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高效液相色谱技能篇|关于如何积分的小知识
p3203140
2024/09/09
私聊
液相色谱(LC)
高效
液相色谱
(HPLC)的积分是色谱数据处理中的一个重要步骤,它涉及对色谱图上的色谱峰进行量化分析,以确定各个组分的含量。积分过程包括峰识别、峰面积计算、峰高的测量以及结果的解释等。积分的准确性对于实验结果的可靠性至关重要。
在HPLC分析中,色谱图上的每个峰代表一个特定的化合物或组分。积分算法通过比较峰的斜率与一个固定的阈值来识别峰的起点和终点。Empower软件提供了传统和ApexTrack两种积分算法,用户可以根据需要选择不同的积分事件。这些事件包括允许负峰、指数曲线切削、强迫垂线、按峰或时间强迫基线、禁止积分等,每种事件都有其特定的应用场景和参数设置。传统积分算法和ApexTrack积分算法是两种常见的积分方法。传统积分算法通过比较峰斜率与阈值来识别峰,而ApexTrack算法使用峰顶点作为特征数据点来检测峰,并利用色谱图的二阶导数来检测峰,这种方法能够检出各种大小的色谱峰,包括共洗脱峰以及倾斜或漂移基线上的峰。
此外,积分类型也很重要,通常不建议手动积分,因为手动积分可能会引入主观性和误差。如果必须进行手动积分,应该按照建立的SOP进行,并保存好记录。在审查色谱图是否使用了手动积分时,可以通过检查积分方法和记录来确定。(具体可以参见
手动积分
)
01.常见的积分手段
a.垂直切割法(Forced Vertical Cut):在两峰的峰谷到水平基线之间添加一条垂直线,可以通过垂直切割将相邻的峰分开
b.平滑曲线法(Curve Smoothing):在色谱图上对基线或峰进行平滑处理,以减少噪声的影响并改善峰的识别
c.切线切削法(Tangent Skimming):在峰的
肩部或峰谷处使用切线进行积分,以排除邻近峰的干扰。
d.峰谷到峰谷(Valley-to-Valley):在相邻峰之间的最低点(谷)进行基线设置,以确保峰的完全积分。
02.各国法规上的相关要求
a.美国药典:未与主峰完全分离的任何杂质的峰面积的积分最好通过切线撇取法进行。
b.欧洲药典:任何未与主峰完全分离的杂质峰面积的积分通常通过切线撇取法进行。
c.中国药典:默认为垂直积分
为什么说中国药典是默认垂直积分呢?
答:在系统适用性试验部分,提到了峰谷比的计算,这需要使用垂直积分方式来实现,而不是切向积分方式。如果采用撇除法,那这个参数的意义就没有了。
额外说一下:
根据《Introduction To Modern Liquid Chromatography》一书里面提到的,作为经验法则:如果较小峰的峰高<10%的较大峰的峰高,就应该用平滑法做积分运算;如果较小峰的峰高>10%的较大峰的峰高,那么垂线分割法就更加适用。
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