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石蜡切片制作过程有哪些步骤
检测人王大锤
2024/05/09
私聊
石油化工检测
石蜡切片操作步骤:
1、取材
2、固定
3、脱水:30%--50%---70%(每步60分钟)---85%---95%--100%---100%(每步30钟)。
4、透明:转入1/2二甲苯+1/2无水酒精混合液20ml透明1h,纯二甲苯20ml透明1h,再用纯二甲苯20ml透明40min,并回收各液。
5、浸蜡:
(1)将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中,每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行;
(2)将材料放入溶解的纯蜡中,时间为30分钟,该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。
6、包埋
(1)将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中,石蜡溶解后应过滤后使用,以免含杂质影响切片;
(2)材料放入纸船,并摆好在蜡中的位置,如果包埋的组织块较多,应进行编号;
(3)将纸船放置在冷水上加速冷却过程。
7、切片
(1)修整:用刀片修成方形或长方形蜡块;
(2)以少许热蜡液,将蜡块底部粘附于小木块上,以少许石蜡融化在蜡块边缘,加强粘附的强度;
(3)木块粘附于切片机上,调整切片机,使蜡块切面与切片刀刃平行;
(4)切成连续的蜡带,切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量,可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度,也可在冰箱中放置一段时间;
(5)分割蜡带,分开的蜡片放在45℃温水上,使蜡片展开。
8、粘片与烤片
(1)可用粘片剂防止蜡片滑脱,但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色,影响观察,实验表明,载玻片洗的足够干净,一般不会滑片;
(2)用载玻片捞取展开后的蜡片,调整蜡片的位置使位于载玻片中央,自然干燥。
9、脱蜡与醇化
(1)将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟,使石蜡完全溶解,共2次;
(2)溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中,每级10分钟;
(3)再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化,每级10分钟。
10、染色
(1)将切片放入番红染液中30分钟,番红染色后,将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱,每级10分钟;
(2)洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟;
11、脱水、透明与封片
(1)染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱,每级10分钟;
(2)洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明,每级10分钟,出现浑浊表示脱水不彻底,需重来;
(3)滴1-2滴中性树胶,将洁净的盖玻片倾斜放下,封片,镜检,选择好的贴上标签,性切片制作完成。
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