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高效液相色谱基础篇|关于亲水作用色谱柱维护保养及注意事项小知识
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2024/10/10
私聊
液相色谱(LC)
承接上回,我们说了一下HILIC色谱柱的原理、构造、分离机制、使用过程中的注意事项及它的局限性,今天主要说说它的维护保养和相关的注意事项,色谱柱固有一死,但好的操作还是能延缓它的生命周期的。
其实不同的色谱柱都大差不差,只是在某几个点上是略有不同的,大部分都是属于共性的维护和注意事项。
01.
HILIC
色谱柱的维护
1)色谱柱的柱效测试:
在条件允许的情况下,对新色谱柱进行测试。
2)色谱柱平衡:
新柱或长时间未使用的色谱柱应先用高比例的有机溶剂冲洗,然后逐渐过渡到使用流动相,以达到平衡。
3)色谱柱保护:
对于复杂样品,建议使用在线滤器或保护柱,或者使用SPE小柱进行前处理。
4)色谱柱清洗
:
常规清洗包括使用高比例的有机溶剂冲洗,以去除残留的极性物质。对于强保留污染物,可能需要使用更高比例的有机溶剂或含有少量水的溶剂进行清洗。
5)色谱柱保存:
色谱柱应在适宜的温度下保存,并且根据制造商的建议使用合适的保存液。如果长时间不用,应该用保存液进行冲洗,确保里面填料不会干涸。
6)使用保护柱:
对于容易污染的样品,建议使用保护柱来延长分析柱的寿命。
7)记录维护:
记录色谱柱的使用和维护历史,包括使用日期、样品类型、清洗和再生周期等。
8)更换柱子:
当色谱柱性能下降,如出现峰形异常、柱效降低或分离度下降时,考虑更换新柱。
02.
HILIC
色谱柱的注意事项
1)pH范围:
虽然HILIC对pH的敏感性不如离子交换色谱,但流动相的pH值应控制在适合分析物的范围内。
2)温度控制:
避免长时间在极端温度下使用色谱柱,一般推荐使用温度不超过室温。
3)样品清洁度:
样品应尽可能干净,避免含有悬浮颗粒、聚合物或其他可能堵塞或污染色谱柱的物质。
4)样品溶解性:
样品最好溶解在流动相或与之兼容的溶剂中,以减少柱床的污染。
5)流动相组成:
HILIC通常使用高比例的有机溶剂作为流动相,确保流动相的组成适合分析目标。
6)
缓冲盐选择:
使用适合HILIC的缓冲盐,如氯化铵或醋酸铵,避免使用可能与分析物反应的缓冲盐。
7)避免高压:
在冲洗或使用过程中,避免对色谱柱施加过高的压力,这可能导致填料压缩或床层损坏。
8)避免极端条件
:
避免在超出色谱柱制造商规定的pH、温度或有机溶剂比例的条件下使用色谱柱。
9)避免水解:
由于HILIC色谱柱可能对水敏感,应避免长时间暴露在高水分环境中。
10)定期平衡:
新柱或长时间未使用的色谱柱在使用前应进行适当的平衡。
总结一下:
要确保HILIC色谱柱的长期稳定和高效,我们得做好日常的维护和保养。首先,新柱子使用前,进行柱效测试是必要的,以确保它出厂后使用前是正常的。
使用前,先用合适的溶剂冲洗色谱柱,然后用流动相进行平衡,这有助于保证实验的一致性。如果样品比较复杂,最好用保护柱或在线过滤器,这样可以减少对色谱柱的污染。
在操作过程中,要留意几个关键点:保持流动相的pH值在色谱柱允许的范围内,控制好色谱柱的使用温度,确保样品的清洁度,使用新鲜配制的流动相。同时,避免施加过高的压力,不要超出色谱柱制造商规定的使用条件。
使用结束后,清洗色谱柱也很重要,通常使用高比例的有机溶剂(如乙腈或甲醇)进行冲洗,以去除残留的极性物质;对于难以去除的污染物,可能需要使用含有少量水的有机溶剂进行冲洗;同时,色谱柱在不使用时,应使用高比例的有机溶剂(如乙腈或甲醇)保存,以防止填料吸水膨胀或干涸。
最后,记录色谱柱的使用和维护历史对于跟踪其性能变化非常关键。如果色谱柱的性能开始下降,比如峰形异常或柱效降低,那就该考虑换新柱子了。
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