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【我们不一YOUNG】+水源性致病微生物检测水样前处理方法之富集培养法

memory光阴

2024/07/18

前处理综合讨论

富集培养法是采用培养的方法对水样中目标微生物进行增殖,以达到富集的目的。根据微生物呼吸类型,富集培养法可分为好氧培养与厌氧培养。但是大多数微生物(大多数细菌、霉菌、放线菌等)需要有氧条件下进行培养,培养的方法主要有:(1)固体培养法——在培养基表面(如斜面与平板表面)完成微生物增殖培养;(2)液体培养法——把微生物接种到液体培养基中进行增殖培养。Wang等开发了经过10～24 h培养后用PCR检测水中大肠埃希氏菌和肠球菌的方法,检出限可达到0.2 MPN/mL。Strakova等通过一种基于离心、细菌运动和选择性培养条件的新型培养方法,对废水和地表水中的耐热弯曲杆菌进行分离,在44%的样品中检出弯曲杆菌阳性。从现有的研究来看,富集培养法在致病菌的富集浓缩中应用较多,对病毒和原虫的富集浓缩常采用的是鸡胚及鸡胚器官培养和细胞培养的体外培养模型,但这种方法目前主要应用于药物的开发,在水体中的应用较少。

鉴于细菌培养过程中大部分选择性培养基只能培养特定的目标菌株,无法满足多种致病菌高通量检测的需求,开发多重选择性培养液以实现多种致病菌的同时培养,目前成为了一个新的研究热点。Suo等开发了一种可以同时培养大肠埃希氏菌O157:H7、沙门菌属和单核细胞增生李斯特氏菌3种致病菌的SEL(Salmonella, E. coli O157:H7 and L. monocytogenes) 培养液, 在1～100 CFU/mL接种浓度下,3种目标菌株经过1 h非选择性恢复期, 在37 ℃选择性培养20 h后均可富集到1×108～1×109 CFU/mL。Qu等开发了一种可以同时培养沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单核细胞增生李斯特菌的SSEL (Salmonella, Staphylococcus aureus, E. coli O157:H7and L. monocytogenes) 培养液, 在10～100 CFU/mL接种浓度下,4种目标菌体37 ℃培养18 h后均可富集到1×105 CFU/mL。

富集培养法的优点是可以选择性培养目标菌株,同时可排除死菌和其他杂质的干扰(如非腐殖质生物、腐殖质等),但该方法培养过程耗时且只适用于可培养的细菌或真菌的富集,限制了其在致病微生物检测前处理过程中的研究和应用。

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