寡核苷酸

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  • 【飞诺美色谱】罕见遗传性疾病的救星——寡核苷酸药物
    新冠疫情促使mRNA技术快速发展的同时也使人们开始高度关注核酸药物这一领域。核酸药物包括反义核酸（ASO）、小干扰RNA（siRNA）、微小RNA（miRNA）、小激活RNA（saRNA）、信使RNA（mRNA）、适配体（aptamer）、核酶(ribozyme)、抗体核酸偶联药物（ARC）等，是基因治疗的一种形式。除mRNA药物外，其他几种核酸药物，基本上都是由100个以内的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸单链或双链组成，所以也称为寡核苷酸药物。与mRNA药物编码产生目的蛋白不同的是，寡核苷酸药物主要是通过碱基互补配对原则与DNA、mRNA或者pre-mRNA配对，通过基因沉默、非编码RNA抑制、基因激活等一系列机制来调节基因表达。已上市寡核苷酸药物化学结构（Nature reviews drug discovery）寡核苷酸药物对比于小分子药物及蛋白药物，具有多方面的优势，首先可根据目标靶点设计碱基序列，靶点明确、特异性强；其次寡核苷酸药物从转录后水平进行治疗，可选择的靶点丰富，特别是能覆盖蛋白质不可成药的靶点以及开发由基因缺陷导致的遗传性疾病的相关靶点；另外寡核苷酸药物由于序列短，可采用化学合成方法，完成目标序列的装配，并结合生物学测试筛选有效序列，能够避免盲目开发，节省研发时间。但是寡核苷酸药物在研发中也面临着诸多挑战。寡核苷酸在细胞外稳定性低，易被核酸酶降解，加上分子量及负电荷的因素，难以进入细胞，因此在研发过程中，使其保持稳定的结构以及能够有效递送的传递载体是主要考虑的两个因素。寡核苷酸核酸分子的改造主要包括磷酸骨架，碱基以及糖环的修饰，在改造中需要考虑多个因素，包括稳定性、药代动力学、碱基配对的亲和力等，最重要的是能够保留被功能酶及功能蛋白所识别的功能。因此，在前期研发过程中，需要对寡核苷酸进行精确的结构表征及定量。丹纳赫生命科学旗下SCIEX 的高分辨质谱ZenoTOF&trade 7600系统具有一系列对寡核苷酸进行分析的方案，可进行寡核苷酸的分子量分析并进行杂质检测，可对寡核苷酸进行碱基序列鉴定。由于Zeno TOF 7600具有EAD和CID两种互补的碰撞模式，不但能产生丰富的离子碎片信息，还会保留完整的核酸低丰度修饰信息。寡核苷酸分子量及碱基序列的检测高分辨质谱ZenoTOF&trade 7600系统另外，高分辨质谱ZenoTOF&trade 7600系统还能实现对寡核苷酸的定量分析，线性范围可达 5 ng/mL – 10000 ng/mL，可以完成寡核苷酸药物在研发阶段的药代及多种代谢产物同时鉴定及定量分析。在研发阶段，对于采用同一种仪器进行鉴定及定量，可避免定量方法转移时造成的方法优化时间浪费，可帮助用户加快研发进度。艾杰尔-飞诺美寡核苷酸定量分析前处理试剂盒高分辨质谱对寡核苷酸进行定量分析在寡核苷酸药物种类中，反义寡核苷酸由于是单链，分子量小，递送较其他寡核苷酸容易，且反义寡核苷酸功能多样，可上调或下调基因表达，成为研发罕见遗传性疾病药物中最关注的种类。为了帮助研究人员开发这类针对罕见遗传性疾病患者的ASO疗法，FDA还发布了指导这类ASO疗法非临床检测的指南。在已上市的寡核苷酸药物中，大部分都是用于治疗罕见遗传性疾病的反义寡核苷酸药物，特别是杜氏型肌营养不良，已经上市了针对不同基因位点的四款产品。药品名治疗疾病药物种类上市时间Fomivirsen巨细胞病毒视网膜炎反义寡核苷酸1998.8（已退市）Pegaptanib年龄相关性黄斑变性核酸适配子2004.12Mipomersen纯合性家族性高胆固醇血症(hoFH)反义寡核苷酸2013.1（已退市）Defibrotide肝静脉闭塞反义寡核苷酸2016.3Eteplirsen杜氏型肌营养不良（DMD基因外显子51）反义寡核苷酸2016.9Nusinersen脊髓性肌萎缩症 （SMN2基因外显子7）反义寡核苷酸2016.12Patisiran遗传性甲状旁腺素淀粉样变性小干扰RNA2018.8Inotersen遗传性甲状旁腺素淀粉样变性反义寡核苷酸2018.10Waylivra家族性乳糜微粒血症综合征反义寡核苷酸2019.5Givosiran急性肝卟啉症小干扰RNA2019.11Golodirsen杜氏型肌营养不良（DMD基因外显子53）反义寡核苷酸2019.12Viltolarsen杜氏型肌营养不良（DMD基因外显子53）反义寡核苷酸2020Lumasiran原发性高草酸尿症I型小干扰RNA2020Inclisiran成人高胆固醇血症及混合性血脂异常小干扰RNA2020Casimersen杜氏型肌营养不良（DMD基因外显子45）反义寡核苷酸2021.2.25已上市的寡核苷酸药物（根据网上资料整理）由此可见，对罕见病的诊断也非常重要，很多罕见遗传病是由几十甚至上百种突变引起的，而且不同区域的患者可能存在不同的基因变异位点，NGS是现在进行高通量基因检测的重要手段。丹纳赫生命科学旗下Integrated DNA Technologies（IDT）公司（中文名称：埃德特）是全球领先的NGS试剂供应商，其外显子捕获产品Exome Research Panel V2特别适合进行遗传性疾病的全外显子组测序，助力遗传性疾病的诊断。V2由 415,115 条单独合成且经过质控检验的 xGen Lockdown 探针组成。探针组跨越人基因组的 34 Mb 目标区域（19,433 个基因），并且覆盖 39 Mb 的探针空间（即由探针覆盖的基因组区域）。探针是使用全新的“捕获感知”(capture-aware) 算法进行设计的，并进行了专有的脱靶分析，确保实现完整的设计覆盖度。探针组中的所有探针均严格按照 ISO 13485 标准进行生产。每条探针均经过质谱法和双定量测量检验，确保探针的质量及在探针库中具有适当的代表性。IDT Exome Research Panel试剂盒
    时间： 2024-01-24
    作者： 艾杰尔飞诺美
  • 瞄准前沿赛道，看美迪西如何让寡核苷酸药物研发“提质增效”
    美迪西是一家专业的生物医药临床前综合研发服务CRO，服务覆盖药物发现、药学研究及临床前研究的全过程，致力于为全球的医药企业和科研机构提供全方位的符合国内及国际申报标准的一站式新药研究服务。 图1.美迪西产业园(上海南汇分部)。 2020年前后，随着国外多款寡核苷酸药物成功获批上市，美迪西敏锐地意识到寡核苷酸药物的发展潜力并开始搭建自己的研发平台。在搭建过程中，美迪西在综合考虑了品牌的市场占有率及自身的使用习惯之后，选择从沃特世购置仪器、耗材及信息学软件，专门用于寡核苷酸药物的研究，目前已建立起成熟的寡核苷酸药物研发体系。分析技术助力寡核苷酸药物研发 “提质增效” 美迪西化学部副主任田宝泉说： 寡核苷酸药物研发中，分析检测是不可或缺的一环。分离和质量控制在研发过程中占据着至关重要的地位。 制备型液相色谱提升纯化效率 美迪西化学分析部助理主任宋德奎负责寡核苷酸药物的纯化、分析方法开发与测试。为了改善寡核苷酸的峰回收率和峰形，宋德奎团队通过沃特世的制备型液相色谱LC Prep AutoPurification系统搭配ACQUITY UPLC OST C18色谱柱完成基于离子对试剂的反相色谱纯化。 图2.美迪西纯化分析实验室。 宋德奎主任介绍说： “ 寡核苷酸药物制备时容易产生N+1、N-1这类较难分离的杂质，因此对高压制备的分离度有很高的要求。常规来说，生物活性筛选对纯度的要求一般在85%-90%以上，而目前我们的回收率可以达到95%以上，远超行业的平均水平，这得益于Waters AutoPurification系统给予我们的性能保障。 ” Waters AutoPurification系统搭配了沃特世2545泵，其背压可以达到6,000psi，出色的耐高压性能完美满足了寡核苷酸制备的要求。宋德奎主任说：”这意味着我们可以用甲醇体系实现更好的分离度。此外，由于2545泵的稳定性很好，保留时间稳定，我们可以利用白天工作时间制备样品并优化纯化方法，夜晚时再进行自动化样品纯化，大大提升了工作效率。” 超高效液相色谱实现快速、高质量的分离 在完成纯化工作后，宋德奎团队会通过超高效液相色谱UPLC测定样品纯度。 “ 之所以选用UPLC，是因为其可以在很短时间内就达到对难分离杂质的分离要求，在提高效率的同时保证了分离质量。 宋德奎 ”由于寡核苷酸药物结构特殊性，易与金属发生非特异性吸附。美迪西选择了Waters ACQUITY Premier UPLC系统，该系统采用MaxPeak高性能表面（HPS）技术，其接触样品的色谱表面惰性化处理非常适合用于改善寡核苷酸的分离和检测。 宋德奎主任说：“使用过程中，我们能明显地感受到它相较于传统UPLC系统的优越性 - 可以更好地减少残留、拖尾现象，帮助我们获得更好的峰形和可重现的结果，节省了很多的时间成本。” 智能化的LC-MS系统搭配信息学平台赋能深度表征 寡核苷酸样品经过分离后，需要通过质谱做进一步鉴定和表征。宋德奎主任介绍说：“我们早前在建小分子药物分析平台的时候，就选择了沃特世的高分辨质谱BioAccord LC-MS高分辨质谱系统用于分子量表征。使用过程中发现，它出色的性能同样可以满足寡核苷酸药物分子量表征的需求。” 图3.宋德奎主任带领的化学分析团队使用高性能的Waters LC-MS系统进行寡核苷酸药物表征分析。 值得一提的是，BioAccord LC-MS系统支持自动执行校准设置和系统健康状态检查。 宋德奎主任表示： “ 这套智能化系统不仅为我们免去了手动校正的时间和工作量，而且很好地保障了数据的一致性，为我们提供了更准确、可靠的结果。 ” 该系统还搭载了waters_connect实验室信息学平台，可以为分析人员提供一整套简单易操作的工作流，包含分子量确认、去卷积等功能。分析人员只需按固定流程操作，就能获得想要的结果，并根据预设模板生成数据报告。 “最开始的时候，只有我们的分析人员在使用这套系统。而现在，我们的合成人员也能熟练地操作它了。它的简单易用让合成人员能够自行完成分析，更快地拿到结果，也使得分析人员能够从样品测试工作中解放出来，更专注解决复杂分析问题。”宋德奎主任说，“目前，这套设备基本每天24小时满负荷运转。” 高灵敏度液质联用技术缩短生物分析方法开发周期 生物分析是药物临床前DMPK研究的关键环节。美迪西药物代谢动力学部DMPK副主任万咪咪负责大分子早期药代动力学评价和代谢物鉴定。 “ 在非临床早期研究中，由于缺乏寡核苷酸药物相关代谢研究，液质联用(LC-MS)是寡核苷酸药物生物定量分析的首选方法，可避免未知代谢物对检测的干扰。另外，对于一些特殊的取材，如肝穿刺活检组织样品，有的时候只能拿到几个mg。面对如此少量的样品，必须要通过高灵敏度的仪器才能得到更可靠的分析结果。 万咪咪 ” 2022年初，美迪西专门采购了沃特世的ACQUITY Premier UPLC液相系统和Xevo TQ-XS三重四极杆质谱仪，用于寡核苷酸药物的生物样本定量分析。 万咪咪主任评价道：“我们团队在使用ACQUITY Premier UPLC系统后的明显感受是残留显著降低，而且它能提供更好的峰形、可重现的定量分析结果，以及灵敏度的显著提升，这些优势给我留下了深刻的印象。” 图4.美迪西药物代谢动力学部。 前沿分析技术加速寡核苷酸药物研发 实验室分析技术贯穿药物开发全生命周期的各个阶段，迎合了实际需求的技术创新，也为寡核苷酸药物研发“加速跑”提供了强劲的推动力。 “ 作为CRO企业，我们以效率和质量赢得客户信任，助力客户快速推进研发管线，加速商业化进程。在先进、可靠的实验室技术的加持下，推动中国自主研发的药物早日实现商业化生产，这是我们美迪西一直以来的目标和使命。 田宝泉 ” 点击此处，查看完整客户案例。
    时间： 2024-06-03
    作者： Waters
  • 限时试用｜Metal free消耗品，有效解决寡核苷酸分析吸附难题
    Metal free消耗品有效解决寡核苷酸分析吸附难题近年来，在新冠mRNA疫苗的催动下，核酸药物成为生物医药增长最快的细分领域，被业内视为继小分子化药和抗体药物后的第三大类型药物。其中，作为核酸药物的一类，小核酸药物在已上市核酸药物中占绝对数量优势。目前全球获批上市的核酸药物共16款，除了2款mRNA疫苗，其余14款均为小核酸药物。小核酸药物主要包括反义寡核苷酸 (ASO)、小干扰RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、小激活RNA (saRNA)、信使RNA (mRNA)、RNA适配 (Aptamer)等。70年代-2000年，主要是寡核苷酸药物发现和修饰的阶段，比如2位氧基的修饰，这些修饰都奠定了现在寡核苷酸药物的基础。寡核苷酸药的化学构成与修饰针对寡核苷酸类药物的分析，岛津可从消耗品角度解决解决用户因样品吸附所产生的分析困扰：1.液相色谱柱寡核苷酸类样品由于极性较大，在反相模式下保留弱，因此常常采用 IP-RP-LC ( ion-pair reversed-phase liquid chromatography ) 的方法进行分析，同时由于结构中存在磷酸基团，常因非特异性吸附而产生峰形差、线性不好等问题。岛津Shim-pack Scepter C18 [metal free]可以解决上述分析难题。有机全多孔杂化颗粒硅胶基体pH耐受范围1-12耐高温（90°C）聚合物涂层的[metal free]技术，可有效降低非特异性吸附的产生，保证优异峰形及线性。惰性填料色谱柱-Metal free色谱柱2.低吸附载样瓶/板在样品载样环节，核苷酸类、碱性多肽以及易金属离子螯合化合物与载样样品瓶或样品板存在非特异性吸附，从而影响定量准确性和重复性问题，因此采用惰性载样瓶或96-well板是非常必要且快速的解决方案，岛津可提供不同规格和形式的载样耗材。# 限时提供试用 #请扫描右边二维码申请～岛津寡核苷酸分析相关消耗品产品列表
    时间： 2022-05-26
    作者： 岛津实验器材
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寡核苷酸相关的方案

  • 在线脱盐高通量液质联用分析寡核苷酸
    寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸及核糖核酸），如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸，介导基因沉默的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）等，努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。天然的寡核苷酸在体内容易降解，稳定性差。通过修饰的寡核苷酸具有较好的药学特性和体内稳定性 [1-2]，但合成的寡核苷酸产物含有各种杂质，需纯化精制，产物的鉴定和产品的质量控制至关重要。液相和液质联用于寡核苷酸目标产物的高分辨分离和鉴定， 可以判断待测寡核苷酸结构的变化，比如脱嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸样品中存在的盐分会影响其离子化过程和造成峰强度降低，因此有必要进行质谱鉴定前的除盐处理。常规离线除盐方法耗时；可以利用在线除盐方式进行寡核苷酸的分离鉴定，但样品通量需要提高，以满足高通量的要求，如平均每天 2000 个样品的需求等。
  • 无需手动纯化直接分析合成的寡核苷酸
    由亚磷酰胺化学法合成的寡核苷酸通常使用离子对反相液相色谱 (IP-RPLC) 和阴离子交换色谱进行分析和纯化。在 IP-RPLC 分析中，阴离子交换纯化馏分的高含盐量会削弱寡核苷酸参与离子配对的能力。这就需要在 IP-RPLC 分析之前对样品进行脱盐，这一步骤通常使用离心过滤器手动完成。本应用简报展示了高盐浓度溶液中寡核苷酸的直接二维液相色谱分析：在第一维(1D) 中进行在线脱盐，随后在第二维 (2D) 中进行 IP-RPLC 分析。在该设置中，二维液相色谱的使用提高了工作流程速度，同时避免了手动的样品前处理过程。
  • LCMS测定反义寡核苷酸分子量
    本文使用生物惰性超高效液相色谱四极杆质谱联用仪LCMS-2050测定反义寡核苷酸分子量。采用DUIS（ESI+APCI）负离子模式对待测样品进行质谱扫描，使用LabSolutions软件对质谱图进行多电荷分析。结果表明，质谱图中含5种多电荷离子，电荷数量为4~8。通过多电荷解卷积分析计算得到该反义寡核苷酸样品分子量为6681.57 Da，与理论值的偏差为0.4 Da，质量准确度高。LCMS-2050具有质量范围宽的特点，适合分子量较大的反义寡核苷酸分子量检测。
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  • 寡核苷酸

    做寡核苷酸合成，50个碱基，部分硫代。用HPLC纯化制备，做了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]结果是好的。然后做了乙醇沉淀。再做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]，发现样品脱硫了。不知道是哪里出现了问题。哪位大佬知道吗？

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寡核苷酸相关的仪器

  • Agilent OLIGO PRO II 全自动寡核苷酸分析仪 400-629-8889
    寡核苷酸的合成和纯化是一个复杂的多步骤过程。最终产品质量受到许多因素的影响，这些因素虽然经过仔细的监控，但并不总在控制之下。对于制造商和最终用户来说，了解寡核苷酸纯度是至关重要的，产品必需具备足够的纯度质量，以确保最佳性能，并尽可能消除不明确的质控结果。可靠的寡核苷酸质量控制分析确保了下游应用的最佳性能，包括从PCR到梯度分子量标记的装配。OLIGO PRO II 全自动寡核苷酸分析仪提供了对ssDNA和ssRNA样品的全面分析。OLIGO PRO II 全自动寡核苷酸分析仪的特点：- 无需内掺式染料或探针 - 直观的纯度分析，对1-60 mer寡核苷酸提供1 nt的分辨率 - 可变换的通量，实现对12，24和96个样本的分析 - 自动化的操作，可连续分析多达288个样本产品货号：M5340AA- 可选毛细管阵列：m5340aa##001，m5340aa##002，m5340aa##003配套试剂盒- DN-415-0250: OLIGEL ssDNA Gel- DN-465-1000: ssDNA OLIGEL buffer- DN-475-1000: Capillary Conditioning Solution- GP-400-0100: Capillary Storage Solution
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/Agilent Technologies
    型号： OLIGO PRO II
    价格： 面议
  • 搭载ACQUITY Premier的BioAccord LC-MS系统 400-875-8210
    Waters BioAccord LC-MS系统让您能在同一平台上使用合规数据工作流程对产品质量属性进行位点特异性测量，从而深入了解有关信息。 可以充分信赖数据分析结果：减少数据采集时间，加快决策制定- 完整分子量分析（蛋白质、亚基、寡核苷酸、mRNA片段）- 肽图分析和多属性方法（MAM）- 游离N-糖分析- 蛋白质、肽和寡核苷酸的杂质分析 提高数据质量，提升分析效率，减少峰丢失- 提高棘手肽段的回收率并获得一致的检测结果，从而改善肽图和MAM分析。- 尽量避免分析物/表面相互作用，大幅减少样品损失，使酸性糖和脂质获得出色的灵敏度和重现性。- 在稳定的寡核苷酸分析中减少或消除钝化操作，从而节省时间并提高效率。- 大幅减少金属敏感分析物损失、提高回收率、改善检测限，从而尽可能降低未检出峰的风险。比以往更快获得高质量数据- 针对特定应用进行安装测试，确保系统发挥理想性能。- 借助基于结果的应用培训，让用户迅速上手。- 以现有人员获取高质量数据，或通过减少培训需求快速应对员工流动或项目周转方面的挑战。协助您满足法规要求- 基于关系型数据库的单一软件平台- 针对数据采集、处理和报告的完整审计追踪- 管理员可配置的角色和权限
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    厂商： 沃特世科技（上海）有限公司(Waters)
    品牌： 沃特世/Waters
    型号： 搭载ACQUITY Premier的BioAccord LC-MS系统
    价格： 面议
  • Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统 400-629-8889
    1290 Infinity II 生物液相色谱系统是一种由生物兼容性材料组成的二元 UHPLC，适用于生物制药（如关键质量属性）及其他高盐和极端 pH 条件下的应用。生物兼容性可确保生物分子的完整性和系统的稳定性。 该系统基于久经验证的 1290 Infinity II 液相色谱技术，不仅可以轻松实现方法转移（包括从旧仪器进行转移），还可以节省培训时间和精力。在 1300 bar 高压下实现高分离度和极低的扩散。多种生物惰性流通池可用于高灵敏度紫外检测。特性：生物兼容性溶剂和样品流路可确保生物分子的完整性，尽可能减少不必要的表面相互作用各种生物附件，包括一系列生物热交换器、生物毛细管工具包、生物定量环和分析头，可实现仪器的多功能性和高效率，从而满足各种应用需求适合所有应用的出色灵活性 — 更宽的性能范围和温度范围、可自动扩展的进样范围以及梯度选件（二元和四元溶剂混合）整个系统延迟体积极小，可实现超高的色谱分离度和极低的扩散高耐盐性和宽 pH 范围可增强灵活性与耐用性，延长仪器正常运行时间基于久经验证的 1290 Infinity II 技术，可轻松实现方法转移（包括从旧仪器进行转移），减少培训工作浅微孔板抽屉最多可容纳 6144 个样品，具有出众的样品容量功能强大，高达 1300 bar 的超高压力和高达 5 mL/min 的高分析流速，可实现出色的 UHPLC 性能各种流通池可实现广泛、灵敏的光学检测能力，可用于 VWD、DAD、FLD、生物惰性 MDS 或 LC/MS 检测，从而实现超高的适应性卓越性能和可持续性：1290 Infinity II 液相色谱系统经过独立审计，确认其在整个产品生命周期对环境的影响后，获得了 My Green Lab ACT（归责性、一致性、透明度）标签。性能指标宽度435 mm智能系统模拟技术可选泵类型二元泵全能泵流速范围使用 G7132A 和 G7131A 流速高达 5 mL/min深度468 mm温度区域的最大数量2溶剂最大数量2 (High-Speed Pump): 2 out of maximum 26 solvents4 (Flexible Pump): Internal 4-solvent gradient formation valve included.Internal 4-solvent selection valve included.External 2 x 12 solvent valve as option, fully integrated in the pump control interface.External 2 x 12 solvent valve as option, fully integrated in the pump control interface特殊功能BlendAssist缓冲液顾问软件生物兼容Yes电源电压100-240 VAC系统压力操作范围最高 1300 bar系统类型生物分析梯度色谱柱 ID 读取器选件可选色谱柱容量8进样量范围0.001–500 µ L0.1–1500 µ L，配备多次抽取工具包工作原理：通过灵敏的紫外检测分析核苷酸生物色谱分析（如 Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱）通常需要更灵敏的紫外检测，以降低检出限，但这也带来了一定的缺点。更高的灵敏度通常意味着分析物需要暴露在更强的光照下。对于易受入射紫外光能量影响的分析物而言，这可能会导致难以察觉的降解。阅读本应用简报，了解如何将 Agilent InfinityLab 最大光强卡套式流通池 LSS 用于光敏样品，同时保留紫外检测器的分析结果。ISET 助力色谱方法转移对不同类型的 HPLC 和 UHPLC 系统而言，生物分离运行也可能会有很大的差异。通过增加额外的体积或等度保持步骤可以克服这些系统体积和泵行为差异。安捷伦提供了一种基于先进的数据驱动型技术的解决方案，即智能系统模拟技术 (ISET)，它可以设置相同的时间偏移并模拟不同的梯度扩散，从而实现成功的方法转移。仪器安装后提供 30 天的免费试用。高分离度 Bio SEC 和聚集体监测为实现最佳体积排阻色谱 (SEC) 分离，选择专用的色谱柱和消耗品以及具有极低扩散性的合适 UHPLC 至关重要。Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱配备超低扩散毛细管，具有极小的系统死体积，与 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱联用，非常适用于分析单克隆抗体 (mAb) 和 mAb 衍生的治疗药物。此配置可确保蛋白质聚集体研究中关键质量属性 (CQA) 分析实现极高分离度性能。应用：Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱为您提供核苷酸分析所需的惰性1290 Infinity II 生物液相色谱系统主要由 MP35N 制成，流路中采用不含铁的不锈钢部件。该生物兼容性液相色谱系统专为生物色谱分析而设计。即使在高达 8 mol/L 尿素的高盐浓度以及高/低 pH 溶剂中也可以长期使用而不出现磨损，同时保持出色的重现性和稳定性。因此，1290 Infinity II 生物液相色谱在分析对铁敏感的磷酸化核苷酸（如 AMPcP 和腺苷）时表现出优异的性能。使用 IEX 和 Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统进行寡核苷酸分析寡核苷酸分析中常使用离子对反相色谱法，但离子交换色谱法更适用于某些特定的分析。随着对寡核苷酸需求的增加，各种寡核苷酸的大小也因用途而异，因此我们需要仔细选择合适的分离模式。通过选择阴离子交换色谱法，可以对杂质进行检测。本应用简报证明了 Agilent Bio SAX 色谱柱在寡核苷酸分析中的通用性，并提供了用于进一步方法开发的推荐起始条件。多聚糖分离的分离度和速度单克隆抗体 (mAbs) 属于免疫球蛋白 G (IgG)，是一类现代生物治疗化合物，通过分子中蛋白质部分的构象及其 N-糖基化模式定义。糖基化模式对于 mAbs 的疗效非常重要，因此糖基化模式的生物色谱分析是 QA/QC 过程的关键步骤，也是 mAbs 关键质量属性 (CQA) 的一部分。本应用简报展示了使用 1290 Infinity II 生物液相色谱系统对荧光标记多聚糖的分离。
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/Agilent Technologies
    型号： 1290 Infinity II Bio LC
    价格： 面议
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寡核苷酸相关的耗材

  • 安捷伦 AdvanceBio寡核苷酸 寡核苷酸分析
    想要成功分离脱三苯甲基、去保护的寡核苷酸，您需要具有高分离能力并且可以耐受严苛条件的色谱柱。如果色谱柱不具备足够高的分离能力，则不能保证结果的准确性。如果色谱柱不够稳定，则需要频繁地进行更换，这样便会扰乱工作流程，从而增加成本。Agilent AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱拥有高效的 2.7 µm 表面多孔 Poroshell 颗粒填料。采用安捷伦独有的技术对颗粒填料进行化学修饰，使其可耐受高 pH 的流动相。我们还将这些填料与封端 C18 固定相键合，从而为寡核苷酸的分析提供出色的选择性。此外，我们还采用分离度标准品对每一批 AdvanceBio 寡核苷酸填料进行了测试，确保其具有一致的性能。AdvanceBio 系列产品旨在为蛋白质、抗体、偶联物、新生物实体和生物药物的完整表征提供一致、卓越的性能。
    供应商： 安捷伦科技（中国）有限公司
    品牌： 安捷伦
    价格： ¥58359441
  • 寡核苷酸分离技术
    寡核苷酸分离技术合成寡核苷酸和DNA片段被应用于迅速发展的应用领域，包括作为主体或杂交探针用于治疗性制剂。沃特世寡核苷酸分离技术(OST：Oligonucleotide Separation Technology)基于BEH杂化颗粒的反相色谱柱，以及Gen-Pak离子交换柱，应对各种高分辨分析与实验室规模分离挑战所需，包括涉及各种DNA和RNA品种。沃特世OST色谱柱装有键合了C 18 的第二代杂化技术BEH颗粒。对去三苯甲基(detritylated，或称脱保护)的合成寡核苷酸样品的分离，基于成熟的离子对反相色谱法。沃特世提供1.7 μm UPLC颗粒或2.5 μm HPLC颗粒，装填以各种不同色谱柱规格，从而灵活满足各种实验室规模分离或分析的不同需求，并能实现异乎寻常的样品分辨率和卓越的色谱柱使用寿命。此外，沃特世的制造和质控测试程序，有助于确保批次之间与柱之间的性能的一致性，而无论应用的难度有多高。1、分离效率相当于或优于PAGE、CGE、或离子交换HPLC方法2、可从去三苯甲基(脱保护)的全长产物中分辨出失败序列3、可放大的柱规格，满足实验室规模的分离需求4、超长的色谱柱使用寿命，降低单次分析或分离成本5、经MassPREP OST标准品质控测试，帮助确保性能稳定对寡核苷酸混合物具有异乎寻常的高分辨率ACQUITY UPLC OST C 18 ，1.7 μm色谱柱(设计专用于ACQUITY UPLC系统)和XBridge OST C 18 ，2.5 μm色谱柱，能完全适用于离子对反相色谱法分析和纯化去三苯甲基寡核苷酸的需求。如图所示(右图)，使用沃特世UPLC技术所进行的分离，具有与毛细管凝胶电泳(CGE)相媲美的组分分辨率，而且分析时间显著缩短。由于使用亚2 μm BEH技术颗粒提高了分辨力，因而有可能对大寡核苷酸序列进行分离(如将N与N-1分开)。此外，使用沃特世OST色谱柱配合质谱联用技术以及对质谱兼容的洗脱剂，有可能对与失败序列的色谱分离开的目标寡核苷酸产物的分子量特征进行定量分析。分离15-60mer去三苯甲基寡脱氧胸苷序列组(Detritylated Oligodeoxythymidine Ladder)分离去三苯甲基寡脱氧胸苷序列组，比较毛细管凝胶电泳(CGE)与离子对反相色谱方法的分离效果纯化单链RNA干扰RNA寡核苷酸的UPLC/MS分析RNA干扰(RNAi)机制的发现现在被广泛用于静默目标基因表达，这推动了对小分子干扰RNA(siRNA)分析的需求。为满足对20-25个核苷酸的小分子干扰RNA(siRNA)进行耐用的、快速的、灵敏的分析的需求，沃特世开发了一个UPLC/MS方法，运用了UPLC OST色谱柱和Synapt HDMS质谱仪。采集准确质量可对5’-截断寡聚体(寡核苷酸合成过程所产生的失败序列)以及其它一些杂质峰进行分配。质谱图中的质量的每个峰均使用MaxEnt 1软件进行去卷积化。图2给出了推测性的5’-端失败产物。对寡核苷酸母体的几乎完整序列均进行了解释。质谱分析还显示除了目标21-mer RNAi序列以外，还存在一个额外的尿苷单核苷酸。对一个21mer的RNA进行LC/MS分析不同离子对试剂对不同寡核苷酸序列分离的影响杰出的柱寿命在这些苛刻的分离条件下，填充以BEH技术颗粒的沃特世OST色谱柱显示出引人注目的柱寿命，同时还具有并保持卓越的分离性能。而在相同的苛刻分离条件下，传统硅胶基质色谱柱的使用寿命显著缩短。分离5-25mer去三甲苯基(脱保护)寡脱氧胸苷序列——进样1000针柱分辨率没有任何变化寡核苷酸分离技术(OST)柱产品一览表产品描述 粒径 孔径 柱规格 部件号ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 50 mm 186003949ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 100 mm 186003950ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 150 mm 186005516ACQUITY UPLC OST C 18 方法验证包** 1.7 μm 135 2.1x 100 mm 186004898ACQUITY UPLC OST C 18 定制柱* 1.7 μm 135 定制 186003951XBridge OST C 18 2.5 μm 135 2.1 x 50 mm 186003952XBridge OST C 18 2.5 μm 135 4.6 x 50 mm 186003953XBridge OST C 18 2.5 μm 135 10 x 50 mm 186003954XBridge OST C 18 方法验证包** 2.5 μm 135 4.6 x 50 mm 186004906XBridge OST C 18 定制柱 2.5 μm 135 定制 186003955* 用于配合沃特世UPLC系统使用**来自于不同批次填料所装填的三根色谱柱可放大的DNA与RNAi分离，良好的产品回收率研究基因静默、或用于基因敲除时，需要高纯度寡核苷酸。XBridge OST C 18 色谱柱，具有极高分辨率，其柱规格设计用于满足实验室规模的分离需求，是纯化去三苯甲基(脱保护)寡核苷酸的首选色谱柱。如下表所示，XBridge OST C 18 色谱柱规格和操作流速的选择，主要取决于合成反应混合物的规模大小。我们建议根据寡核苷酸样品的载量选择适当的色谱柱规格，这样可使组分分辨率最大化，使目标产物与不要的失败序列分离开得到最大回收率。柱规格 大概样品载量** mg*** 流速2.1 x 50 mm 0.04 μmoles 0.2 mg 0.2 mL/min4.6 x 50 mm 0.20 μmoles 1.0 mg 1.0 mL/min10 x 50 mm 1.00 μmoles 4.5 mg 4.5 mL/min19 x 50 mm* 4.00 μmoles 16.0 mg 16.0 mL/min30 x 50 mm* 9.00 μmoles 40.0 mg 40.0 mL/min50 x 50 mm* 25.00 μmoles 110.0 mg 110.0 mL/min* OST订制柱** 所列数值仅为约值，且取决于寡核苷酸的长度、碱基组成、以及所采用的“切取中心”的馏分收集方法。*** 按平均寡核苷酸分子量及合成产率估算将siRNA Duplex与其相关杂质分离开
    供应商： 百道亨仪器设备（北京）有限公司
    品牌： 沃特世
    价格： 面议
  • 寡核苷酸分离柱
    寡核苷酸的分析与分离合成寡核苷酸和DNA片段被应用于迅速发展的应用领域，包括作为主体或杂交探针用于治疗性制剂。沃特世寡核苷酸分离技术(OST：Oligonucleotide Separation Technology)基于BEH杂化颗粒的反相色谱柱，以及Gen-Pak?离子交换柱，应对各种高分辨分析与实验室规模分离挑战所需，包括涉及各种DNA和RNA品种。寡核苷酸分析柱 — 异乎寻常的高分辨率沃特世寡核苷酸色谱柱装有键合了C18的第二代杂化技术BEH颗粒。对去三苯甲基(detritylated，或称脱保护)的合成寡核苷酸样品的分离，基于成熟的离子对反相色谱法。沃特世提供1.7 μm UPLC颗粒或2.5 μm HPLC颗粒，装填以各种不同色谱柱规格，从而灵活满足各种实验室规模分离或分析的不同需求，并能实现异乎寻常的样品分辨率和卓越的色谱柱使用寿命。此外，沃特世的制造和质控测试程序，有助于确保批次之间与柱之间的性能的一致性，而无论应用的难度有多高。分离效率相当于或优于PAGE、CGE、或离子交换HPLC方法??可从去三苯甲基(脱保护)的全长产物中分辨出失败序列??可放大的柱规格，满足实验室规模的分离需求??超长的色谱柱使用寿命，降低单次分析或分离成本??经MassPREP OST标准品质控测试，帮助确保性能稳定杰出的色谱柱寿命在这些苛刻的分离条件下，填充以BEH技术颗粒的沃特世寡核苷酸色谱柱显示出引人注目的柱寿命，同时还具有并保持卓越的分离性能。而在相同的苛刻分离条件下，传统硅胶基质色谱柱的使用寿命显著缩短。干扰RNA寡核苷酸的UPLC/MS分析RNA干扰(RNAi)机制的发现现在被广泛用于静默目标基因表达，这推动了对小分子干扰RNA(siRNA)分析的需求。为满足对20-25个核苷酸的小分子干扰RNA(siRNA)进行耐用的、快速的、灵敏的分析的需求，沃特世开发了一个UPLC/MS方法，运用了UPLC OST色谱柱和Synapt HDMS质谱仪。采集准确质量可对5’-截断寡聚体(寡核苷酸合成过程所产生的失败序列)以及其它一些杂质峰进行分配。质谱图中的质量的每个峰均使用MaxEnt 1软件进行去卷积化。图2给出了推测性的5’-端失败产物。对寡核苷酸母体的几乎完整序列均进行了解释。质谱分析还显示除了目标21-mer RNAi序列以外，还存在一个额外的尿苷单核苷酸。寡核苷酸分离柱产品一览表订货信息：产品描述粒径孔径柱规格部件编号ACQUITY UPLC OST C18 *1.7 μm130A2.1 x 50 mm186003949ACQUITY UPLC OST C18 *1.7 μm130A2.1 x 100 mm186003950ACQUITY UPLC OST C18 *1.7 μm130A2.1 x 150 mm186005516ACQUITY UPLC OST C18方法验证包**1.7 μm130A2.1x 100 mm186004898ACQUITY UPLC OST C18 定制柱*1.7 μm130A定制186003951XBridge OST C182.5 μm130A2.1 x 50 mm186003952XBridge OST C182.5 μm130A4.6 x 50 mm186003953XBridge OST C182.5 μm130A10 x 50 mm186003954XBridge OST C18 方法验证包**2.5 μm130A4.6 x 50 mm186004906XBridge OST C18定制柱2.5 μm130A定制186003955* 用于配合沃特世UPLC系统使用**来自于不同批次填料所装填的三根色谱柱
    供应商： 北京豫维科技有限公司
    品牌： 沃特世
    价格： 面议
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