液相流动相乙腈比水保留时间不稳定

应助达人

流动相乙腈比水25比75，每次测定保留时间相差很远，楼主这个流动相配制问题不大，配制完成后需要对流动相进行超声脱气，然后放上仪器进行purge，将管路里的气泡全部排出。如果出现保留时间飘忽不定的情况，那考虑仪器没有平衡好，或者是管路里有气泡，建议楼主从这两块下手排查。另外，楼主的洗脱程序是什么样的？有时候洗脱程序设置不合理，也会造成这种情况。

应助达人

每次错的有多远？给个数据，错的有规律吗？时间是提前？还是拖后？
你是不是每次都抽滤很长时间？是不是导致乙腈减少了？

应助达人

你是用量筒量取250ml乙腈倒到瓶子后，再量750ml水倒紧瓶子，还是取280ml乙腈，再加水到1 L的？每次配制方式是否一样？另外也要充分排空，平衡系统，压力稳定后再进样。也要确保水的纯度，乙腈别被污染了。
如果是多元泵，还要注意其他通道微漏。
可以调用多次保留时间不同的样品的压力数据，对比一下。

液相是双通道的吧？用仪器软件设置好比例，两个通道装好脱气了的纯水和抽滤过的乙腈，让仪器控制混合就可以了，仪器控制输出的比例比手工混合要准确也更稳定。就算要手工混合也可以，混合一次也够用一轮，同一瓶流动相单通道做，不至于差异大的。如果纠结两次手工混合的保留时间差异，那就有点过头了，没必要吧

应助达人

如果是用仪器双通道在线混合的，观察一下压力是否稳定，分别测一下两个通道的实际流量，也可以预先混合用单通道观察两次。

乙腈容易自聚，乙腈的质量会对保留时间产生影响。