高效液相色谱仪（HPLC-ELSD）对咖啡因的检测定量
一、检测原理
通过将待检样品溶解于水中，并通过高效液相色谱系统分离后，进入蒸发器中。在蒸发器中，样品溶剂以气态形式被去除，留下固态样品，然后通过光散射检测器检测样品的散射光。根据样品在蒸发后的散射光强度与浓度之间的关系，可以定量或定性分析样品中的目标化合物。
二、检测方法
1、仪器与试剂
高效液相色谱仪（1260 InfinityⅡ），蒸发光散射检测器（1260 InfinityⅡ ELSD），安捷伦科技有限公司；电子天平，梅特勒托利多科技（中国）有限公司；混匀仪（JOANLAB VM 500PRO），艾科迈科学仪器浙江有限公司。
标准溶液，咖啡因（1000mg/L），北京曼哈格生物科技有限公司；乙腈（色谱纯）
2、曲线的配制
母液浓度（ug/mL） | 转移体积（mL） | 定容体积（mL） | 曲线浓度（ug/mL） |
1000 | 0.1 | 1 | 100 |
1000 | 0.05 | 1 | 50 |
1000 | 0.02 | 1 | 20 |
100 | 0.1 | 1 | 10 |
100 | 0.05 | 1 | 5 |
3、高效液相色谱条件
液相色谱柱：ZORBAX SB-C18（150mm×4.6mm×5μm）或者等柱效；色谱柱柱温：40℃；进样量20 μL；色谱柱流速：0.6mL/min；液相流动相A为实验室自制超纯水；流动相B为乙腈（色谱纯）流动相A：流动相B=72%：28%；洗脱时间10min。雾化气体：氮气；蒸发管温度：70℃；漂移管温度：65℃，增益5.0。
3、样品前处理
称取样品0.1-0.5g，使用实验室超纯水或甲醇水溶液进行溶解稀释定容10mL，然后再讲样品溶液放置在振荡器上振荡混匀后，取样品溶液于样品瓶中待测。
三、测试结果的分析
1、经过上述色谱条件，对目标物咖啡因的标准溶液进行色谱分析处理，在系列浓度范围内有良好的线性体现，其R2≥0.998以上，具体目标物在色谱图上的体现如下图所示：
四、结论
以上方法的测试通过验证是可行的，此检测方法测试过程简单，检测时间短，使用的检测试剂单一且常用，对于多种基质的样品可以进行处理检测，因此该实验的检测方法值得使用。
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