重组蛋白

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重组蛋白相关的耗材

  • 亲和色谱柱填料, 颗粒大小90 μm,适用于重组蛋白质,单克隆抗体
    亲和色谱柱填料, 颗粒大小90 μm,适用于重组蛋白质,单克隆抗体
  • His标签蛋白亲和层析介质
    重组蛋白的富集纯化一般用已知大小的标签与固定金属离子或金属螯合亲和层析(MAC)特异性作用,如蛋白表面氨基 酸(如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等)和层析介质上的过渡金属离子(Ni2+,Co2+等)以配位键结合,通过不同的氨基种类、 数量、位置和空间构象来实现分离纯化。 纳微科技固定金属离子亲和层析介质是以单分散均一粒径的多孔聚丙烯酸酯(PMMA)微球为基质,通过亲水化固定或螯 合金属离子,其吸附容量大并耐受各类还原剂,基质的化学稳定性、生物相容性和溶剂兼容性更佳,提供已固定金属Ni2+离子 的填料和需金属离子螯合的填料,是标签蛋白亲和层析的理想选择。标签蛋白亲和层析介质的优势单分散均一粒径的微球填料基质,更低反压,更高线性流速耐受NaOH和高浓度的还原剂,简化样品前处理,更大限度保护蛋白活性 提供高结合载量型,确保较高的产物纯度 提供低配基脱落型,耐受清洗,使用寿命更长 提供可螯合金属离子型,金属离子固定载量显著更高标签蛋白纯化亲和介质一览表产品名称官能基团粒径μm孔径?最大耐压MPa推荐线性流速cm/hpH稳定范围1每毫升介质结合量His标签蛋白的纯化,高纯度,高载量UniIDA-80NiNi2+8010000.5150-7502-12 20 mg His蛋白His标签蛋白的纯化,低配基脱落UniNTA-80NiNi2+8010000.5150-7502-12 10 mg His蛋白用于螯合或固定金属离子,高载量,可与金属作用的蛋白、肽类、核苷酸等UniIDA-80L-N(CH2COOH)28010000.5150-7502-1230 μmol Ni2+/ml gel用于螯合或固定金属离子,低配基脱落,可与金属作用的蛋白、肽类、核苷酸等UniNTA-80L-N(CH2COOH)38010000.5150-7502-1225 μmol Ni2+/ml gel 1. pH稳定范围指使用、再生、在位清洗的pH区间订货信息货号产品描述包装规格IDA80NUniIDA-80NiLNTA80NUniNTA-80NiLIDA80LUniIDA-80LLNTA80LUniNTA-80LL*提供10ml,30ml,100ml,1L包装规格*特殊规格,提供定制服务
  • 分子排阻检测重组人胰岛素中的高分子蛋白 推荐色谱柱 TSKgel SWxl
    分子排阻检测重组人胰岛素中的高分子蛋白 推荐色谱柱 TSKgel SWxl 关键词:重组人胰岛素,高分子蛋白,分子排阻,含量测定,中国药典, 2010年药典:测定高分子蛋白质,照分子排阻色谱法,以亲水改性硅胶为填充剂(5-10um),冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液为流动相,流速为每分钟0.5ml,检测波长为276nm。 含量测定:用十八烷基键合硅胶为填充剂,0.2mol/L硫酸缓冲液-乙腈为流动相。人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰的分离度不小于1.8。(中国药典二部P568) 需要详细的药典标准请联系北京绿百草:010-51659766. 登录网站获得更多产品信息: www.greenherbs.com.cn

重组蛋白相关的仪器

  • 岛津集团发布新型PPSQ-51A单反应器蛋白测序仪和PPSQ-53A三重反应蛋白测序仪。 新PPSQ-51A / 53A蛋白质测序仪采用岛津SPD-M30A光电二极管阵列检测器,配有新型毛细管流通池,灵敏度是原型号标准检测池的10倍,能进行较长序列的蛋白质研究。 主要特点:1、在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸的分析,等度序列分析提供更稳定的保留时间。这意味着可以使用色谱减法取消在以前的周期中检测到的峰,方便用户识别正确的氨基酸。在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸分析也使实验室通过流动相回收减少废液的浪费,降低运行成本。2、操作简单,专业的蛋白质测序仪将对反应单元和高效液相色谱分析单元提供控制功能,便于进行序列分析。3、新PPSQ软件可配置为满足实验室的各种需要,无论是监管、研究和开发,还是学术。该软件符合FDA 21 CFR Part 11指南对安全、用户管理和审计跟踪的要求。易于使用的数据分析功能,简化操作,数据处理和报告。这些功能允许色谱的后处理、多重色谱的叠加、色谱减法、和氨基酸序列的自动估计。此外,PPSQ-51A / 53A音序器提供定制的报告,并对数据进行快速、全面的的图形显示。拥有以前机型的客户(31A/33A/51B/53B)可以升级现有系统为相同灵敏度,并能拥有和PPSQ-51A / 53A一样的软件。升级包在有高层次的灵活性以及数据库的标准版和客户端服务器版本中都可以使FDA 21 CFR Part 11合规。
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  • Biolot蛋白纯化系统是为蛋白等生物样品的纯化制备而专门设计的全自动蛋白纯化系统,其系统稳定性能高而且软件易用,配备酸度/电导检测器可即时监测分离时的梯度环境,专为进行准确的单次和多次纯化的科学家设计。Biolot蛋白纯化系统旨在满足您的不同应用需求:不论您是每天只需处理少量样品,还是您的工作量要求仪器能实现更大通量,我们的蛋白纯化系统统使您可快速制备宝贵且复杂的混合物并获得高纯度、高回收率的完全可信结果。高效的模块化制备色谱系统,广泛应用于天然产物、和蛋白质生物高分子的分离纯化,系统软件符合FDA 21CFR Part 11要求,具有审计追踪功能。Biolot蛋白纯化系统可用于: ● 多肽纯化 ● 单抗纯化 ● 重组蛋白纯化 ● 天然药物和多糖的纯化 ● 疫苗纯化 ● 血液制品分离纯化 ● 基因治疗药物纯化 本系列蛋白纯化系统包含高精度泵、全波长紫外检测器、馏分收集器、PH和电导检测器,是专为蛋白纯化而开发出的一款仪器,具有分离效果好、效率高,操作界面简洁、实用性高等特点。蛋白纯化层析系统 技术参数 型号BQ0510BQ0520BQ1020BQ2010泵头PEEK材料,高精度、低脉冲、耐腐蚀流速范围0.1-50.0ml/min1-100ml/min0.01-200.00ml/min流速精度≤±1%≤±1%压力范围0-10MPa0-20MPa0-20MPa0-10MPa压力脉动≤0.1MPa≤0.1MPa≤0.1MPa梯度类型线性、等度,可在线修改梯度最小梯度调节1%检测器全波长紫外检测器光源氘灯+钨灯(进口)多波长在线扫描190-800nm波长精度±1nm吸光度范围0-2AU 电导范围 0—999.9ms/cm PH范围 0-14收集全自动收集器收集管架2*60支试管(高度150mm,直径15mm)收集模式普通模式、顺序收集、循环收集手动上样阀标配10ml定量环(可选配20ml定量环)上样方式固体上样或液体上样 定量环电源220V±10% 50Hz控制界面通过RS-232(USB),采用基于Windows10/Windows8/Windows 7的PC软件工作站,系统软件符合FDA 21CFR Part 11要求,具有审计追踪功能
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  • Biolot系列蛋白纯化系统, 智能蛋白纯化系统,实验室蛋白纯化系统, 快速蛋白纯化系统是为蛋白等生物样品的纯化制备而专门设计的全自动蛋白纯化系统,其系统稳定性能高而且软件易用,配备酸度/电导检测器可准确即时监测分离时的梯度环境,专为进行单次和多次纯化的科学家设计,广泛应用于蛋白质等生物大分子化合物的分离纯化。 Biolot蛋白纯化系统可用于: ● 多肽纯化 ● 单抗纯化 ● 重组蛋白纯化 ● 天然药物和多糖的纯化 ● 疫苗纯化 ● 血液制品分离纯化 ● 基因治疗药物纯化Biolot蛋白纯化系统产品性能: 可快速分离蛋白质、多肽等生物大分子化合物 高度灵活的模块化配置,让科研过程更直观 采用高精度柱塞泵、高稳定性、低脉冲 高灵敏度在线检测,可选配UV、PH、电导、示差折光等多种检测器 流路为PEEK材料,生物兼容性好 泵头具有自动清洗功能,避免缓冲液残留、结晶析出 全自动馏分收集器,具有多种收集模式,可配置多种规格收集管 标配梯度程序、客户可根据实验需要进行重新设置 存储和执行色谱分离方法 高度智能化操作系统,使用简单方便 控制软件符合“FDA 21 CFR Part 11 认证”认证要求Biolot200蛋白纯化系统技术参数: 型号Biolot 200系统泵PEEK柱塞泵(高精度、低脉冲)流速范围0.01-200ml/min流速精度± 0.5% 压力范围0—5Mpa压力脉动≤0.2MPa梯度类型台阶、线性变化梯度、可在线修改梯度最小梯度调节±0.5%ABS(双泵)检测器光源进口氘灯+钨灯(系统自动切换灯源)检测波长190~800nm(两波长同时检测)波长精度±1nm吸光度范围-3--3AU (线性 0--2 AU)电导范围0—999.9ms/cmPH范围0—14收集器全自动馏分收集器收集管架2×60支试管(高度150mm,直径15mm)收集模式普通模式、顺序收集、循环收集手动上样阀标配1ml定量环(可选配各种规格定量环)电源85 ~ 264VAC,50Hz控制软件通过RS-232(USB),采用基于Windows XP/Windows7/ Windows8/ Windows10/的PC软件工作站,多模块系统控制、设计符合“FDA 21 CFR Part 11 认证”参考尺寸输液泵:370×240×152mm3 紫外检测器:370×240×152mm3 电导/PH:370×240×100mm3 自动馏分收集器:355×241×320mm3
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重组蛋白相关的方案

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  • 重组蛋白是什么?重组蛋白的生产、应用及选择

    [font=宋体][font=宋体]重组蛋白([/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体])是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因([/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]),连接到适合的表达载体,导入到特定的宿主细胞,利用宿主细胞的遗传系统,表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]:原核表达系统:最常用的大肠杆菌蛋白表达,真核表达系统如酵母,哺乳动物细胞蛋白表达(常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前,重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分,常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时,蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外,每个表达系统都有其独特的优势和挑战,这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议,以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 重组蛋白是什么?融合蛋白和重组蛋白的区别

    [font=宋体][b]什么是重组蛋白?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连,这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念,融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。融合蛋白又称标签([/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]),常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结:在生物制药领域,重组蛋白具有较高的活性和纯度,更易吸收,安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素:[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统?[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易,应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说,重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务,例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单)[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息,详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

  • 一种新型的重组蛋白A柱

    一种新型的重组蛋白A柱

    http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif一种新型的重组蛋白A柱 洗脱条件温和,充分防止蛋白变性蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质,能特异性地与人和哺乳动物抗体(主要是IgG)的Fc区结合。因而,将蛋白A与琼脂糖凝胶以一定的方式结合,可制备用于抗体纯化的亲和填料。早期的蛋白A柱结合的都是天然蛋白A。天然蛋白A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成,分子量约42KD,结构如图一所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强,可以吸附大量的lgG。但同时,天然蛋白A的其他非结合域会和非目标蛋白结合,这样被洗脱下来的蛋白质纯度不够,会影响到后续的试验。为了解决这些问题,科学家们运用基因工程技术,克隆出蛋白A的基因,并对其进行改造,除去了一些不重要的非结合域。偶联这种重组蛋白A的琼脂糖凝胶柱在蛋白质纯化中,的确是提高了产物的纯度。目前,市场上绝大部分重组蛋白A柱都是这种产品。但是,纯化时所用的洗脱液一般为pH=2.7的甘氨酸溶液,如果洗脱效果不是很理想,还要降低pH,采用pH=1.9的甘氨酸溶液。由此可见,此法洗脱条件比较剧烈,最后收集的蛋白质很有可能变性,或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的柱子结合的重组蛋白A一般具有5个串联结构域:E、D、A、B、C。虽然每个域均可以和IgG的Fc段结合,但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一,而且经常需要较低的pH值。GE的重组蛋白A柱即为这种类型,如图二所示。考虑到减少串联结构域的个数,并且采取同型结构域串联,就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异从而使洗脱条件温和而均一,Putus研制出了含有三个串联B结合域的重组蛋白A,如图二所示。同时,我们用Putus重组蛋白A柱和GE重组蛋白A柱纯化人血浆,纯化的结果用于比较两种纯化柱的纯化效果,结果如图三所示。GE Putus 图二、重组蛋白A结构示意图待纯化样品:人血浆实验材料:GE公司的重组蛋白A柱(E、D、A、B、C结构域串联,见图二)Putus公司的重组蛋白A柱(3个B结构域串联,见图二)实验方法:分别按照每个公司的说明书来操作,洗脱条件分别为pH值3.0和4.5, SDS-PAGE检测结果如下: 上图从左边起,泳道1为标准蛋白Marker,泳道2为经过GE填料洗脱后抗体,泳道3为经过Putus填料洗脱抗体,泳道4为人血浆。从图中,我们可以看出,与GE 重组蛋白A填料从人血浆纯化抗体纯度比较,拥有3个同型结构域的Putus填料可以获得同样纯度的抗体。但是,后者的洗脱条件仅为4.5,高于前者的洗脱条件3.0。由此可见,使用具备较少B结构域的重组蛋白A柱也能获得高纯度的IgG,并且洗脱条件温和,能防止蛋白质聚集,保护蛋白质活性。http://cp00a3cee71b5f96adf6e669b5d7f56a9f11.jpg/http://C:\Documents and Settings\adim\桌面\001.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191653_632703_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187444_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187445_1672347_3.jpg

重组蛋白相关的资料

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  • 《Nature》在线发表重组蛋白新冠疫苗研究
    2020年7月29日,四川大学生物治疗国家重点实验室作为第一作者单位和通讯作者单位,在Nature 在线发表题为“A vaccine targeting the RBD of the S protein of SARS-CoV-2 induces protective immunity”的研究论文,这也是Nature杂志发表的首篇新冠疫苗研究论文。研发团队的研究目标是开发出一款通过重组蛋白候选新冠疫苗。在该研究中通过非人灵长类等动物模型的实验表明,这款疫苗能诱发强烈的针对新冠病毒SARS-CoV-2所产生的保护性免疫应答以及产生能够病毒中和抗体。S蛋白是存在于冠状病毒的一类很大的突刺糖蛋白,本研究中,科学家们使用S蛋白的多个不同部分制作了多款候选疫苗,经过测试和比较,他们最终确认,相比S蛋白的细胞外结构域蛋白(ECD)、S1亚基和S2亚基,RBD作为免疫原有最大的病毒中和活性。研究小组最终使用了RBD中编号为319-545的一段氨基酸序列,通过重组蛋白的方式制备新冠疫苗的抗原。研究人员利用了昆虫细胞和杆状病毒表达系统,从细胞培养液中分离提纯了该蛋白,并利用上海勤翔Clinx ChemiScope化学发光成像系统进行了鉴定。(通过Superdex 200凝胶分离柱上重组RBD蛋白的代表性洗脱色谱图。 插图显示洗脱的RBD样品的SDS-PAGE和蛋白质印迹分析)(小鼠或兔子血清对SARS-CoV-2假病毒感染的中和作用) A图: 将含有SARS-CoV-2假病毒的上清液与来自小鼠的血清预热,将其血清稀释2倍。 在37°C下温育1小时后,将混合物添加到ACE2转染的293T(293T / ACE2)细胞中以检测病毒的感染性。通过荧光显微镜和流式细胞仪确定感染细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达的数量。 三组图片分别是Sera/ RBD组(首次疫苗接种后第14天,用RBD疫苗免疫的5只小鼠的血清)和Sera / PBS组(用PBS作为对照的小鼠的血清),未治疗(感染SARS-CoV-2伪病毒而没有血清)。 B图:在首次免疫后14天,使用与A相同的方法,从兔子的血清中和SARS-CoV-2假病毒的感染。(诱导抗SARS-COV-2中和抗体在转基因hACE2小鼠和野生型小鼠中的活性)与单独用PBS组处理相比,在存在氢氧化铝的情况下,每只小鼠在50μl中用10μg重组RBD蛋白接种免疫转基因hACE2小鼠和野生型小鼠。第二次接种为14天后,从小鼠收集血清。为了评估SARS-COV-2感染的中和作用,将Vero E6细胞(5×10 4)预加载至96孔板中并生长过夜。将100 TCID50(50%组织培养感染剂量)的SARS-CoV-2与等体积的稀释血清预孵育,然后添加到细胞中。在37°C下温育1小时后,将混合物添加到Vero E6细胞中。在显微镜下记录细胞病变效应(CPE),并计算导致完全抑制的血清稀释液的中和滴度。该研究发现由S-RBD结构域319-545氨基酸残基构成的重组疫苗,可在接受单剂接种7或14天之后的小鼠、兔和非人灵长类动物(猕猴)中诱导有效的功能抗体应答。免疫动物的血清在体外阻断了RBD结合域与细胞表面ACE2受体的结合,并中和了SARS-CoV-2假病毒和SARS-CoV-2活病毒的感染。重要的是该疫苗还为受SARS-CoV-2病毒感染的非人类灵长类动物提供了保护,在受到SARS-CoV-2病毒感染的病人体内检测到特异性结合RBD的抗体含量的升高。 几种免疫途径和CD4tT淋巴细胞参与了疫苗抗体反应的诱导。在接种了疫苗的小鼠和猴子没有观察到抗体依赖性肺炎增强或加速出现肺炎的不良反应,因此重组RBD蛋白疫苗是重要的新冠疫苗选择之一。 参考资料:[1] Jingyun Yang et al., (2020) A vaccine targeting the RBD of the S protein of SARS-CoV-2 induces protective immunity. Nature. 背景:新冠肺炎疫情全球蔓延,对人类健康和社会秩序带来巨大挑战。截至目前(8月4日),据约翰霍普金斯大学发布的实时统计数据,全球累计新冠肺炎确诊病例超过1800万例,死亡人数达69万。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法,迫切需要有效的预防这种病毒的疫苗,通过对人群预防接种获得对新冠病毒的免疫力。虽然目前尚未有新冠疫苗正式上市,但在全球抗疫的大背景下,各国都在努力让疫情能够尽快过去。据世界卫生组织7月20日更新的数据显示,目前全球至少有24种新冠病毒疫苗已进入临床研究阶段,另有142种候选疫苗处于临床前研究阶段,为对抗新冠肺炎所作出积极贡献。
  • 首个获批使用重组蛋白亚单位疫苗临床结果正式发布
    3月24日,世界著名医学期刊《柳叶刀-传染病》报道了中国科学院微生物研究所高福院士团队联合安徽智飞龙科马生物制药有限公司研发的重组蛋白亚单位疫苗(ZF2001)1 期和2期临床试验结果(Yang et al, 2021, Lancet Infectious diseases)。  试验结果表明,该疫苗安全性良好,没有与疫苗相关的严重不良事件,接种3剂次25μg疫苗的97% 入组者产生了可以阻断活病毒的中和抗体,中和抗体水平超过康复患者血清。  目前,全球已经有多种针对COVID-19的疫苗,但它们仍不能满足人们接种的需求(Dai and Gao, 2021, Nature Reviews Immunology)。因此,大范围、多元化地广泛开发疫苗才可能有效控制COVID-19在全球的传播。重组蛋白亚单位疫苗具有产量高、安全性高、易于存储和运输等优势,是预防和阻断COVID-19传播的重要选择之一。    ZF2001 疫苗基于以往MERS冠状病毒刺突蛋白(S)受体结合区(RBD)的二聚体理念(Dai et al, 2020, Cell),将新冠病毒RBD进行串联重复设计成二聚体(RBD-dimer)抗原,成功保留了疫苗的效力,且小鼠免疫后的中和抗体滴度高于单体免疫效果。  ZF2001 疫苗在国内的两期临床实验共招募950名、18至59岁的健康成年人,采用了随机、双盲和安慰剂对照的试验方案,试验在重庆医科大学第二附属医院、首都医科大学北京朝阳医院和湖南省湘潭疾控中心完成。试验对疫苗的安全性和免疫原性进行评估,包括不良事件和严重不良事件、抗体滴度、中和抗体滴度以及血清阳转率。  结果表明:该疫苗具有良好的耐受性和免疫原性。大多数入组者没有观察到不良反应或者为轻度或中度的不良反应,主要是红肿、注射部位疼痛、骚痒等,为重组蛋白疫苗接种后常见反应。没有疫苗相关的严重不良事件发生。接种2剂次疫苗后,76%的人可以产生中和抗体。接种3剂次疫苗后97% 的人可以产生中和抗体。抗体的几何平均滴度(GMT)达到102.5,超过89份新冠康复病人血清中和抗体水平(GMT, 51)(图1)。此外,疫苗能产生适度和平衡的Th1/Th2细胞免疫应答。  图1:新冠重组蛋白亚单位疫苗ZF2001在受试者身上产生超康复病人水平的中和抗体1期临床(A)结合抗体阳转率(B)结合抗体滴度(C)中和抗体阳转率(D)中和抗体滴度 2期临床(E)结合抗体阳转率(F)结合抗体滴度(G)中和抗体阳转率(H)中和抗体滴度。  此外,今年2月,中国疾病预防控制中心高福团队在bioRxiv发布正在国际开展3期临床试验的部分结果,显示国产重组蛋白亚单位新冠疫苗ZF2001对南非新变种(501Y.V2)的中和效果。  结果显示,虽然该疫苗接种者血清对南非新变种的中和效果稍有下降,但是依然保留大部分中和活性,提示该疫苗对南非新变种依然有保护效果(Huang et al, 2021, BioRxiv)。但是,由于动物源性冠状病毒的长期流行及相互重组 (Su et al, 2016, Trends in Microbiology),未来仍需要研制通用的冠状病毒疫苗。  目前,该疫苗正在乌兹别克斯坦、印尼、巴基斯坦和厄瓜多尔开展国际多中心3 期临床试验,且于2021年3月1日获得乌兹别克斯坦批准注册使用,是全球第一个获批使用的新冠重组蛋白疫苗。该疫苗亦于2021年3月10日获得中国紧急使用批准。  安徽智飞龙科马杨世龙,中国科学院微生物所李燕、戴连攀,中国食品药品检定研究院王剑峰、何鹏为论文共同第一作者。中国食品药品检定研究院孟淑芳,中国科学院微生物所严景华,中国食品药品检定研究院胡忠玉,湖南省疾病预防控制中心高立冬和中国科学院微生物研究所高福为论文共同通讯作者。此项目获得国家重点研发计划、国家科技部药物研发重点项目、中国科学院先导专项和安徽智飞龙科马生物制药公司的支持。
  • 重组蛋白和单克隆抗体药物研发及生产讲座
    重组蛋白和单克隆抗体药物研发讲座由利穗科技(苏州)有限公司于2015年4月24日在上海张江高科技园区主办。届时将邀请100余名国内外生物医药领域的著名专家学者前来参观交流。 本次讲座特邀主讲嘉宾,Joachim K.Walter 博士是著名的生物制品行业的科学家和顾问,有26年 哺乳动物细胞培养的蛋白生产和研发经验 ,拥有17年在德国的勃林格殷格制药企业的工作经验。演讲就蛋白药物市场及研发、单克隆抗体生产为主题,共同探讨蛋白分离纯化方法。 利穗科技一直专注于药物研发和生产领域内新型仪器/设备的研发与制造。产品的定位是基于色谱分离技术的全自动分离纯化系统,公司产品分离纯化设备用于生物医药研发和生产过程中的分离纯化,是分离工艺和分离介质的运行设备,广泛应用于中草药、天然产物、多肽、单克隆抗体、重组蛋白、疫苗和血液制品等生物制药医药领域的分离纯化过程,是生物医药领域的关键技术和设备。 在此,利穗科技诚挚邀请您参加重组蛋白和单克隆抗体药物研发及生产讲座,进行产品技术交流。 主题:重组蛋白和单克隆抗体药物研发及生产讲座主办单位:利穗科技(苏州)有限公司会议时间:2015年4月24日(9:00-17:00)地点:上海张江高科技园蔡伦路781号上海张江医药谷人数:100人 会议日程安排如下:上午 9.00 — — 12 :001.导言? 市场概述及行业趋势介绍 2. 生物技术及蛋白药物基础介绍? 蛋白质的化学特性简述? 药物蛋白介绍 3. 蛋白药物研发和生产策略介绍? 工艺开发的复杂特性? 工艺技术的概述-上游 & 下游生产? 工艺设计? 工艺开发与生产的策略? 蛋白质分离纯化方法 — — 过滤和色谱法? 工艺开发的管理 4. 生物制药工艺设备解决方案 午餐: 12.00-13:00 下午 13:00 — — 16:005.单克隆抗体生产? 亲和层析的不同操作模式? 蛋白质降解路线? 蛋白酶解? 蛋白质结构的稳定性? 缓冲液的选择? 稳定性添加剂? 制剂缓冲液 6.生物仿制药的监管? 风险管理? 质量源于设计? PAT过程分析技术? 产品生命周期验证 7.一次性技术 技术咨询:16.00 — — 17:00? 15 分钟每个人或公司 (限于 4 组)。请提前预约并提交讨论问题。 演讲人简介: Dr. Joachim K. Walter, PhD Walter Biotech Consultancy公司创始人兼首席执行官目前为利穗科技(苏州)有限公司咨询顾问 生物制药行业知名学者,咨询顾问。具有超过27年生物药研发及生产经验。曾担任勃林格.英格翰公司新药研发及生产总监,参与75个不同规模的抗体及重组蛋白药物的工艺开发和放大,最大放大规模达12500L。曾担任GE Healthcare 膜过滤事业部全球副总裁,指导多个膜过滤产品及应用的开发。曾经在超过30个国际主流期刊上发表文章,作为Speaker被邀参加国际会议超过40个。目前主要致力于为制药企业进行工艺开发、放大,工艺验证及生产管理的咨询。客户包括华兰生物,Affimed AG, Medac GmbH, Innobiologics Sdn Bhd, Graffinity GmbH,等。 报名方式:姓名: 单位: 职务:手机:请将个人单位、姓名、职务、手机信息发送到市场部邮箱:caixin@lisui.net ,或可以直接电话报名:0512-69369998备注:本讲座免费(含午餐),人数有限,会议室99个固定座位,先到先得,交通住宿自理 会议联系人:蔡新 0512-69561800-8066 /18914086625 caixin@lisui.net 吴婷婷 0512-69369998 /18362618085 wutingting@lisui.net
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