体积比)，理论上按照标准方法是能分开的，楼主的色谱柱柱效可能不太好。给楼主两个建议，第一，在现有柱子下优化流动相比例，降低初始有机相比例，采用梯度洗脱方法，第二，更换柱效更高的色谱柱，比如粒径3.5微米的。

反正我们以前用的氨基柱柱效特别容易不好，有的用一次就不行了，你可以换一个柱子试试，或者改变一下柱子规格。

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应助达人

可以试试糖分析专用柱