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【求助】如何在梯度洗脱中让人参皂苷出峰时间提前(已重新更新)

液相色谱(LC)

  • 悬赏金额:38积分状态:已解决
  • 2005版《中国药典》采用HPLC法测定了人参皂苷Rb3的含量,色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈为流动相A,以0。2%磷酸溶液为流动相B,按下式进行梯度洗脱,检测波长为203nm。...

    0~19分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
    19~21分钟:流动相A(%):35→60;流动相B(%):65→40
    21~26分钟:流动相A(%):50;流动相B(%):50


    做出来的图谱如下

    图一:人参皂苷Rb3 图二:供试品

    请问该如何调整流动相比例或者采用什么办法使其出峰提前,而不至于出现在坡形上???











    非常感谢大家的热心帮助,综合了大家的参考意见,并经过几次流动相比例的摸索调整,出峰时间已经提前了,但还是出现了连峰分离度不好的情况,请大家再看看在这段出峰时间如何再调整比例,使峰分离得更好,谢谢!!!
    0~10分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
    10~21分钟:流动相A(%):35→50;流动相B(%):65→50
    21~26分钟:流动相A(%):50;流动相B(%):50

miaoweili 2007/08/21

流动相极性调大一点

ljd5210 2007/08/29

用岛津的UFLC,超快速高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url][em17]

wubaicang2003 2007/08/18

把水重新蒸馏一下,再重配流动相;在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和,设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例,你的问题应该能够解决

yaya91 2007/08/20

只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前,会导致与相关杂质分不开。

Easy-Boy 2007/08/21

[quote]原文由 [B]yaya91[/B] 发表: 只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前,会导致与相关杂质分不开。[/quote] 是啊,你可以用溶剂走一个空白,然后减去空白图谱,就能够获得基线较平整的图谱了。如果是Waters的仪器。

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  • wubaicang2003

    第1楼2007/08/18

    把水重新蒸馏一下,再重配流动相;在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和,设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例,你的问题应该能够解决

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  • yaya91

    第2楼2007/08/20

    只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前,会导致与相关杂质分不开。

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  • tanggangfeng

    第3楼2007/08/20

    [quote]原文由 txm 发表:2005版《中国药典》采用HPLC法测定了人参皂苷Rb3的含量,色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈为流动相A,以0。2%磷酸溶液为流动相B,按下式进行梯度洗脱,检测波长为203nm。...

    0~19分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
    19~21分钟:流动相A(%):35→60;流动相B(%):65→50
    21~26分钟:流动相A(%):50;流动相B(%):50


    从图谱上看,应该还有优化可能。前面近20分钟基本没出峰。
    可以尝试改下,如

    0~10分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
    10~26分钟:流动相A(%):35→60;流动相B(%):65→40

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  • Easy-Boy

    第4楼2007/08/21

    是啊,你可以用溶剂走一个空白,然后减去空白图谱,就能够获得基线较平整的图谱了。如果是Waters的仪器。

    yaya91 发表:只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前,会导致与相关杂质分不开。

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  • 蒙哥麻利

    第5楼2007/08/21

    样品杂质峰太多,分离效果也不太理想,建议换根小微米的柱子试试。

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  • miaoweili

    第6楼2007/08/21

    流动相极性调大一点

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  • txm

    第7楼2007/08/22

    首先非常感谢大家对我提出的问题热心解答!
    我来总结一下:
    1.把水重新蒸馏一下,再重配流动相;在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和,设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例。
    这个方法我在任何梯度实验时都是这样做的,而且来回重复做了几次,换了两根进口柱子,结果没有什么改变。
    2.只要分离度达到1.5以上,就可以了.
    分离度达到1.5,我们还要求峰走在一条直的基线上,而且主成分峰出现了一些锯齿峰,因图被缩小了,所以在图上看不出来。
    3.由tanggangfeng提供的梯度洗脱比例,这个可以试一下,等待看结果如何再告知大家!!!
    最后还是非常感谢大家如此热心提供方法!!!!!

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  • case06

    第8楼2007/08/27

    没做过啊,爱莫能助啊!

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  • no.Escape

    第9楼2007/08/28

    我来补充两句:
    作梯度对流动相的要求比较高,尤其到后面,两种溶剂的比例发生变化,在203nm下,溶剂本身就会吸收光强,影响透光率。
    另外一点,20分钟前没有明显的大峰,不代表就没有东东冲洗出来,某一些对紫外相应很弱的东东在里面,容积的吸收峰比他还高,就看不到峰了。
    不晓得楼主做的什么样品。

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  • txm

    第11楼2007/08/29

    由tanggangfeng提供的梯度洗脱比例,做出来结果也没什么变化,大家还有什么好的建议和方法吗

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