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高效液相色谱检测茶叶中茶多酚的操作要点

小电子PCB

2024/10/09
小电子

原创大赛公告

（一）样品制备
1. 提取
首先要把茶多酚从茶叶里提取出来。可以把茶叶磨碎，越细越好，这样能让茶多酚更好地被提取。然后用合适的溶剂，像70%的乙醇溶液就挺常用的。按照一定比例，比如说1克茶叶加10 - 20毫升溶剂，把茶叶粉末放到溶剂里，在水浴锅里加热，温度大概60 - 80°C，加热个1 - 2小时，期间还得不时搅拌一下，让茶多酚充分溶解在溶剂里。
2. 过滤与净化
提取完了就得过滤，用滤纸或者滤膜过滤都行，把茶叶渣子啥的杂质去掉，得到澄清的提取液。要是提取液里还有其他干扰物质，可能还得用固相萃取柱来净化一下，按照柱子的使用说明操作，保证最后得到比较纯净的含有茶多酚的溶液。
3. 定容
把净化后的溶液用容量瓶定容到一定体积，比如说10毫升或者20毫升，这样方便后面进样检测，而且定容的时候要准确，保证溶液浓度的准确性。

（二）仪器操作
1. 色谱柱选择与安装
对于茶多酚的检测，选个合适的色谱柱很重要。像C18柱就比较常用。安装色谱柱的时候得小心，按照仪器的说明来，把柱子两端连接好，要拧紧，可不能漏气，要不然会影响检测结果。
2. 流动相设置
流动相一般是用甲醇和水的混合溶液，再加点磷酸来调节pH值。甲醇和水的比例要根据实际情况调整，比如说30%甲醇 + 70%水，pH值大概调到2 - 3之间。这个比例和pH值对茶多酚的分离效果影响很大。
3. 检测波长设置
茶多酚在280nm波长附近有吸收，所以把检测波长设置在280nm左右就行，这样能准确检测到茶多酚的峰。
4. 进样
用微量进样器吸取一定量的样品溶液，进样量一般1 - 10微升就行。进样的时候要快，而且每次进样的手法要一样，保证进样的重复性好。

二、故障排除

（一）没有峰或者峰很小
1. 样品问题
先看看是不是样品没处理好。要是提取不完全，茶多酚含量就少，峰肯定小或者没有。那就得重新提取，延长提取时间或者提高提取温度试试。要是过滤的时候有损失，也会导致这样的情况，检查一下过滤过程。
2. 仪器问题
检查一下进样系统，看进样针是不是堵了或者没吸取到样品。如果是，清理进样针或者重新吸取样品。再看看色谱柱是不是失效了，如果柱子用得久了，可能会失去分离能力，这时候可能得换个新柱子。

（二）峰拖尾
1. 流动相问题
有可能是流动相的pH值不合适，重新调整一下pH值看看。或者是流动相里有杂质，把流动相重新配制一下。
2. 色谱柱问题
色谱柱被污染了也会导致峰拖尾。可以用合适的溶剂冲洗色谱柱，要是污染严重，可能得反向冲洗或者更换色谱柱。

（三）基线漂移
1. 温度影响
如果实验室温度不稳定，可能会导致基线漂移。把仪器放在温度相对稳定的地方，或者给仪器加个控温装置。
2. 流动相问题
流动相脱气不彻底也会造成基线漂移。重新对流动相进行脱气处理，比如超声脱气或者用专门的脱气装置脱气。

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