【金秋计划】固相萃取不同模式的操作方法

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2024/09/11

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固相萃取（SPE）是一种高效的样品预处理技术，通过不同的分离模式来适应不同极性目标化合物的分离和富集。主要的分离模式包括反相固相萃取和正相固相萃取，此外还有离子交换萃取和免疫亲和萃取等。以下是这些模式的操作方法：

1. 反相SPE
- 吸附剂: 非极性或弱极性，如C18、C8键合硅胶。
- 流动相: 水或水-有机溶剂。
- 作用机理: 非极性相互作用。

- 操作步骤:
①活化：先有机相，后水相；
②上样：大比例水相；
③淋洗：适当比例有机相；
④洗脱：大比例有机相。

2. 正相SPE
- 吸附剂: 极性键合相，如硅胶或硅胶键合NH2、CN、Diol，或硅藻土。
- 流动相: 非极性和极性有机相搭配。
- 作用机理: 极性-极性相互作用。

- 操作步骤:
①活化：先强极性有机相，后弱极性有机相
②上样：弱极性有机相
③淋洗：适当比例强极性有机相
④洗脱：强极性有机相

3. 离子交换SPE
- 原理: 利用离子交换树脂对样品中带电离子的吸附。离子交换模式包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换、弱阴离子交换。

- 操作:
离子交换模式（强阳，弱阴）
①活化：先有机相，后水相（酸性）
②上样：大比例水相（酸性）
③淋洗：适当的有机相
④洗脱：大比例有机相（碱性）

离子交换模式（强阴，弱阳）
①活化：先有机相，后水相（碱性）
②上样：大比例水相（碱性）
③淋洗：适当的有机相
④洗脱：大比例有机相（酸性）

4. 免疫亲和SPE
- 原理: 利用特异性抗体或抗原与目标分子的特异性结合。

- 操作:
- 活化:
特定条件下的抗体/抗原预激活。
- 上样:
样品与抗体/抗原结合。
- 洗脱:
使用特定条件（如改变pH或添加竞争性配体）释放目标分子。

在所有模式中，关键步骤包括活化、上样、淋洗去干扰物质、以及洗脱和收集分析物。选择合适的溶剂、控制流速、以及优化洗脱条件对于提高目标化合物的回收率和纯度至关重要。每种分离模式的选择和优化都需基于目标化合物的化学性质和样品基质的特点，需要根据经验和实际样品情况进行选择。

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