亚型

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  • 抗体亚型:分类、鉴定详解

    [font=宋体][font=宋体]抗体亚型是指相同构成方式但空间结构各异的蛋白质结构。在机体内,这些[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”构型的免疫球蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体])因小分子多肽结构的细微差异,可进一步细分。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、抗体亚型分类[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重链亚型[/b][/font][font=宋体][font=宋体]抗体以单个或多个[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”字形单体形式存在,每个单体由[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条多肽链组成,包括两条相同的重链和两条相同的轻链。抗体的类型主要由重链决定。例如,哺乳动物的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]重链有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和μ命名,对应的抗体即[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]。其中,人和小鼠的γ重链可进一步细分为多个亚类,对应不同的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]亚型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]轻链亚型[/font][/b][font=宋体][font=宋体]哺乳动物轻链主要有[/font][font=宋体]λ型和κ型两种。出于科研需求,轻链的亚型鉴定也至关重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][align=center][img=不同亚型抗体的结构与功能,690,398]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081116147141_3653_5907840_3.png!w690x398.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]不同亚型抗体的结构与功能[/font][/align][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、鉴定原理与方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体亚型鉴定的原理基于酶联免疫吸附实验([/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体])。通过测定待测抗体与不同亚型特异性抗体的结合情况,找出能与待测抗体特异性结合的抗体,进而根据这些特异性抗体的已知性质,推断出待测抗体的亚型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前,常用的鉴定方法是利用试剂盒。按照说明书操作,可以直观地读出抗体的亚型。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、常见问题与解决方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]在利用试剂盒进行抗体亚型鉴定时,可能会遇到一些问题,如假阳性或假阴性结果。这时,需要检查实验操作是否规范,试剂是否过期,以及样本是否受到污染等,以确保结果的准确性。[/font][font=宋体] [/font][align=center][img=常见的问题与解决办法,690,202]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081116410260_5567_5907840_3.png!w690x202.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]抗体亚型:常见的问题与解决方法[/font][/align][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、鉴定意义[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不同亚型的抗体在结构和功能上存在差异,这决定了它们在体内发挥的不同作用。因此,对抗体进行亚型鉴定,有助于深入研究疾病的作用机理,为抗体药物的开发提供重要依据。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function][b]抗体的结构与功能[/b][/url]详情:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 1047万!云南省妇幼保健院2024年高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒采购项目

    [b]一、项目基本情况[/b] 项目编号:YNZC2024-G1-04226-YCZB-0111 项目名称:云南省妇幼保健院2024年高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒(第二批) 预算金额(万元):1047.618 最高限价(万元):1047.618 采购需求:1标段:高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒,数量:317,553人份,采购预算及最高限价为:3,493,083.00元;2标段:高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒,数量:317,553人份,采购预算及最高限价为:3,493,083.00元;3标段:高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒,数量:317,274人份,采购预算及最高限价为:3,490,014.00元; 合同履行期限:标段1:合同签订后按甲方实际要求完成配送,接到采购人供货通知后7日历天内全程按食品药品监督管理局要求将检测试剂盒、样本保存液及采样刷配送至云南省16州市妇幼保健院或采购人指定地点(样本保存液及采样刷需配送至县级)。 标段2:合同签订后按甲方实际要求完成配送,接到采购人供货通知后7日历天内全程按食品药品监督管理局要求将检测试剂盒、样本保存液及采样刷配送至云南省16州市妇幼保健院或采购人指定地点(样本保存液及采样刷需配送至县级)。 标段3:合同签订后按甲方实际要求完成配送,接到采购人供货通知后7日历天内全程按食品药品监督管理局要求将检测试剂盒、样本保存液及采样刷配送至云南省16州市妇幼保健院或采购人指定地点(样本保存液及采样刷需配送至县级)。 本项目(否)接受联合体投标。 [b]二、申请人的资格要求:[/b] 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定; 2.落实政府采购政策需满足的资格要求:包1、2、3:(1)本项目不属于专门面向中小企业采购的项目。(2)本项目需要落实的政府采购政策:《政府采购促进中小企业发展管理办法》(财库〔2020〕46号)、《关于进一步加大政府采购支持中小企业力度的通知》(财库〔2022〕19号)、《财政部民政部中国残疾人联合会关于促进残疾人就业政府采购政策的通知》(财库〔2017〕141号)、《关于政府采购支持监狱企业发展有关问题的通知》(财库〔2014〕68号)、《关于印发环境标志产品政府采购品目清单的通知》(财库〔2019〕18号)、《关于印发节能产品政府采购品目清单的通知》(财库〔2019〕19号)、《财政部发展改革委生态环境部市场监管总局关于调整优化节能产品、环境标志产品政府采购执行机制的通知》(财库〔2019〕9号)等。(3)小微企业价格扣除优惠比例:10%。;(1)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒:小微企业价格扣除优惠比例:10% (2)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒:小微企业价格扣除优惠比例:10% (3)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒:小微企业价格扣除优惠比例:10% 3.本项目的特定资格要求:【包1、2、3】 (1)投标人如果是代理商或经销商且所投产品为医疗器械,须提供医疗器械经营许可/备案证,所投产品制造商医疗器械生产许可证(制造商工商注册地在中华人民共和国境外的,不做此要求)、所投产品的医疗器械注册证及附件;投标人如果是制造商且所投产品为医疗器械,须提供医疗器械生产许可证(制造商工商注册地在中华人民共和国境外的,不做此要求)、所投产品的医疗器械注册证及附件。医疗器械生产或经营许可证生产或经营范围须覆盖所投第二、三类医疗器械(根据中华人民共和国国务院令第739号《医疗器械监督管理条例》和国家药品监督管理局《医疗器械分类目录》的规定,在《医疗器械分类目录》内的产品必须按照《医疗器械监督管理条例》 的要求提供,其他不在《医疗器械分类目录》内的不作强行要求);(2)投标人在本项目投标截止时间前未被列入“信用中国”网站(www.creditchina.gov.cn)失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单、国家企业信用信息公示系统和云南省政府购买服务信息平台/中国政府采购网(www.ccgp.gov.cn)“政府采购严重违法失信行为信息记录名单”; (3)投标人应遵守国家有关的法律、法令和条例,以及符合并承认和履行招标文件中的各项规定;(4)单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人,不得参加同一合同项下的政府采购活动;(5)本次招标不接受联合体投标。 [b]三、获取招标文件[/b] 时间:2024-08-23 00:00至2024-08-30 23:59,每天上午00:00至12:00,下午12:00至23:59(北京时间,法定节假日除外) 地点:政采云平台线上获取 方式:①凡有意参加投标者,须在政采云平台办理数字证书(CA),并在政采云绑定数字证书(CA)后线上获取采购文件及其它采购资料。CA申领链接:http://yzt.ynsmartcert.cn/cms/yztynyc.html 或https://middle.zcygov.cn/ca/apply/list?_app_=zcy.sys,CA申领后需登陆政采云平台完成数字证书(CA)绑定才可以使用,数字证书(CA)详见其办理流程。②按上述要求获取文件的供应商视为合法获取了本项目采购文件,具备本项目的投标资格。 售价(元):0 [b]四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点[/b] 2024-09-13 09:30(北京时间) 地点:云南省昆明市五华区云南省昆明市高新区海源中路1666号汇金大厦A座19楼开评标室1 [b]五、公告期限[/b] 自本公告发布之日起5个工作日。 [b]六、其他补充事宜[/b] 开标方式:网上开标 是否需要缴纳投标保证金:是 (1)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒: 保证金金额:30000(元) 保证金缴纳方式:支票、汇票、本票、保函、转账、电汇、网银等方式不限 保证金缴纳截止时间:2024-09-13 09:30 (2)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒: 保证金金额:30000(元) 保证金缴纳方式:支票、汇票、本票、保函、转账、电汇、网银等方式不限 保证金缴纳截止时间:2024-09-13 09:30 (3)高危型人乳头瘤病毒(16、18型及其它不细分亚型)核酸检测试剂盒: 保证金金额:30000(元) 保证金缴纳方式:支票、汇票、本票、保函、转账、电汇、网银等方式不限 保证金缴纳截止时间:2024-09-13 09:30 其他:2. 投标文件的递交网上递交:网上递交网址为政采云平台(https://www.zcygov.cn/),各供应商应在开标前应确保成为政采云平台供应商,并完成CA数字证书申领。因未注册入库、未办理CA数字证书等原因造成无法投标或投标失败等后果由供应商自行承担。投标人须在投标截止时间前完成所有投标文件的上传,投标截止时间前未完成投标文件上传的,视为撤回投标文件。若投标人未在规定时间完成解密的(如:无法解密、网络故障、未安装相关驱动、浏览器故障、加密CA与解密CA不一致等),则视为撤销其投标文件,不再进入评标阶段。开标过程中如有问题,可以发起在线异议,由代理机构给予对应的回复,在规定的异议询问时间内未提出异议的,则视为对开标结果无异议。注:任何因忽视或误解而导致投标文件未上传或已上传但未按规定的操作流程及时间要求进行解密的,由投标人自行负责。3. 发布公告的媒介:本次招标公告同时在《中国政府采购网》、《云南省政府采购网》上公开发布,我公司对其他网站转载本公告的内容不负任何责任。4.开户信息开户名:云南云创招标有限公司开户银行:招商银行昆明滇池路支行账号:8719 0345 1810 1020 0700 229 [b]七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。[/b] 1.采购人信息 名 称:云南省妇幼保健院 地址:昆明市鼓楼路200号 联系方式:0871-65810533 2.采购代理机构信息 名 称:云南云创招标有限公司 地址:昆明市高新区海源中路1666号汇金大厦A座19楼 联系方式:0871-64103756 3.项目联系方式 项目联系人:罗靖恒、王思霖、后俊、张韵、樊艳瑾 电 话:0871-64103756

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  • 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)检测试剂盒
    人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)检测试剂盒人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)抗原、生物素化的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)ELISA试剂盒
    人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)ELISA试剂盒中文名称 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)ELISA试剂盒英文名称 Human muscarinic acetylcholine receptor subtype M3 (M-AChR M3) ELISA kit 规格 96T/48T 生 产 商 进口原装/分装 产品介绍 实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)抗原、生物素化的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  • 过滤对一种 IgG2 亚型 EGFR 单抗中不溶性微粒的影响
    单抗SBP是目前国内生物制品中申报临床试验多的品种,药学研究证实与已上市RBP具有“质量相似性”是其作为SBP开发的先决条件,如果 SBP的产品质量明显区别于原研产品,可以作为药学研究存在重大缺陷,并作为审评不予通过的理由;反之,如果质量高度相似,那么可以根据相似的程度决定着后续非临床、临床研究是否可以简化。本文以某IgG2亚型的EGFR单抗为例,使用FlowCam微流数字成像技术分析不溶性微粒这一关键质量属性,发现其SBP候选药与 RBP存在较大差异,蛋白聚集倾向明显,说明研发和质控水平有待提高,为国内相关企业在单抗SBP 生产过程、制剂配方筛选、包材选用、储运及临床 应用等方面的研究提供思路与方法,以保证产 品质量、安全性和有效性,终惠及广大病患。

亚型相关的资讯

  • H1N1流感病毒及多亚型流感病毒检测基因芯片面世
    继不久前成功研制出快速检测甲型H1N1流感病毒试剂盒后,中国军事医学科学院军事兽医研究所又研制出一种新型基因芯片,借助这种芯片能在5小时内获得检测结果。   据介绍,使用这种基因芯片能够用来检测1-16种亚型甲型流感病毒,并可以对当前流行的甲型H1N1流感病毒进行特异性检测,还可以对H1、H3、H5、H7、H9亚型流感病毒进行分型检测。该检测方法可同时对12个样品进行快速、灵敏、特异性检测(阳性样品显示特异荧光),并在3.5-5小时内获得检测结果。   军事兽医研究所工作人员表示,与试剂盒检测相比,基因芯片具有用时短、一次性检测样品多等优点,将为中国应对潜在疫情提供有力的技术支持。
  • 单细胞蛋白质分析技术Milo追踪定量不同iPSC-CM分化亚型
    iPSC简介2006年Takahashi和Yamanaka突破性发现使终末分化、谱系受限的成体细胞:如皮肤活检来源的成纤维细胞、外周血来源的T淋巴细胞、毛囊细胞等,通过转录因子OCT4、SOX2、KLF、c-MYC、NANOG和LIN28的强制异位表达直接将其重编程为多能状态的细胞,这些细胞被称为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)。iPSC与胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells, ESC)有相似的基因表达、表观遗传谱和分化潜能,可产生任何类型的体细胞。并且避免了ESC基于使用胚胎来源细胞和可能导致异常发育的体外受精胚胎的伦理问题,因此iPSC在医疗领域里具有更好的应用和产业化发展前景。iPSC应用和挑战描述任何人类疾病和药物发现的病因学和病理生理学的主要关键组成部分是需要一个生理相关的疾病实验模型,无论是体外还是体内或两者,需要忠实地概括各自的病理生理学和临床表现。因此基于人类iPSC的疾病模型可以无限供应临床相关的表型细胞、以及它们具有的衍生潜力,可以加速阐明生物医学研究中疾病的病因机制,应用于新药发现、药物效价测试、预测药物安全性药理学/毒理学研究,以及基于iPSC的再生细胞疗法,有望治疗心脏病、帕金森、视网膜和角膜疾病、肝脏衰竭、糖尿病、脊髓损伤等疾病。然而将iPSC治疗方法真正有效转化为临床环境,保证患者安全,还需解决:临床级iPSC的衍生和通用细胞系的生物库建立;需要定义iPSC及其差异化治疗细胞产品可接受质量属性;致瘤性问题;免疫排斥反应;选择同种异体或自体 iPSC 以获得更有效的细胞治疗的难题;iPSC 谱系表型细胞和细胞系变异的异质性;基于iPSC的多基因、散发性和迟发性疾病的患病模型的挑战;需要大量的患者iPSC以实现更有效的病因学和临床转化;iPSC衍生的表型细胞缺乏成熟度;遗传的不稳定性等挑战。iPSC-CM研究和面临的问题心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)作为全球主要的死因之一,每年会导致约1790万人死亡,所以迫切需要可以延缓疾病进展并且可以改善心脏功能和预防衰竭的治疗方法。而目前的药物、介入或手术方法可能会改善临床结果,但由于无法促进心脏组织修复和再生,因此使这种治疗方法的成功率得不到提升。人类诱导多能干细胞(hiPSC)技术的出现以及随后在培养物中分化和建立心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的能力,为实现人类心脏再生疗法创造了可能性。作为分化CMs的连续和生物学相关来源,hiPSC-CM是心血管研究界的宝贵工具,不仅可用于治疗CVD,还可用于模拟人类心脏发育和疾病、研究潜在机制以及筛选具有疗效和心脏毒性的新药。由于hiPSC-CM由不同的细胞亚群组成,这些细胞亚群是异质的、未成熟的、表达胎儿基因表达谱,并且与成人心肌细胞相比收缩力减少,因此hiPSC-CM疾病模型的准确性和实用性仍然有限。此外,随着hiPSC-CMs的成熟和蛋白质表达动态的波动,大量样品分析的分辨率变得不足。由于其异质性导致心室样、心房样和节点样亚群,需要严格表征hiPSC-CM,并应对其成熟度、身份和功能进行筛选。为此,需要进行单细胞分析模式以了解这种异质性。细胞异质性研究方法虽然单细胞测序技术在分析单细胞转录组学和基因组信息的通量和规模方面取得了进步,但由于任何一个细胞中存在的蛋白质含量非常低,因此难以满足对定量、单细胞蛋白质组学技术的需求。此外,蛋白质组的复杂性和广泛的浓度范围(fM到高nM)带来了额外的挑战。为了在单细胞水平上进行生化蛋白质表征分析,高灵敏度工具是必不可少的。来自ProteinSimple的单细胞蛋白质分子技术:Milo是一种基于微流体的芯片电泳技术。可以克服单细胞蛋白质组学方法面临的障碍。Milo操作流程将细胞悬浮液加载到Milo芯片上,这样单个细胞就可以安放在芯片上的各个微孔中。然后Milo裂解细胞,产生单细胞裂解物,通过分子量电泳分离每个单细胞裂解物中的蛋白质,然后使用紫外线在Milo芯片中捕获蛋白质。然后,对目标蛋白进行一级抗体和荧光二级抗体进行免疫荧光捕获。通过使用开放格式的微阵列扫描仪对芯片进行成像,并使用Scout™ 软件对图像进行分析,以进行定量的自动数据分析。Milo追踪定量不同iPSC-CM亚型与免疫荧光和流式细胞术等其他单细胞分析系统不同,单细胞Western Blot技术Milo可以提供分子量大小信息,以及在单细胞水平测量蛋白质表达时的免疫结合信息,赋予额外的特异性。这种分子量分级步骤可以分辨不同物种的不同蛋白质亚型或区分脱靶抗体结合。为了表征CMs亚型标志物,通过Milo检测了肌球蛋白调节轻链2心房亚型(MLC2A或MYL7)及其心室亚型(MLC2V或MYL2)的蛋白质表达。可以观察到Milo鉴定了三个亚群,这些亚群由MLC2A或MLC2V的单一表达或共表达组成。Milo检测到hiPSC-CM亚型特异性心室和心房标记物MLC2V和MLC2A,在45秒的电泳运行时间内,迁移到总泳道长度的60%(图A)。使用Milo-Scout™ 软件通过找到典型峰形与源自原始荧光图像的一维强度图的卷积的局部最大值来识别峰中心。检测到的MLC2A、MLC2V和GAPDH峰的峰中心位置也由泳道指数显示(图B),显示出单个Milo芯片上所有孔的峰迁移的均匀性。为了评估芯片位置(图C)是否影响峰面积量化,比较了空间不同块之间计算的峰面积方差:每个块区域之间的差异小于2.5%(图D)。应用优化的Milo的检测方法研究hiPSC-CM随时间的异质性,观察整个分化时间线中蛋白质表达的变化。在第17、23和30天从培养物中提取hiPSC-CM细胞,检测MLC2A和MLC2V蛋白质表达。结果显示,共表达MLC2A和MLC2V阳性细胞的比例在整个分化过程中增加,而仅表达MLC2A(MYL7+)的细胞比例随时间减少。且三个亚群中每个亚群中的细胞百分比在所有芯片中一致重现。为了了解在整个分化过程中每个标记物的表达水平在hiPSC-CM亚群中的变化,在hiPSC-CM分化的第17、23和30天对MLC2V和MLC2A的表达进行了量化。随着分化的进行,MLC2A的总水平略有增加。然而,MLC2V表达在第23天和第30天之间增加了近三倍(图C)。为了了解驱动MLC2V表达增加的细胞亚群,三个亚群(MLC2A+、MLC2V+和共表达MLC2A+和MLC2V+)被进一步分层(图D)。MLC2V的水平在共表达MLC2A+和MLC2V+亚群中显着增加,以及在单独的MLC2V+亚群中增加。为了进一步了解导致hiPSC-CM分化过程中MLC2V表达显着增加的机制,对先前从三个iPSC系产生的hiPSC-CM进行了Milo分析,其中转录因子NR2F2 (NR2F2GE)、TBX5 (TBX5GE) 的外显子)和HEY2 (HEY2GE) 被CRISPR/Cas9编辑删除。利用这些品系来验证NR2F2、HEY2或TBX5缺陷在单细胞蛋白质水平上对MLC2V表达的影响。结果显示,TBX5GE和HEY2GE hiPSC-CM中MLC2V的单细胞表达显着降低(图E)。此外,MLC2V表达的显着下降归因于共表达MLC2A和MLC2V亚群(图F)。鉴于共表达MLC2A和MLC2V的亚群增加了MLC2V的表达,推测单独表达MLC2A的未成熟hiPSC-CM会随着时间的推移共同表达MLC2V,从而变得更像心室。同时使用预测调节MLC2V(HEY2或TBX5)的转录因子缺陷的两种细胞系时,我们仅观察到MLC2V在共表达MLC2A和MLC2V亚群中表达降低。这可能表明单独表达的MLC2V群体代表了一个独特的细胞亚群,并且该亚群中MLC2V的表达受替代转录因子的调节。结论:随着在基础和转化心脏研究中的应用,hiPSC-CM正被用于心血管疾病和心脏发育研究。然而,由于hiPSC-CM由不同的细胞亚群组成,并且hiPSC-CM蛋白表达动力学随着成熟而波动,一些蛋白分析方法可能因为分辨率不足而无法检测单细胞蛋白异质性,因此hiPSC-CM的单细胞蛋白质组学可能受到依赖抗体结合检测而无法评估脱靶结合技术的限制。单细胞蛋白质分析技术Milo,通过靶点分子量差异和抗体识别特异性蛋白标记物,避免了抗体脱靶结合的现象,同时能够跟踪单细胞亚群蛋白表达随时间的变化,从而能够识别并量化hiPSC-CM中不同的异质性亚群,应用于疾病建模和再生医学治疗研究。参考文献:1 Current Challenges of iPSC-Based Disease Modeling and Therapeutic Implications.2 Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: insights into molecular, cellular, and functional phenotypes.3 Single-cell protein expression of hiPSC-derived cardiomyocytes using Single-Cell Westerns.
  • 罗氏NimbleGen定制捕获芯片用于白血病亚型分子标记发现
    许多白血病的致病机制尚不清楚,其中慢性中性粒细胞白血病(Chronic Neutrophilic leukemia)及非典型慢性髓性白血病(BCR-ABL1-negative atypical Chronic Myeloid Leukemia)的诊断通常仅仅基于粒细胞的恶性增殖,以不含有其他白血病的基因标记作为诊断标准,而缺乏对其本身驱动基因的认识。 近期在新英格兰杂志上发表的一篇文章1对这类白血病的分子机制进行的深入研究。作者对27例慢性中性粒细胞白血病以及非典型CML骨髓或血液样本进行了部分基因定向高深度测序,分析基因突变的情况,发现一个基因CSF3R的突变在这个类群病人中的尤其常见。而CSF3R基因的功能正是细胞生长因子的受体,可以刺激中性粒细胞分化和增殖,这与这类病人的临床表型一致。 同时对病人分离的肿瘤细胞进行tyrosine kinase&ndash specific small interfering RNAs 或 small-molecule kinase inhibitors筛选实验。对于突变进行体外细胞转化实验验证,并用原始细胞克隆进行药敏试验。这些实验验证了这一基因的突变改变下游信号通路,也可造成细胞的增殖。药敏试验也证实了该基因的多种突变可对不同的下游通路中的抑制剂敏感,尤其一个病人在接受相应的抑制剂治疗后临床症状得到改善。作者认为,CSF3R突变在CNL及atypical CML的常见,而在其他白血病亚型中相对罕见,可用于慢性中性粒细胞白血病及非典型慢性髓性白血病白血病分型的重要分子诊断参考。 在CSF3R基因突变的发现过程中,主要利用NimbleGen的定制型序列捕获芯片,对1683个基因的外显子序列进行富集后,再进行二代测序仪进行深度测序。突变分析结果中,这一病人群体中的59%携带CSF3R突变,可活化这一受体,突变主要分布在CSF3R的两个独立区域内,分别导致CSF3R下游的SRC family-TNK2或者JAK Kinase的活化。 图:显示不同CSF3R基因突变对于细胞通路的影响。1 随着生物技术的发展,将为越来越多疾病的致病机制探索提供更加有效地手段,其中之一是利用高深度的定向测序方法寻找疾病相关基因。通过NimbleGen序列捕获芯片,可对人类全外显子组序列,或者所感兴趣的部分基因进行高效富集,衔接二代测序,可以更加经济有效地进行研究工作,同时也减少的数据分析的压力,这方法已经为国内外越来越多的研究人员所采用。 1.Oncogenic CSF3R mutations in chronic neutrophilic leukemia and atypical CML. Maxson JE, Gotlib J, Pollyea DA, Fleischman AG, Agarwal A, Eide CA, Bottomly D, Wilmot B, McWeeney SK, Tognon CE, Pond JB, Collins RH, Goueli B, Oh ST,Deininger MW, Chang BH, Loriaux MM, Druker BJ, Tyner JW.N Engl J Med. 2013 May 9 368(19):1781-90. doi: 10.1056/NEJMoa1214514.

亚型相关的仪器

  • Agilent ProteoAnalyzer 系统是一种平行毛细管电泳仪器,可自动进行还原型和非还原型蛋白质样品的毛细管电泳-十二烷基硫酸钠 (CE-SDS) 分析。 该系统能够在短短 30 min 内对 12 个样品进行分离,省去了 SDS-PAGE 凝胶制备、染色/脱色和分析的繁琐过程,让您专注于结果。ProteoAnalyzer 系统可分离 10 kDa 至 240 kDa 的蛋白质,能够在单次运行中分析宽分子量范围的蛋白质。 在每次分离之间可恢复各个毛细管的性能,因此可以分析不同的样品,包括单克隆抗体、生物仿制药、蛋白质纯化组分和粗裂解物。特性:分析时间短 — 只需 30 min 即可平行分析 12 个蛋白质样品支持各种样品类型 — 可靠地分离具有挑战性的蛋白质样品,如膜蛋白和粗裂解物高分离分辨率 — 分离糖基化和非糖基化亚型宽分子量范围 — 安捷伦宽范围蛋白质 P240 试剂盒可测量 10 至 240 kDa 的蛋白质高灵敏度 — 可检测 PBS 中浓度低至1 ng/µ L 的 BSA 蛋白更宽的样品浓度范围 — PBS 中 BSA 样品的线性动态范围为 2-2000 ng/µ L提高实验室效率 — 在当前正在进行分离的情况下,上样并设置下一次运行灵活的上样方式 — 可以在队列中上下移动样品以调整运行顺序仪器准备时间非常短 — 无需进行日常阵列处理,并使用室温下稳定的试剂性能指标:功耗150 VA宽度35 cm尺寸(宽 x 深 x 高)35 cm x 51 cm x 61 cm操作环境的相对湿度20 - 80 %每次运行的样品数12深度51 cm电源电压100 - 240 VAC电源频率47 - 63 Hz重量38.5 kg高度61 cm
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  • 安捷伦宽范围蛋白质 P240 试剂盒旨在为包括单克隆抗体、可溶性组分、膜组分和粗裂解物(分子量最高可达 240 kDa)在内的多种蛋白质提供解决方案。 两次运行之间可完全恢复毛细管电泳环境,确保了蛋白质分析的高度一致性。宽范围蛋白质 P240 试剂盒可在 30 min 内为 10 至 240 kDa 的蛋白的分离提供高分辨率结果。这样可以在单次自动电泳运行中分析宽分子量范围的复杂样品。 快速共价标记法避免了分析区域出现系统峰,同时提供了 3 个数量级的动态范围,能够检测低至 0.1% 的杂质。特性:快速分析 — 在大约 30 min 内平行分离 12 个样品准备时间短 — 只需 10 分钟的手动操作时间即可准备好样品广泛的定量范围 — 支持 2-2000 ng/µ L 的起始样品浓度支持各种样品类型 — 能够可靠地分离各种难分离的蛋白质样品,如膜蛋白和粗裂解物高分辨率 — 明确分离糖基化和非糖基化亚型无系统峰干扰 — 共价标记法可消除分离中的共迁移系统峰适用于多种应用 — 能够在还原和非还原条件下分析样品性能指标:保质期4 个月分子量测定范围LM only: 10 - 240 kDa LM and UM: 10 - 200 kDa bp分析时间30 min / 11 samples + 1 ladder min定量精度 25 % CV定量范围2 - 2,000 ng/µ L for BSA in PBS定量重现性20 - 2,000 ng/µ L BSA: 15% CV, 2 - 20 ng/µ L BSA: 25 % CV样品量1 µ L每个试剂盒的使用次数275灵敏度1 ng/µ L (BSA),CAII 的 PBS 溶液片段大小测定准确度LM only: 15% for BSA, CAII LM and UM: 10% for BSA, CAII片段大小测定分辨率 10% molecular weight resolution between 15 to 150 kDa (based upon ladder) R≥1 NIST mAb NGHC/HC (using reduced conditions) %片段大小测定精度LM only: 8% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1, and NIST mAb (using reduced conditions), 10% CV for intact NIST mAb (using non-reduced conditions) LM and UM: 5% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1 and NIST mAb (using reduced conditions) % CV
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