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【金秋计划】+液相色谱峰保留时间延长，怎样解决??

memory光阴

2024/09/13

液相色谱（LC）

1、流速降低

检查并重新设置流速；检查泵是否有气泡；检查泵密封垫是否渗漏，以及单向阀和其它系统渗漏。

2、流动相组成改变

检查系统是否有漏液点；排除系统气泡；补足溶剂瓶；确保梯度系统比例正确；预混合流动相进行等梯度洗脱；流动相组成的问题。在反相色谱中，保留因子k和流动相中有机相的比例是成指数关系的。通常，有机相变化1%，保留时间会变化5%-15%，一般是10%。pH变化0.1会导致保留时间变化10%，所以要准确的测量pH，并且要校正好pH计，在反相色谱中随着pH的增加，酸性化合物保留时间缩短，而碱性化合物延长；离子对试剂的浓度会影响离子型化合物组分的保留时间。带有和离子对试剂相反电荷的分析物的保留时间会缩短，带同样电荷的会延长。正相色谱的保留时间对流动相中的极性成分非常敏感，任何情况下水都是一个麻烦，使用半饱和水的非极性溶剂比如正己烷和二氯甲烷来避免这个问题。

3、键合相流失

对于常用硅胶型色谱柱，要保持流动相pH2~8之间；对于极高pH（>10）或极低pH（<2）的工作，使用高稳定性固定相，聚合物或高稳定性固定相柱。

4、硅胶填料的活化位点

使用流动相改性剂;流动相中加竞争碱;固定相用更高覆盖度的填充料。

5、温度降低

控制柱温。通常温度每变化1℃保留时间变化1%-2%。一般情况下影响没有那么大，显然这种问题用柱温箱就可以避免。

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