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中药材鉴别之蕲蛇
城头变幻大王骑
2024/10/28
私聊
中药/天然药检测
蕲蛇
Qishe
本品为蝰科动物五步蛇
Agkistrodon acutus
(Güenther)的干燥体。多于夏、秋二季捕捉,剖开蛇腹,除去内脏,洗净,用竹片撑开腹部,盘成圆盘状,干燥后拆除竹片。
性状
|
本品卷呈圆盘状,盘径17~34cm,体长可达2m。头在中间稍向上,呈三角形而扁平,吻端向上,习称“翘鼻头”。上腭有管状毒牙,中空尖锐。背部两侧各有黑褐色与浅棕色组成的“V”形斑纹17~25个,其“V”形的两上端在背中线上相接,习称“方胜纹”,有的左右不相接,呈交错排列。腹部撑开或不撑开,灰白色,鳞片较大,有黑色类圆形的斑点,习称“连珠斑”;腹内壁黄白色,脊椎骨的棘突较高,呈刀片状上突,前后椎体下突基本同形,多为弯刀状,向后倾斜,尖端明显超过椎体后隆面。尾部骤细,末端有三角形深灰色的角质鳞片1枚。气腥,味微咸。
【
浸出物
】 照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定,用稀乙醇作溶剂,不得少于10.0%。
饮片
|
【
炮制
】
蕲蛇
去头、鳞,切成寸段。
【性状】
本品呈段状,长2~4cm,背部呈黑褐色,表皮光滑,有明显的鳞斑,可见不完整的方胜纹。腹部可见白色的肋骨,呈黄白色、淡黄色或黄色。断面中间可见白色菱形的脊椎骨,脊椎骨的棘突较高,棘突两侧可见淡黄色的肉块,棘突呈刀片状上突,前后椎体下突基本同形,多为弯刀状。肉质松散,轻捏易碎。气腥,味微咸。
【鉴别】
聚合酶链式反应法。
模板DNA提取
取本品0.5g,置乳钵中,加液氮适量,充分研磨使成粉末,取0.1g,置1.5ml离心管中,加入消化液275μl[细胞核裂解液200μl,0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液50μl,蛋白酶K(20mg/ml)20μl,RNA酶溶液5μl],在55℃水浴保温1小时,加入裂解缓冲液250μl,混匀,加到DNA纯化柱中,离心(转速为每分钟10000转)3分钟;弃去过滤液,加入洗脱液800μl[5mol/L醋酸钾溶液26μl,1mol/L Tris-盐酸溶液(pH7.5)18μl,0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液(pH8.0)3μ1,无水乙醇480μl,灭菌双蒸水273μl],离心(转速为每分钟10000转)1分钟;弃去过滤液,用上述洗脱液反复洗脱3次,每次离心(转速为每分钟10000转)1分钟;弃去过滤液,再离心2分钟,将DNA纯化柱转移入另一离心管中,加入无菌双蒸水100μl,室温放置2分钟后,离心(转速为每分钟10000转)2分钟,取上清液,作为
供试品溶液
,置零下20℃保存备用。另取蕲蛇对照药材0.5g,同法制成对照药材模板DNA溶液。
PCR
反应鉴别引物
:5'GGCAATTCACTACACAGCCAA-CArCAACT3'和5' CCATAGTCAGGTGGTTAGTGATAC 3'。
PCR
反应体系:在200μl离心管中进行,反应总体积为25μl,反应体系包括10×
PCR
缓冲液 2.5μl,
dNTP
(2.5mmol/L)2μl,鉴别引物(10μmol/L)各0.5μl,高保真Taq DNA聚合酶(5U/μl)0.2μl,模板0.5μl,无菌双蒸水18.8μl。将离心管置
PCR
仪,
PCR
反应参数:95℃预变性5分钟,循环反应30次(95℃30秒,63℃45 秒),延伸(72℃)5分钟。
电泳检测
照琼脂糖凝胶电泳法方法2(通则0541),胶浓度为1%,胶中加入核酸凝胶染色剂
GelRed
;供试品与对照药材
PCR
反应溶液的上样量分别为8μl,DNA分子量标记上样量为2μl(0.5μg/μl)。电泳结束后,取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品
凝胶电泳
图谱中,在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上,在300~400bp应有单一DNA条带。
【检查】 水分
不得过14.0%(通则0832第二法)。
【浸出物】
同药材,不得少于12.0%
蕲蛇肉
去头,用黄酒润透后,除去鳞、骨,干燥。
【性状】本品呈条状或块状,长
2~5cm
,可见深黄色的肉条及黑褐色的皮。肉条质地较硬,皮块质地较脆。有酒香气,味微咸。
【鉴别】
同蕲蛇(饮片)。
【检查】 水分
不得过14.0%(通则0832第二法)。
总灰分
不得过4.0%(通则2302)
【浸出物】
同药材,不得少于12.0%。
酒蕲蛇
取净蕲蛇段,照酒炙法(通则0213)炒干。
每100kg蕲蛇,用黄酒20kg。
【性状】
本品形如蕲蛇段,表面棕褐色或黑色,略有酒气。气腥,味微咸。
【鉴别】
同蕲蛇(饮片)。
【检查】 水分
不得过14.0%(通则0832第二法)。
【浸出物】
同药材,不得少于12.0%
【
性味与归经
】 甘、咸,温;有毒。归肝经。
【
功能与主治
】 祛风,通络,止痉。用于风湿顽痹,麻木拘挛,中风口眼斜,半身不遂,抽搐痉挛,破伤风,麻风,疥癣。
【
用法与用量
】 3~9g;研末吞服,一次1~1.5g,一日2~3次。
【
贮藏
】 置干燥处,防霉,防蛀。
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