【求助】标准曲线线性不好，急

后面点的浓度是不是太高了不在线性范围内，你说前面5个点线性很好，后面又说低浓度三个点响应与浓度没有任何关系，不太明白，曲线把高浓度去掉几个，标准曲线6个点够了。你最低血浆浓度800ng/mL,你不觉得很高吗，那你最高血浆浓度又是多少呢，液质是ppb级别的，浓度高了当然线性不好。

请将问题说的详细点，楼上指出的很正确！我也是看你描述的前后有矛盾。

我说的实际问题是标准曲线高浓度区域的五个点线性较好，但是低浓度区域的三个点线性不好，事实上我试过的血浆浓度从15ng/ml到100μg/ml，浓度倍数关系是2倍，具体方法是将标准溶液依次按5倍浓度等比稀释，取100微升空白血浆，分别取10、20微升稀释后的标准品系列稀释浓度，这样血浆浓度是按照2.5倍关系等比下降。血浆处理采用400微升甲醇沉淀蛋白，进样体积5微升。结果是12个浓度系列中高浓度区域5个点线性良好，但是低浓度区域的峰面积比不成比例增加，没有什么规律，总体来说低浓度区域的点较整条标线，浓度偏高。但单独将低浓度区域的点做标准曲线时，线性仍然不好，回算后每点浓度的准确度也较差。

昨天有重新做了一套标线，把混标单独配，稀释后加入到空白血浆中，系列的浓度和之前的是一样的，这样线性比较好了，但是浓度最小的点还是在线性外，准确度非常不好，而且期间进样的时候出了一个奇怪的问题，就是同一浓度的样本先后进了两针，结果标准品的峰面积相差2倍，将峰面积与内标峰面积相比，两次进样的峰面积比值也相差较大，如1.3和1.5，现在也无法解决这个问题，所以决定把柱子洗了重新进，不知道这样会不会好，结果等待中

什么型号的质谱仪，离子阱的，还是四级杆的？

我觉得你的浓度比较高，你有没有测试过化合物是不是有吸附？我觉得吸附的可能性比较大！

1.用空白血浆配置一个最高浓度的点，然后用空白血浆依次稀释下去。取10，20ul配置的误差会很大的
2.LC-MS低浓度线性不好是很常见的问题，蛋白沉淀会引入较多的基体杂质，可以考虑液液萃取等更加好的净化提取方法。
3.标准曲线使用加权最小二乘法，1/X或者1/X^2为权重系数进行线性回归，这样可以低浓度可以获得更好的准确度。