微量氮分析计

超微量分光光度计在核酸定量和分析中的应用分光光度测定法是一项定量和分析生物成分的成熟技术。其中，核酸是生物实验室最常检测的生物成分之一。确定这些样品的浓度和纯度对许多下游实验至关重要。核酸主要吸收260nm下的紫外光，其浓度可以应用朗伯比尔定律通过它们的相关消光系数和样品光程计算出来。首先，260nm的紫外光直接照射样品，并且穿过样品，而另一边的光电检测器则测定有多少光被吸收。通过对照参比(一般是样品稀释液)，可以定量样品中的核酸浓度。样品纯度是核苷酸定量的一个重要指标。尽管不是确定纯度最准确的方法，A260/A280和A260/A230依然可以用来粗略估计蛋白和化学成分的污染程度。超微量分光光度计是一款多用途的紫外-可见(UV-Vis)超微量分光光度计，尤其是在分析核酸样品方面。在这一应用指南中，我们展示了超微量紫外分光光度计是如何以高准确度和高一致性来定量(浓度)和定性(样品纯度)分析核酸样品的。接下来让我们一起走进我们实验室的几个实验？（1）样品交叉污染：实验过程：样品交叉污染通过使用我们NanoBio200超微量分光光度计滴样交替检测鲑鱼精（dsDNA）和胎牛血清白蛋白（BSA）进行评价。超纯水作为参比。超微量基座在每次读数完成后用不起毛的纸擦拭干净。实验结果如下：图一：样品交叉污染。鲑鱼精（dsDNA）和胎牛血清白蛋白（BSA）在NanoBio200超微量分光光度计上滴样交替检测。表一：“样品交叉污染”实验中包含的数据从图1和表1中的结果我们可以看出，经过擦镜纸简单擦拭后，后续实验中没有明显的样品交叉污染。（2）样品体积比较：实验过程：鲑鱼精（dsDNA）采用超TE稀释，分别是1.0μL, 2.0μL和2.5 μL，在超微量中滴样检测(n = 5)。TE作为参比。参比体积与样品体积相同。实验结果：图二：体积再现性。1ul、2ul、2.5ul体积的鲑鱼精（dsDNA）在NanoBio200超微量分光光度计上读数。表二：不同体积比较数据从图二和表二中，我们可以看出不同体积显示出非常一致的计算浓度（n = 5），说明我们体积的多少对样品的浓度测定影响几乎没有，只要形成完美的液柱即可。为了得到zui好的结果，我们建议使用2ul体积，因为其更易加样。（3）标准曲线的线性：实验过程：鲑鱼精DNA溶于在TE缓冲溶液（PH=8.0）中起始浓度为2000ng/μL的双链DNA(dsDNA)经两倍系列稀释。TE作为空白，每个样品浓度都在0.5mm超微量基座上样读3次。利用预设好的DNA定量方法自动计算出dsDNA浓度，CdsDNA=50[A260(10mm)-A340(10mm)]ng/ul。之后，数据可以使用Excel导入绘制图表,曲线拟合用于显示标准曲线的线性。实验结果：图三：计算的DNA浓度vs稀释因子。起始浓度为2154ng/μl鲑鱼精DNA经过两倍系列稀释所显示出的稀释因子和DNA浓度之间的关系，结果来源于NanoBio200。这一曲线展示了R2值为0.9991的完美线性关系。从图三中，我们可以看出NanoBio200展示出DNA浓度和稀释因子之间的线性关系。从这个实验中，我们可以得出此台NanoBio200的zui低检测浓度为5ng/μL DNA。总结：NanoBio200超微量分光光度计能够进行非常灵敏的核酸样品定量及分析。如以上所示，低至1 μL的样品也能在超微量中得到一致性很高的读数。同时， 还具有非常宽的检测范围(5 ng/μL to 2154 ng/μL)。并且，自带7寸电容触摸屏为研究者提供了重要信息。从图四我们可以很直观的看到样品浓度和纯度。小巧灵活的体积，加上它不需电脑联机，单机即可检测，检测数据可打印，还可以通过USB等方式输出等优点。使得NanoBio200超微量分光光度计将成为在任何实验室环境下进行核酸定量和分析的理想选择。

哈佛仪器网络讲堂第一期－现代超微量核酸蛋白分析技术进展，将于2014年6月26日14：00开课。报名网址：http://webinar.b.bioon.com.cn/live-info/webinar_biochrom1.html，欢迎参与研讨！ 本期简介： 随着常规分子生物学研究的深入，越来越多的生物实验室日常需要测量的核酸、蛋白样品量也在不断地加大。核酸（包括DNA或RNA）中的嘌呤碱和嘧啶碱均具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一个强烈的吸收峰，最大吸收值在260nm附近。蛋白质在280nm的紫外光吸收可以达最大值，绝大部分是由色氨酸和酪氨酸所引起的。利用这一特性可以使用分光光度法鉴别蛋白质、核酸的含量和纯度。 在实验中分光光度法一直是进行光度分析的最简单方法之一。核酸和蛋白质的强吸收意味着传统的比色皿不进行耗时的稀释就不适于测量高浓度水平的样品。同时，由于核酸样品的体积较小，即使使用昂贵的微量石英比色杯（容积数十微升左右），也往往需要对原始样品进行稀释，从而带来可能的操作偏差。为了应对这些问题，近年来，一类新的用于测量超微量核酸蛋白的分析技术已应运而生。

德国Implen公司推出新款微量核酸蛋白分析仪：Nanophotometer Pearl (珍珠版) 该款微量核酸蛋白分析仪具有以下主要特点： 1． 目前市场上样品使用量最少，仅需0.3微升，且新型的样品室设计使得对超微量样品的核酸、蛋白质和肽的浓度可进行精确检测。波长范围从190nm到1100nm。 2． 极宽的样品检测范围，从2ng/ul 到18750ng/ul（dsDNA)。使用不同光程的样品盖，样品可自动稀释为5倍、10倍、50倍、100倍、250倍，故无需担心稀释误差。 3． 开机无需等待，即开即用。操作时间最少，3.5秒即可完成 200nm-950nm波长的数据采集 4． 除了使用超微量比色池，也可选择使用常量比色皿（10mm光程） 5． 精度高且机器终身准确。具有密封的光路系统且无拆开部件，免去了昂贵的校正费用。使用了专利的样品压缩技术，避免样品的挥发及待测样品种类的受限。 6． 可选择不同的数据输出方式：通过内置打印机、SD-RAM卡、USB、或蓝牙输出。便于携带，可用于户外操作。 仪器展示：http://www.instrument.com.cn/download/shtml/149827.shtml 样本下载链接：http://www.instrument.com.cn/download/shtml/149827.shtml