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反相高效液相色谱法测定食品中维生素A和E的实操技巧与故障排除
勤能补拙,拙能生巧,我也是
2024/09/20
私聊
原创大赛公告
反相高效
液相色谱
法测定食品中维生素A和E的实操技巧与故障排除
一、操作要点
样品处理
首先,得把样品里的维生素A和E给提取出来。这一步通常要用到皂化处理,就是用碱把样品中的脂肪给分解掉,留下维生素A和E。然后,再用有机溶剂把这些维生素从样品中提取出来。
提取过程中要注意,使用的有机溶剂一定要纯净,不能含有杂质,否则会影响检测结果。
色谱条件设置
色谱柱一般用C18反相柱,这种柱子对维生素A和E的分离效果比较好。
流动相一般用甲醇和水,比如88:12的比例,流速控制在1.0ml/min左右。
检测波长一般选294nm,这个波长下维生素A和E的吸收效果最好。
进样量一般用10μL,进样前要确保样品溶液过滤干净,避免堵塞色谱柱。
数据分析
用高效
液相色谱仪
检测后,会得到一系列峰。根据峰的面积和保留时间,可以计算出样品中维生素A和E的含量。
这里可以用外标法或者内标法进行定量分析,具体方法根据实际情况选择。
二、故障排除
峰形不好
如果发现峰形拖尾或者分叉,可能是色谱柱污染了。可以尝试用强溶剂冲洗色谱柱,或者更换新的色谱柱。
还有可能是流动相比例不合适,可以微调一下甲醇和水的比例试试。
检测不到峰
首先检查样品是否提取完全,提取过程中有没有损失。
再检查检测器是否正常工作,波长设置是否正确。
最后检查进样针有没有堵塞,样品溶液是否过滤干净。
结果重复性差
检查仪器是否稳定,可以做几次空白试验看看结果是否一致。
再检查样品处理过程是否一致,每次提取和进样的量是否准确。
最后检查数据处理过程有没有误差,尽量使用自动化软件进行数据处理。
总之,反相高效
液相色谱
法测定食品中维生素A和E的含量虽然步骤繁琐,但只要掌握好操作要点,注意细节,就能得到准确可靠的结果。
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