广微测

我要测网讯 近日，我要测网走进广东省微生物分析检测中心(以下简称“广微测”)，零距离了解广微测的发展历程与特色优势。食品药品实验室副主任郭伟鹏就广微测的发展历程以及业务的特色优势作了详细介绍。他说到，在微生物检测这一细分领域，广微测将始终以诚恳的态度深耕细作，结合机构特色的科研实力，积极推进产、学、研、检测四位一体的发展模式，通过市场化运作，不断提高广微测实力。　　串联生物工程上、中、下游产业：从研究所到广微测　　出于历史发展原因，广微测深耕于微生物领域的分析检测，通过微生物领域相关标准制修订、技术培训咨询以及产学研成果转化，不断增强其在微生物行业的影响力，促进微生物行业的持续健康发展。　　1999年，广微测经批准在广东省微生物研究所(以下简称“研究所”)的基础上成立。广东省微生物研究所前身是中科院中南真菌研究室，现隶属于广东省科学院，主要致力于热带亚热带特色微生物资源、微生物与生态环境、食品安全及健康等前瞻性、基础性及公益性研究，在微生物资源多样性与前期开发、微生物生态与环境污染控制、微生物危害及其检测与控制、微生物分子育种及生物转化、食药用菌生物技术与人类健康等微生物工程上中下游领域有着非常深入的研究。　　依托于研究所的科研实力，广微测专注于第三方检测服务，目前拥有四个实验室：食品药品实验室、工业材料与产品室、农用生物安全实验室和生态毒理与环境安全实验室。主要业务涵盖食品药品检测、农用生物产品检测、化妆品、抗菌及空气净化器检测、生态毒理与环境安全检测等领域，具备包括食品、化妆品、肥料等139个产品的检验能力以及33大类产品共1578个项目的参数检验能力。广微测部分实验仪器　　产、学、研、检测四位一体的发展模式　　郭伟鹏向我要测介绍说：“与众多第三方机构的区别在于，广微测独树一帜的发展经营模式：借助广东省微生物研究所极强的科研力量支撑，我们开发出产、学、研、检测四位一体的发展模式。”　　科研，是产、学、研、检测中最为关键的一环。　　自1978年以来，广东省微生物研究所共取得科技创新成果152项，其中国际先进、领先水平的76项 获得国家及省部级成果奖108项，其中国家级成果奖7项、省部级一等奖15项 共申请专利318件，授权专利186件，其中发明专利172件。2010年被认定为“广东省知识产权示范事业单位”和“全国企事业知识产权试点单位” 主持和参与国家、行业和地方标准的制修订110多个 在国内外核心学术刊物发表论文2000多篇，出版科技专著36部。在这种科研力量的支撑下，广微测根据领域的不同成立相应的研究与检测团队，并且每个团队邀请极具实力的研究员负责指导。　　以食品微生物安全监测与控制研究团队为例，团队主要致力于食品微生物安全监测、评估、预警与控制技术的研发，并开展食源性致病微生物的传播机制和控制机理等系统基础和应用基础研究，研制具有国际先进水平的微生物检测与控制新技术和新产品，团队的负责人是2015年被评选为中国工程院院士的吴清平研究员!　　检测能力始终是评定一个检测机构的最好指标。广微测目前已获得CNAS、CMA、CMAF、CATL等权威检测资质，服务覆盖食品、饮料、保健品 农产食品 水质检测 药品及其辅料血透及相关治疗用水、一次性医疗卫生用品 消毒产品 空气质量检测 微生物菌种鉴定等领域。　　广微测现为广东省质量技术监督局批准的食品检验机构、广东省农业厅批准的农产品质量安全检测机构、广东省食品药品监督管理局指定的国产非特殊用途化妆品备案检验机构、广东省质量监督食用菌检验站的依托单位、国家认监委认可的符合良好实验室规范(GLP)原则的实验室、环境保护部公告的提供新化学品测试数据的检测机构、农业部批准的农药登记环境试验单位、 “全国危险化学品管理标准化技术委员会化学品毒性检测分技术委员会 (SAC/TC251/SC1)” 联合秘书处挂靠单位、广东省食用菌标准化技术委员会秘书处挂靠单位、全国卫生产业企业管理协会抗菌产业分会“抗菌标志产品”抗菌性能和中国针织工业协会抗菌针织品的抗菌性能指定推荐检验机构、中日两国“抗菌互认”指定推荐检验机构、广东省轻工协会—香精香料化妆品洗涤用品专业分会推荐的微生物检验机构、第十六届亚运会公共卫生检验检测合作实验室、中环联合(北京)认证中心有限公司“环境标志产品”检验签约实验室、广州宝洁有限公司微生物专业合同实验室。经国家发改委立项建成“广州国家生物产业基地生物新技术及产品研究开发和测试公共实验中心”、“广州化学品生态环境安全评价服务中心” 经广东省科技厅批准，作为主要承担单位联合组建“广东省食品安全检测与评价科技创新平台”、作为参加单位组建“广东省材料检测与评价科技创新平台”的材料(制品)防霉抗菌及安全性检测与评价中心。　　此外，广微测在微生物领域的技术经验的积累、参与众多标准制修订的基础上，为企业提供微生物控制及检验培训与技术服务，内容包括：提供解决微生物污染控制的成套解决方案 提供标准咨询和培新服务 为企业培养微生物和理化检验技术人员 提供食用菌栽培技术，开展技术咨询和培训。　　推进市场化运作，提供更加权威、便捷的服务　　广微测在微生物检测领域有着较高的知名度和影响力。郭伟鹏说：“我们广微测有着一支专家团队，跟踪国内外相关行业的国际标准、国家标准的制定、修定的发展情况，目前已经主持和参与了五十多项国家标准和行业标准的制修订工作。”　　随着第三方检测行业的整体发展趋势，广微测也在推进市场化运作，提高自身的竞争力和行业影响力。　　2015年12月，广东省微生物菌种保藏中心正式成为布达佩斯条约国际保藏单位，成为国内首个获得这一地位的省级菌种保藏机构，也是我国第三家国际承认的具有用于专利程序的微生物保藏资质的菌种保藏机构。　　借助互联网热潮，广微测也在积极推进信息化管理。通过LIMS系统，实现了对实验室数据和信息的收集、分析、报告和管理。　　谈到广微测未来的发展，郭伟鹏说：“在将来，我们的发展仍然会坚持以科研技术为指导，在检测领域深耕细作，通过市场化运作，提高竞争力，让广微测为我们的生活更好地服务!”　　我要测与广东省微生物检测中心合影　　(左四：郭伟鹏 左一：刘振杰 左二：王青柏 右二：徐鹏 )机构展位：广东省微生物分析检测中心编辑：罗俊 张岩

1. 饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统（MBS） 1.1 中文名称 饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统 1.2 英文名称 Rapid detection method of main pathogenic microorganisms in feed-Micro Biology Survey （MBS） 2.范围 本标准规定了饲料中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌微生物快速检测系统（MBS）检测方法。 本标准适用于配合饲料（蛋鸡配合饲料、肉鸡配合饲料、猪配合饲料、肉鸭配合饲料）、 动物源性饲料（血粉、肉骨粉、鱼粉、羽毛粉、乳清粉）、植物源性饲料（玉米、麸皮、豆 粕、花生粕、棉籽粕）中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌含量的快速检测。 3.规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 4 原理 MBS 方法通过氧化还原指示剂测量微生物主要代谢途径中氧化还原酶的催化活动。氧 化还原指示剂会根据介质的氧化状态改变指示剂颜色。颜色变化耗时与微生物污染程度的 Log 值呈负相关关系，从而可获得观察到的酶活性与检测样本中活细胞的数量之间存在的确 定相关性。 微生物快速检测试剂瓶内的营养物，维持目标细菌的生长；选择性药剂，抑制非目标细菌的 生长；而其中的还原剂，作为递氢体，能在细胞色素 C 后把电子转移到细菌呼吸链，而又不被氧分子氧化。如果目标细菌存在，那么检测瓶中的氧化还原反应色素会根据媒质的 氧化还原状态改变颜色。MBS 主机通过三光波探测颜色变化，最后根据整合颜色变化 的时间确定细菌的含量。5 试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。 5.1 20%无菌甘油：水：甘油=5:1。 5.2 微生物快速检测试剂瓶。 6 仪器和设备 6.1 微生物快速检测系统（MBS）：MBS-MR 主机、笔记本电脑、MBS 中文操作软件和微 生物快速检测试剂瓶。 6.2 冰箱：2-5℃或-20℃。 6.3 涡旋振荡器。 6.4 电子分析天平：感量 0.01g。 7 检验 7.1 饲料中细菌总数的检验 7.1.1 将 MBS-MR 主机、笔记本电脑接通电源，并用数据线将两者连接，在电脑上启动 MBS 中文操作软件，点击“参数”录入相关信息（包括：操作员姓名、操作员职务、检测样 本所属客户等信息）；在软件操作界面的样品设置选项中对样品进行基本信息设置，在分析 设置选项中设置细菌总数，并选择定量分析。 7.1.2 将配套 20%无菌甘油加入到细菌总数试剂瓶中，溶解试剂。 7.1.3 带好无菌手套，用消毒后的药匙或无菌镊子取待测饲料样品，并准确称取 1g（精确 到 0.01g），加入到细菌总数试剂瓶中。 7.1.4 摇动试剂瓶（手摇 1-2 分钟或涡旋振荡器振荡 20-30 秒），直到饲料样品溶解完全或 与试剂充分混合。 7.1.5 设置相应的参数后，将处理好的试剂瓶放入 MBS-MR 主机中，进行孵育，MBS-MR 主机会自动控温，然后开始进行分析。 7.1.6 分析完成后，按下试剂瓶顶部，瓶盖内部的消毒灭菌物质会释放至试剂瓶内，5-10 分钟即可充分灭菌，将灭菌后的试剂瓶丢弃到生物垃圾箱中集中处理。 7.1.7 检测结束后，系统可以输出检验报告，报告的内容包括用户设定的全部信息、检测结 果，如变色时间、样本中微生物的浓度和检测中的所有参数。 7.2 饲料中沙门氏菌的检验7.2.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置沙门氏菌，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。7.3 饲料中大肠菌群的检验7.3.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置大肠菌群，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。7.4 饲料中金黄色葡萄球菌的检验7.4.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置金黄色葡萄球菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。7.5 饲料中大肠埃希菌的检验7.5.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置大肠埃希菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。7.6 饲料中单核增生李斯特菌的检验7.6.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置单核增生李斯特菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。8 结果记录微生物快速检测系统（MBS）自动给出定量分析检测报告，读取数据，记录结果。9 质量控制本方法在 1-108cfu/ml（g）添加浓度水平上的回收率为 87.19%-97.66%(n≥10)，变异系数为 7.18%-10.28%（n≥10）。附录 A 微生物快速检测（MBS）孵育温度/检测时间快查表

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种软电离生物质谱，具有操作简便、结果高准确性、检测速度快和低成本等优点，目前已成为可靠的微生物快速鉴定技术，在微生物领域有着十分广泛的应用。 东西分析作为国产商品化质谱仪开拓者之一，对质谱仪技术及应用的开拓从未停止脚步。并在质谱仪器研发、生产与应用方面拥有丰富的经验和技术沉淀，2017年，东西分析推出MALDI-TOF 质谱-Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统。Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统是东西分析仪器有限公司开发的一款以MALDI-TOF为平台的多功能生物信息阅仪。它是一款多用途多功能的生物检测平台，既可以用于临床医学检测，也可以用于非临床领域诸如食品安全，非法添加，疾控，工业微生物等检测。 原 理 每种微生物都有独特的蛋白质组成。MALDI-TOF MS正是这样一种基于蛋白质检测的微生物快速鉴定技术。其原理是利用质谱技术将蛋白质按分子量大小排列形成独特的指纹图谱，通过测定某一细菌的蛋白质组成，并将特征峰与数据库中的参考谱图对比，即可对细菌进行准确的鉴定。 由此可见，数据库的种类谱图等成为制约MALDI-TOF MS的重要因素。Ebio ReaderTM 3700M拥有强大数据库,包含有4000余种微生物, 包括多种临床致病菌，能够实现菌种的实时鉴定，无需上网检索鉴定；其搭载的神经网络人工智能算法，可对基因型相近的难辨菌（大肠杆菌和志贺氏菌）进行准确区分。同时具有自建库功能，可根据用户的实际情况建立自己的特有菌种库。 应 用 （一）大肠埃希菌和志贺菌的鉴别大肠埃希菌和志贺菌是具有高度传染性、危害严重的革兰阴性肠道致病菌。这两种菌在菌落形态及生物学特性方面非常相似，常规的临床鉴定方法很容易混淆，即使通过16SrRNA测序也无法准确区分。Ebio ReaderTM 3700M利用具有深度学习分析功能的神经网络人工智能软件，可以实现对大肠埃希氏菌和志贺菌的准确区分鉴定。大肠埃希菌，福氏志贺菌和两种混合菌的指纹图谱人工智能算法准确鉴定难辨菌种（二）菌种鉴定MALDI-TOF MS不仅可以鉴定细菌，还可以用于细菌分型，亚种识别等。样品处理在Eppendorf 管中加入300µl 纯净水，挑取适量(5～10mg)菌体，混匀，再加入900 µl 无水乙醇，混匀后以12000r/min 离心2min，弃去上清液，待管中残留液体彻底干燥后，加入50µl 70% 甲酸，混匀，再加入50µl 乙腈，混匀，同样以12000r/min 离心2min，吸取上清液，与等体积的基质溶液（CHCA）混合，然后涂布于96 孔样品板上，自然晾干后进样。用校准品对仪器进行质量轴校正，随后利用Ebio ReaderTM 3700M质谱仪进行样品检测。仪器条件实验结果Ebio ReaderTM 3700M分析样品的质谱图根据所得图谱与数据库参考谱图匹配程度，软件可以计算得到分值。根据质谱仪鉴定分值，1.7时，结果高度可信。本实验中检测的样品质谱结果得分2.3，表示高属水平鉴定，可能的种水平鉴定。（三）地氯雷他定口服溶液药品中洋葱伯克霍尔德氏菌洋葱伯克霍尔德菌是一种无条件致病菌，可引发包括肺炎、败血症、心内膜炎、伤口感染、脓肿在内的多种感染，死亡率95%，被越来越多的制药企业和药监管理系统所重视。《中国药典》2020版也新增洋葱伯克霍尔德菌检查指标。菌种培养菌悬液制备：在生物安全柜内，将洋葱伯克霍尔德氏菌冻干粉溶于胰酪大豆胨液体培养基中，在32℃的电热恒温培养箱中培养，备用。样品制备1. 菌种阳性对照：在生物安全柜内，将洋葱伯克霍尔德氏菌冻干粉溶于胰酪大豆胨液体培养基中，在32℃的电热恒温培养箱中培养，备用。2. 地氯雷他定口服溶液：取三个批次地氯雷他定口服溶液溶于胰酪大豆胨液体培养基中，置32℃电热恒温培养箱中培养；3. 地氯雷他定口服溶液+菌种培养：取三个批次地氯雷他定口服溶液和已制备的菌悬液溶于胰酪大豆胨液体培养基中，置32℃电热恒温培养箱中培养；蛋白提取量取适量的待测样品，以5000r/min 离心5 min收集沉淀物，加入300µl 纯净水，混匀，再加入900 µl 无水乙醇，混匀后以12000r/min 离心2min，弃去上清液，待管中残留液体彻底干燥后，加入50µl 70% 甲酸，混匀，再加入50µl 乙腈，混匀，以12000r/min 离心2min，吸取上清液。点样移取经上述方法处理后的上清液，与等体积的基质溶液（CHCA）混合，然后涂布于96 孔样品板上，自然晾干后上仪器分析。仪器条件质谱仪器参数如下：正离子模式，检测范围：2000 Da～15000 Da；激光点击数：每图谱 200；激光频率：20 Hz；离子源加速电压：20 kV。每次实验前用校准品对仪器进行质量轴校正。结果Ebio ReaderTM 3700M分析洋葱伯克霍尔德氏菌的质谱图地氯雷他定口服溶液的质谱图地氯雷他定口服溶液+菌的质谱图从口服液质谱图和口服液+菌质谱图对比可知，地氯雷他定口服溶液中不含洋葱伯克霍尔德氏菌。（四）食源性致病菌检测一般所说的致病菌指的是病原微生物中的细菌，常见且危害较为严重的食源性致病菌有鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等。基于Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统，东西分析可提供食源性致病菌高通量、高自动化解决方案，高效地为食源性疾病诊断提供有价值的检测结果。伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌质谱图结 论MALDI-TOF MS是一种非常有前景的微生物鉴定方法，它具有很明显的准确性和高效性，尤其在临床使用中，常规微生物鉴定需要经过较长时间的培养，而且过程比较繁琐，费用较为昂贵。但是MALDI-TOF MS短的可以几秒出结果，而且成本较低，可以更多的惠及患者。