【原理】:
样品经甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化,黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上,此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性,用水将免疫亲和柱上杂质除去,以甲醇通过免疫亲和柱洗脱,再经光化学衍生器柱后衍生,以提高检测准确性。
【主要试剂及耗材】:
ToxinFast®气控操作架:含气泵
ToxinFast®黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml
ToxinFast®光化学衍生器
ToxinFast®玻璃微纤维滤纸 :直径11cm、孔径1.5μm
ToxinFast®玻璃试管:直径12mm,长75mm,无荧光特性
ToxinFast®注射器:10ml、20ml
【检测步骤】:
样品粉碎——提取——洗脱液进样、亲和柱净化——化学衍生——检测数值(做过液相的都知道这些步骤的,在这里就简单提一下,主要是为什么用到气控操作架和化学衍生器在下面解释一下!)
气控操作架的使用说明:
在样品粉碎后需要过亲和柱净化,也就是怎么方便亲和柱使用操作的问题,气控操作架能有效地提高这个环节的工作效率(很方便操作的),如图示:
1 连接组装好的气控操作架,将免疫亲和柱、注射器针筒与气控操作架连接,如图所示;
2 将处理后的溶液上样;
3 调节空气泵旋钮以控制流速,使样液以1-2d/s的速度流出;
4,待样液完全排干,用去离子水或蒸馏水以2-3d/s的流速洗涤两次,每次10ml;
5,待液体完全排干,将样品瓶置于亲和柱下方,上样1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。
以上操作步骤是用免疫亲和柱--高效液相法检测中药中黄曲霉毒素的必经步骤,如使用气控操作架就能很好的固定亲和柱并以可控流速操作,既高效也能使操作误差减到最小。
华安麦科ToxinFast®气控操作架具有6支可控支流,能同时有效检测多个样本,还适用于
1ml和3ml多种规格免疫亲和柱。
为什么使用光化学衍生器?
由于黄曲霉具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性,因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测,但是同时黄曲霉毒素中的B1、G1由于其在含水的流动相中容易产生荧光淬灭,因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素。
衍生的方法也很多:有柱前的,柱后的,在线的,由于在线的柱后光化学衍生有明显的优势,所以现在被增补为药典的检测方法,优势主要在于(无需任何化学试剂、对人员无伤害;无需人员直接操作、避免误差; 无需担心衍生液腐蚀检测器)
大家看完上图肯定也能感受到在线光化学衍生的效果,希望这个分享可以给大家做黄曲霉毒素检测时提供小小的帮助。