色谱双峰定量

各位小伙伴在做实验过程中通常会遇到各种奇奇怪怪的问题，其中色谱峰出现双峰可以说是经常会遇见的一类问题。遇见双峰了该怎么去解决呢，这里听小编慢慢道来。HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。色谱双峰指的是一种物质，但在色谱图中出现双峰，这种情况分为四种原因。 1.色谱柱堵塞或污染 如果你分析样品时发现每个色谱峰都出现双峰（出峰越快，出现双峰的可能性越少），尤其采用单一纯物质时，可以判定色谱柱出问题（柱头受损或柱头固定相变脏或流失）。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头端堵塞，将色谱柱反接冲洗维护，一般情况下可以解决。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头填料受污染或键合相流失可能性更大，这时可以对色谱柱维修处理或者使用新的色谱柱，维修建议交由厂家处理。 2.溶剂极性及进样量不合适许多小伙伴对此可能不以为然，一般的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，以及各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解，溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用极性强度大的试剂做溶剂时，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如20ul，单一的纯物质出双峰，第二峰比第yi峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。 另一个原因是，进样量不一定大，但浓度很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。 3.样品的特性和PH值不了解有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，甚至三峰。这时一般双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其改变pH，双峰现象将消失。 pH对峰形的影响在缓冲液流动相平衡过程中非常明显，当连续进样时，受pH的连续变化影响会经常遇到这种双峰的情况。另外，在样品分析时，流动相的pH尽量远离被分析物的等电点，否则也容易引起双峰的产生。在用离子对试剂分析时，选择不好条件也会容易引起双峰的产生。 4.仪器参数设置不合理参比波长设置错误，例如设置分析波长254nm，参比波长400nm，这个对于大多数化合物可能没影响。但是如果被测化合物，在400nm处也有强的紫外吸收，比254nm更高。这样其出峰时，由于背景的抵扣作用，本来一个峰会变成对称的二个峰，而且如果将二峰之间的峰谷反转180度，恰好是一个完整的峰。这时要将参比波长设置更大，或者取消。 以上就是小编给各位小伙伴整理的出现双峰的原因和对应解决方案，高效液相色谱是一套非常精密的分析系统，一旦出现异常峰形需要认真排查原因，找到合适解决方案。各位小伙伴若还有任何疑问，欢迎咨询我们的当地销售或经销商。

html, body { -webkit-user-select: text } * { padding: 0 margin: 0 } .web-box { width: 100% text-align: center } .wenshang { margin: 0 auto width: 80% text-align: center padding: 20px 10px 0 10px } .wenshang h2 { display: block color: #900 text-align: center padding-bottom: 10px border-bottom: 1px dashed #ccc font-size: 16px } .site a { text-decoration: none } .content-box { text-align: left margin: 0 auto width: 80% margin-top: 25px text-indent: 2em font-size: 14px line-height: 25px } .biaoge { margin: 0 auto /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 25px } .table_content { border-top: 1px solid #e0e0e0 border-left: 1px solid #e0e0e0 font-family: Arial /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 10px margin-left: 15px } .table_content tr td { line-height: 29px } .table_content .bg { background-color: #f6f6f6 } .table_content tr td { border-right: 1px solid #e0e0e0 border-bottom: 1px solid #e0e0e0 } .table-left { text-align: left padding-left: 20px } 详细信息 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 湖南省-娄底市-双峰县 状态：公告 更新时间： 2023-05-25 基本信息 项目名称： 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 项目编号： E4313002613D08343 项目所属区域： 双峰县 采购人： 双峰县中医医院 保证金： 0元 多标： 内容 双峰县中医医院搬迁设备采购项目招标公告项目概况 双峰县中医医院搬迁设备采购项目的潜在投标人应在《湖南省政府采购网》、《娄底市公共资源交易网》上下载获取招标文件，并于2023年6月15日9点00分（北京时间）前网上递交电子投标文件。一、采购项目名称、编号 1、采购项目名称： 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 2、政府采购编号： 双峰财采计2023-0037 3、采购代理编号：HNMCCGSF2023-0064、采 购 方 式：公开招标5、采购项目预算：10179281.82元6、采购项目最高限价：10179281.82元7.交货期：按采购人要求，签订合同后50天内并交货。二、采购人的采购需求 序号 包名称 简要技术要求 数量 标的预算（元） 最高限价（元） 节能产品 进口产品 1 吊塔 详见招标文件 4 49000 196000 ¨ ¨ 2 无影灯（双灯） 3 147750 443250 ¨ ¨ 3 无影灯（单灯） 1 83500 83500 ¨ ¨ 4 电动手术床 3 190000 570000 ¨ ¨ 5 心电监护仪带呼末、转运宝 1 78232 78232 ¨ ¨ 6 心电监护仪 1 31360 31360 ¨ ¨ 7 产科保暖台 1 97000 97000 ¨ ¨ 8 医用干燥柜 1 80000 80000 ¨ ¨ 9 恒温箱 4 7200 28800 ¨ ¨ 10 加温毯 1 25000 25000 ¨ ¨ 11 输液加温器 1 42945 42945 ¨ ¨ 12 神经刺激仪 1 36750 36750 ¨ ¨ 13 对接车 1 11550 11550 ¨ ¨ 14 运送平车 1 5958 5958 ¨ ¨ 15 三套车 5 3800 19000 ¨ ¨ 16 抢救专用车 1 4567.5 4567.5 ¨ ¨ 17 洗手池（3人位） 2 11760 23520 ¨ ¨ 18 电动吸引器（无油式） 5 1200 6000¨ ¨ 19 不锈钢双杆方盘托架 5 700 3500 ¨ ¨ 20 不锈钢污物车 5 972 4860 ¨ ¨ 21 可升降圆凳 15 600 9000 ¨ ¨ 22 阅片灯（双联） 5 1000 5000 ¨ ¨ 23 麻醉车 4 6600 26400 ¨ ¨ 24 彩超 1 2997907.5 2997907.5 ¨ ¨ 25 胃肠镜系统 1 1870000 1870000 ¨ t 26 血液净化超纯用水系统 1 1000000 1000000 ¨ ¨ 27 血液透析机（单泵） 4 132000 528000 ¨ ¨ 28 血液透析机（双泵） 1 231000 231000 ¨ ¨ 29 床（单摇/套） 100 2419 241900 ¨ ¨ 30 牙科综合治疗椅 1 32000 32000 ¨ ¨ 31 光固化机 1 890 890 ¨ ¨ 32 超声牙科治疗仪 1 12337.5 12337.5 ¨ ¨ 33 全等离子空气消毒机 9 59820 538380 ¨ ¨ 34 全等离子空气消毒机 2 107820 215640 ¨ ¨ 35 全等离子空气消毒机 6 47820 286920 ¨ ¨ 36 全等离子空气消毒机 4 40620 162480 ¨ ¨ 37 全等离子空气消毒机 6 28800 172800 ¨ ¨ 38 全等离子空气消毒机 10 10080 100800 ¨ ¨ 39 PE环保加厚风管 800 43.2 34560 ¨ ¨ 40 降噪管 62 168 10416 ¨ ¨ 41 静音风分箱 21 0 0 ¨ ¨ 42 散流器 100 0 0 ¨ ¨ 43 控制器 21 0 0 ¨ ¨ 44 安装附件 21 0 0 ¨ ¨ 45 麻醉机 1 280000 280000 ¨ ¨ 46 超声波清洗机 1 70000 70000 ¨ ¨ 47 高频电刀 2 48405 96810 ¨ ¨ 采购项目需要落实的政府采购政策：（1）优先采购：政府采购鼓励采购节能环保产品、政府采购支持两型产品。（2）价格评审优惠：政府采购促进中小微企业发展（包括政府采购支持监狱企业发展、政府采购促进残疾人就业）。（3）根据湘财购【2021】46号文件精神，推行“承诺 信用”管理，简化中小企业参与政府采购证明材料，符合法定资格条件的供应商可将资格承诺声明作为资格证明材料（格式见附件四），无需再提供财务状况、缴纳税收和社会保障资金等资格证明材料（适用于中小企业，其中监狱企业和残疾人福利性单位、符合中小企业划分标准的个体工商户视同小型、微型企业）。2、采购进口产品：同意购买进口产品的，不限制满足采购需求的国内产品参与投标。三、投标人的资格要求：1、投标人的基本资格条件：投标人必须是在中华人民共和国境内注册登记的法人（或授权的分公司）、其他组织或者自然人，且应当符合《政府采购法》第二十二条第一款的规定，即： （1）具有独立承担民事责任的能力；（2）具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度；（3）具有履行合同所必需的设备和专业技术能力；（4）有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录；（5）参加政府采购活动前三年内，在经营活动中没有重大违法记录；（6）法律、行政法规规定的其他条件。2、采购项目的特定资格条件：供应商须有医疗器械生产许可证或医疗器械经营许可证，且处于有效期；3、单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人，不得参加同一合同项下的政府采购活动。4、为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的，不得再参加此项目的其他招标采购活动。5、列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单，列入政府采购严重违法失信行为记录名单的，拒绝其参与政府采购活动。6、联合体投标。本次招标不接受联合体投标。 7、资格审查方式：资格后审。四、获取招标文件的时间、期限、地点、方式 1、时间：娄底市公共资源交易中心网电子采购平台上自动获取开始之日起至自动截止之日止；2、地点：娄底市公共资源交易网（http://ldggzy.hnloudi.gov.cn/）；3、方式：凡有意参加采购活动的供应商，自行在娄底市公共资源交易网（http://ldggzy.hnloudi.gov.cn/）选择进入“公共资源交易平台”，用湖南CA证书登陆后获取招标文件；4、投标人自行在以上网站下载或查阅招标相关文件和资料等，恕不另行通知，如有遗漏招标采购单位概不负责。 五、递交投标文件的截止时间、开标时间及地点1、本招标项目采用电子化招标采购，请投标人使用企业数字证书（key）登录娄底市公共资源交易中心网站（http://ldggzy.hnloudi.gov.cn/）点击公告选择项目按照页面提示网上投标，下载招标资料（电子招标文件为gef格式）、项目投标的壳文件和加密程序，网上递交电子投标文件。2、电子投标文件递交的截止时间（即：投标截止时间，下同）及开标时间：2023年6月15日9点00分（北京时间），地点为娄底市公共资源交易中心（具体详见电子显示屏）。3、解密截止时间：2023年6月15日9点30分（北京时间）（投标截止时间后30分钟）。请投标人确保投标文件如期解密。4、电子投标文件制作工具（金润投标人工具箱）和操作说明书请在该项目资料中下载。（注：投标人必须使用新版本的金润电子投标人工具箱（娄底V6.6.0）制作投标文件，否则投标无效，金润电子投标人工具箱（娄底V6.6.0）下载地址：http://ldggzy.hnloudi.gov.cn/ldjyzx/fwzn_xzzq/202107/581854be6936416abbaced7f8383de24.shtml。）（1）请各投标人一定要提前熟悉系统操作和软件操作，电子投标文件为gef格式。投标过程中如遇问题可联系金润技术客服：客服电话：4008199995，客服QQ：2159511823，如因不会操作所造成的投标失败或损失由投标人自行负责。（2）由于对网上招投标操作不熟悉或自身电脑、个人网络等原因导致不能在投标截止时间之前完成投标文件上传的，视为无效投标，相应责任由投标人自行承担。在使用系统过程中有疑问或困难请及时进行咨询。（3）投标人自行完成投标文件解密，因投标人自身原因未在规定时间内完成解密或无法解密的投标文件视为撤销其投标文件，相应责任由投标人自行承担。六、公告期限1、本招标公告在中国湖南政府采购网（www.ccgp-hunan.gov.cn）发布。公告期限从本招标公告发布之日起5个工作日。2、在其他媒体发布的招标公告，公告内容以本招标公告指定媒体发布的公告为准；公告期限自本招标公告指定媒体最先发布公告之日起算。七、询问及质疑：1、投标人对政府采购活动事项如有疑问的，可以向采购人、采购代理机构提出询问。采购人、采购代理机构将在3个工作日内作出答复。2、潜在投标人认为招标文件或招标公告使自己的合法权益受到损害的，可以在收到招标文件之日或招标公告期限届满之日起7个工作日内，按《湖南省财政厅关于印发＜政府采购质疑答复和投诉处理操作规程＞的通知》(湘财购〔2019〕20号)规定，以书面形式向采购人、采购代理机构提出质疑。八、其他补充事宜1、投标保证金：为响应娄底市财政局《娄财购函〔2022〕20号》文件精神，本项目免收政府采购投标保证金。2、为贯彻落实市委市政府要求和《娄底市新冠肺炎疫情防控工作指挥部令（第1号）》精神，确保疫情防控期间场内交易规范有序，本项目为线上不见面开标，评标委员会按投标人提交的电子投标文件进行评审，资料的真实性、合法性由投标人负责，如有虚假，已中标的将取消中标资格，并依法承担相应责任。3、线上澄清注意事项：评标委员会专家在评标室，对需要进行答疑的单位进行提问，投标单位收到短信后在规定时间内在交易平台进行澄清（快捷导航-澄清答疑-选择进行答疑的项目）查看问题并上传答疑附件（答疑附件以PDF格式上传）。九、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。采购人名 称：双峰县中医医院 地 址：双峰县永丰镇复兴路24号联系人：贺先生 电话：13973836293采购代理机构名称：湖南明诚项目管理有限公司 联系地址：双峰县永丰街道井湾安置区27栋联系人：彭女士 电 话：13907387131 监督部门：双峰县政府采购管理办公室联 系 人：彭主任电 话：0738-6827388 发表日期： 2023-05-25 附件： 招标文件-双峰县中医医院搬迁设备采购项目.docx[已固化]-双峰县中医医院搬迁设备采购项目.gef × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 $('.clickModel').click(function () { $('.modelDiv').show() }) $('.closeModel').click(function () { $('.modelDiv').hide()}) 基本信息 关键内容：超声波清洗器 开标时间：2023-06-15 09:00 预算金额：1017.93万元 采购单位：双峰县中医医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：湖南明诚项目管理有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 湖南省-娄底市-双峰县 状态：公告 更新时间： 2023-05-25基本信息 项目名称： 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 项目编号： E4313002613D08343 项目所属区域： 双峰县 采购人： 双峰县中医医院 保证金： 0元 多标： 内容 双峰县中医医院搬迁设备采购项目招标公告项目概况 双峰县中医医院搬迁设备采购项目的潜在投标人应在《湖南省政府采购网》、《娄底市公共资源交易网》上下载获取招标文件，并于2023年6月15日9点00分（北京时间）前网上递交电子投标文件。一、采购项目名称、编号 1、采购项目名称： 双峰县中医医院搬迁设备采购项目 2、政府采购编号： 双峰财采计2023-0037 3、采购代理编号：HNMCCGSF2023-0064、采 购 方 式：公开招标5、采购项目预算：10179281.82元6、采购项目最高限价：10179281.82元7.交货期：按采购人要求，签订合同后50天内并交货。二、采购人的采购需求 序号 包名称 简要技术要求 数量 标的预算（元） 最高限价（元） 节能产品 进口产品 1 吊塔 详见招标文件 4 49000 196000 ¨ ¨ 2 无影灯（双灯） 3 147750 443250 ¨ ¨ 3 无影灯（单灯） 1 83500 83500 ¨ ¨ 4 电动手术床 3 190000 570000 ¨ ¨ 5 心电监护仪带呼末、转运宝 1 78232 78232 ¨ ¨ 6 心电监护仪 1 31360 31360 ¨ ¨ 7 产科保暖台 1 97000 97000 ¨ ¨ 8 医用干燥柜 1 80000 80000 ¨ ¨ 9 恒温箱 4 7200 28800 ¨ ¨ 10 加温毯 1 25000 25000 ¨ ¨ 11 输液加温器 1 42945 42945 ¨ ¨ 12 神经刺激仪 1 36750 36750 ¨ ¨ 13 对接车 1 11550 11550 ¨ ¨ 14 运送平车 1 5958 5958 ¨ ¨ 15 三套车 5 3800 19000 ¨ ¨ 16 抢救专用车 1 4567.5 4567.5 ¨ ¨ 17 洗手池（3人位） 2 11760 23520 ¨ ¨ 18 电动吸引器（无油式） 5 1200 6000 ¨ ¨ 19 不锈钢双杆方盘托架 5 700 3500 ¨ ¨ 20 不锈钢污物车 5 972 4860 ¨ ¨ 21 可升降圆凳 15 600 9000 ¨ ¨ 22 阅片灯（双联） 5 1000 5000 ¨ ¨ 23 麻醉车 4 6600 26400 ¨ ¨ 24 彩超 1 2997907.5 2997907.5 ¨ ¨ 25 胃肠镜系统 1 1870000 1870000 ¨ t 26 血液净化超纯用水系统 1 1000000 1000000 ¨ ¨ 27 血液透析机（单泵） 4 132000 528000 ¨ ¨ 28 血液透析机（双泵） 1 231000 231000 ¨ ¨ 29 床（单摇/套） 100 2419 241900 ¨ ¨ 30 牙科综合治疗椅 1 32000 32000 ¨ ¨ 31 光固化机 1 890 890 ¨ ¨ 32 超声牙科治疗仪 1 12337.5 12337.5 ¨ ¨ 33 全等离子空气消毒机 9 59820 538380 ¨ ¨ 34 全等离子空气消毒机 2107820 215640 ¨ ¨ 35 全等离子空气消毒机 6 47820 286920 ¨ ¨ 36 全等离子空气消毒机 4 40620 162480 ¨ ¨ 37 全等离子空气消毒机 6 28800 172800 ¨ ¨ 38 全等离子空气消毒机 10 10080 100800 ¨ ¨ 39 PE环保加厚风管 800 43.2 34560 ¨ ¨ 40 降噪管 62 168 10416 ¨ ¨ 41 静音风分箱 21 0 0 ¨ ¨ 42 散流器 100 0 0 ¨ ¨ 43 控制器 21 0 0 ¨ ¨ 44 安装附件 21 0 0 ¨ ¨ 45 麻醉机 1 280000 280000 ¨ ¨ 46 超声波清洗机 1 70000 70000 ¨ ¨ 47 高频电刀 2 48405 96810 ¨ ¨ 采购项目需要落实的政府采购政策：（1）优先采购：政府采购鼓励采购节能环保产品、政府采购支持两型产品。（2）价格评审优惠：政府采购促进中小微企业发展（包括政府采购支持监狱企业发展、政府采购促进残疾人就业）。（3）根据湘财购【2021】46号文件精神，推行“承诺 信用”管理，简化中小企业参与政府采购证明材料，符合法定资格条件的供应商可将资格承诺声明作为资格证明材料（格式见附件四），无需再提供财务状况、缴纳税收和社会保障资金等资格证明材料（适用于中小企业，其中监狱企业和残疾人福利性单位、符合中小企业划分标准的个体工商户视同小型、微型企业）。2、采购进口产品：同意购买进口产品的，不限制满足采购需求的国内产品参与投标。三、投标人的资格要求：1、投标人的基本资格条件：投标人必须是在中华人民共和国境内注册登记的法人（或授权的分公司）、其他组织或者自然人，且应当符合《政府采购法》第二十二条第一款的规定，即： （1）具有独立承担民事责任的能力；（2）具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度；（3）具有履行合同所必需的设备和专业技术能力；（4）有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录；（5）参加政府采购活动前三年内，在经营活动中没有重大违法记录；（6）法律、行政法规规定的其他条件。2、采购项目的特定资格条件：供应商须有医疗器械生产许可证或医疗器械经营许可证，且处于有效期；3、单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人，不得参加同一合同项下的政府采购活动。4、为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的，不得再参加此项目的其他招标采购活动。5、列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单，列入政府采购严重违法失信行为记录名单的，拒绝其县中医医院 地 址：双峰县永丰镇复兴路24号联系人：贺先生 电话：13973836293采购代理机构名称：湖南明诚项目管理有限公司 联系地址：双峰县永丰街道井湾安置区27栋联系人：彭女士 电 话：13907387131 监督部门：双峰县政府采购管理办公室联 系 人：彭主任电 话：0738-6827388 发表日期： 2023-05-25 附件： 招标文件-双峰县中医医院搬迁设备采购项目.docx[已固化]-双峰县中医医院搬迁设备采购项目.gef

高效色谱柱筛选尿嘧啶和黄嘌呤，即咖啡因、可可碱和茶碱，是一组在各种生物过程和人类消费中起重要作用的有机化合物[1-3]。这些分子属于杂环化合物，其特点是含有碳原子和氮原子的环状结构。尿嘧啶是 RNA(核糖核酸)的基本组成部分，RNA 是形成遗传密码并参与蛋白质合成的基本核碱基之一。另一方面，黄嘌呤、咖啡因、可可碱和茶碱是一类结构相似但生物效应不同的生物碱[1-3]。这些黄嘌呤存在于各种植物中，是一种众所周知的兴奋剂，可以穿过血脑屏障，影响中枢神经系统。在 RP(反相色谱)[1-3]条件下(SN_802_2023)， LC(液相色谱)可分离生物碱。超临界流体色谱(SFC)是一种使用超临界二氧化碳(CO2)作为流动相的基本成分的色谱技术。这种状态的二氧化碳被称为超临界，它具有独特的特性，如高扩散系数和低粘度，使其成为分离和分析化合物的绝佳溶剂。与传统色谱方法相比，SFC 提供了许多优势，包括更快的分析时间，更低的溶剂消耗和分离的差异选择性。此外，与 RP-LC 相比，SFC 代表了一种正交技术，为各种分析挑战提供了互补的分离能力。在 SFC 中，色谱柱筛选包括测试不同的固定相，以找到最适合特定分离任务的固定相。固定相是色谱系统的重要组成部分，因为它直接影响色谱的选择性。不同的固定相具有不同的化学功能和与分析物的相互作用，使它们或多或少地选择特定的化合物。通过筛选和选择合适的色谱柱，可以优化分离条件，以获得更好的目标分析物的分辨率和灵敏度。本文描述了使用 Sepmatix 8x SFC 仪器对尿嘧啶、咖啡因、可可碱和茶碱混合物进行平行柱筛选，随后转移到制备的 Sepiatec SFC-50。1设备Sepiatec SFC-50 instrumentSepmatix 8x SFC instrumentPrepPure Silica, 5μm, 250 x 10mmPrepPure Diol, 5μm, 250 x 10mmPrepPure Silica, 5μm, 250 x 4.6mmPrepPure Diol, 5μm, 250 x 4.6mmPrepPure Amino, 5μm, 250 x 4.6mmPrepPure 2-EP, 5μm, 250 x 4.6mmReprosil 4-EP, 5μm, 250 x 4.6mm (Dr. Maisch GmbH)PrepPure PEI, 5μm, 250 x 4.6mmPrepPure CBD, 5μm, 250 x 4.6mmCyano, 5μm, 250 x 4.6mm, (Dr. Maisch GmbH)2试剂和材料二氧化碳(99.9%)甲醇(≥99%)尿嘧啶(99% + %)可可素(99%)咖啡(99%以上)茶碱(99%)3实验样品制备：在 50/2.5mL 甲醇/水混合液中，40℃ 下用超声水浴溶解 0.05g 尿嘧啶，0.07g 咖啡因，0.055g 可可碱，0.085g 茶碱。Sepmatix 8x SFC 筛选运行条件：流动相：A =二氧化碳：甲醇流速：3ml /min(每柱)流动相条件：0-0.5min：5% B0.5-8.0min：5 - 50%8.0-9.4min：50%9.4-9.5min：50 - 5%9.5-10min：5% B检测：紫外扫描波段：200nm - 600nm筛选运行是自动开始的。使用流量控制单元将流量设置为每通道 3mL/min，并平衡色谱柱。自动进样(V=5 μL)，开始平行筛选(运行时间=10min)。背压调节器设置为 150bar，柱箱加热至 32°C。SFC-50 运行条件：流动相：A =二氧化碳；B=甲醇流动相条件：等度运行条件检测：紫外波长 270nmSFC 柱在规定的流速下条件预热 3 分钟，使用定量环自动注入样品并开始运行。背压调节器设置为 150bar，柱箱加热至 40°C。3结果与讨论用 Sepmatix 8x SFC 筛选色谱柱：为了确定样品的最佳分离选择性，进行了不同色谱柱的筛选。使用 Sepmatix 8x SFC 仪器可以高效地同时筛选8个色谱柱。因此，最佳选择性可以在很短的时间内确定。为此，使用了 8 种不同的固定相:硅胶、二醇基、氨基、氰基、2-EP、4-EP、PEI 和 CBD，图1显示了筛选的结果。▲图1：Sepmatix 8x SFC 仪器筛选结果。从左到右依次为:硅胶、氨基、氰基、二醇基；下从左至右依次为：2-EP、4-EP、PEI、CBD 柱；运行时间=10分钟用分辨率(R)来衡量色谱方法在色谱图中分离和区分两个相邻峰的能力，它量化了分析物相互分离的程度。表 1 显示了 4 组分分离的分辨率值。使用 Sepmatix 软件和以下公式自动确定：其中tR1 和 tR2 代表 组分 1 或组分 2的保留时间W1 和W2 代表分量1或分量 2 峰高一半处的宽度在处理复杂的混合物时，分辨率尤其重要，因为它确保每个分析物都被很好地分离，并且可以准确地识别和定量。分辨率为 1 表示峰值根本没有被分解，基本上是合并的，而更高的分辨率值表示峰值之间的分离更好。在使用过程中，分辨率至少应达到 1.5，才能以适当的定量和鉴定分析物。色谱柱R1R2R3硅胶1.574.183.79氨基5.421.264.44氰基未分离3.351.69二醇3.925.12.292-EP3.622.72未分离4-EP9.462.87未分离PEI9.931.8610.8CBD5.011.274.51表1：SFC 不同筛选条件下的分辨率值R 值的筛选和评价表明，硅胶、二醇基和 PEI 相对样品的分离选择性最好。二醇基在运行时间和分辨率方面表现出最佳性能。硅胶柱上的分离并不完全是茶碱和咖啡因的基线分离。PEI 相的运行时间相对较长，因为样品分子的位阻较大。表 2 为洗脱顺序，这是通过测定的光谱和组分的单独进样来确定的。与其他相相比，硅胶显示出不同的洗脱顺序。对于氰基、2-EP 和 4-EP，不能完全确定洗脱顺序。色谱柱洗脱顺序硅胶茶碱，咖啡因，尿嘧啶，可可碱氨基咖啡因，茶碱，可可碱，尿嘧啶氰基咖啡因和茶碱的双峰，可可碱，尿嘧啶二醇咖啡因，茶碱，可可碱，尿嘧啶2-EP咖啡因，茶碱，可可碱和尿嘧啶的双峰4-EP咖啡因，茶碱，可可碱和尿嘧啶的双峰PEI咖啡因，茶碱，可可碱，尿嘧啶CBD咖啡因，茶碱，可可碱，尿嘧啶表2：SFC 不同色谱柱筛选条件下的洗脱顺序将开发方法通过 SFC-50 放大：由于二醇基取得了最好的结果，因此选择了 5μm, 250 x 10mm 的 PrepPure 二醇基进行 Sepiatec SFC-50 方法放大制备。由于通过堆叠注射法纯化混合物的效率明显高于多次梯度注射法，该方法是在等度运行条件下实施的，这是使用堆叠进样的要求。在等度条件下，样品只能在低甲醇含量下分离(见图2，下)。在高甲醇浓度下，由于流动相的高洗脱强度，尿嘧啶、咖啡因、茶碱和茶碱是不可分离的(见图2，上)。▲图2：使用 PrepPure Diol 5 μm, 250 x 10mm 色谱柱分离样品。上:流速= 20 mL/min, 150 bar, 40℃，270nm, 33% B，进样量= 0.09 mL，运行时间= 4 min；下:流量= 20 mL/min 150 bar 40°C, 270 nm, 12%甲醇，0.09 mL，运行时间= 5 min改变压力和温度可以优化分辨率。最佳分离条件为 40℃ 和 150bar。图 3 为图 2(下)实验条件下的堆叠进样情况，堆叠时间为 2.42min，因此每 2.42min 进样一次。在这种情况下，由于每次额外注入节省了平衡时间，因此提高了产能。为了更有效的多次分离，可以使用硅胶填料。使用 34% 的甲醇作为改性剂，将堆叠时间缩短至 2.15min。与二醇基相比，硅胶填料在 100bar 下表现出更好的性能。然而，在 1.5 的分辨率下，咖啡因和茶碱并不能获得理想的基线分离。由于硅胶的极性比二元醇高，为了快速洗脱，必须增加改性剂的含量，但这也导致溶剂消耗增加。4结论在本文中，使用 Sepmatix 8x SFC 进行柱筛选，并将开发结果转移到 Sepiatec SFC-50 进行放大。在色谱参数分辨率和运行时间方面，二醇基表现出最好的效果。对于二醇基，根据筛选结果，在 Sepiatec SFC-50 仪器上采用 250 × 10 mm 柱进行等度堆叠进样。作为比较，开发了另一种用于硅胶填料的方法，但分辨率值略差。这种分离表明，要想在 prep-SFC 中获得一个好的分离方法，事先通过柱筛选确定最佳选择性是很重要的。然后，该方法可以在 prep-SFC 上简单实现，并进行了优化。最理想的是，该方法在等度条件下应用，以最大限度地提高产量。每次注射后的叠加紫外信号表明该方法具有良好的再现性(图3和4，下面)。垂直线描述了收集相应分数的时间窗口。▲图3：堆叠进样与二醇柱分离。流速= 20 mL/min, 150 bar, 40℃，270 nm, 12% B，进样量= 0.12 mL；堆叠时间:2.42 min，注射次数：8次；上图：最终色谱图；下图为各注射剂的紫外信号叠加图▲图4：堆叠进样与硅胶柱分离。流速= 16 mL/min, 100 bar, 40℃，270 nm, 34% B，进样量= 0.09 mL；堆叠时间:2.15 min，注射次数：7次；上图：最终色谱图；下图：分别在254 nm和270 nm处注射的叠加紫外信号5参考文献https://doi.org/10.1093/chromsci/46.2.144DOI: 10.1021/jf030817mDOI: 10.1016/j.foodchem.2004.11.013DOI: 10.1016/j.saa.2004.03.030Laboratory Chromatography Gμide, ISBN 3-033-00339-7, by Büchi Labortechnik AG (Switzerland)