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反相 / 亲水相互作用双模式交替液相色谱?串联质谱 分离系统的构建及其在代谢物全谱研究中的应用

  • zhangyongmei
    2024/10/12
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 生物样品通常具有基质复杂、种类繁多、理化性质差异极大等特征,采用一种分离模式通常只能得到样品的部分信息,发展多模式结合的分析方法,对于样品的全景特征分析、生物标志物发现皆具有重要意义。 本文将 HIL?IC 和 RPLC 两根色谱柱与一台自动进样器、两个输液泵结合,并耦合到质谱仪上采集数据,构建了一种基于单进样
    器的 HILIC / RPLC? MS / MS 双模式交替分离系统。 构建的系统通过一个两位六通阀和一个两位十通阀使自动进样器始终与质谱仪在同一流路上,但是与 HILIC 和 RPLC 两根色谱柱交替相连。 当自动进样器与 HILIC 色谱柱相连时,HILIC 运行梯度洗脱,RPLC 处于平衡状态,反之亦然,使得总分析时间减少约 40% ,而且可避免数据集重叠。采用该系统对 14 种代表性的代谢物( 包括有机酸、 氨基酸、 胆碱和溶血磷脂等) 进行了分析, 结果表明, 相比于RPLC? MS / MS 单模式系统和 HILIC? MS / MS 单模式系统,HILIC / RPLC? MS / MS 双模式交替分离系统覆盖的代谢物数量更多。 在尿液基质中,14 种代谢物的定量线性关系均较好,相关系数( R) 大于 0. 99,方法的检出限和定量限分别为 0.02 ~ 42. 86 ng / mL 和 0. 08 ~ 142.86 ng / mL,在低、中、高 3 个加标水平下的回收率为 85. 2% ~ 113. 9% ,日内、日间精密度( RSD) 小于 10% 。 该系统仪器配置简单,操作便捷,实用性强,适合在临床上用于代谢物全谱研究,也可用于蛋白质组学、糖组学的研究,尤其适合大队列样本的组学分析,具有广阔的应用前景。
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