培养方法

TU212（人喉癌细胞）的培养步骤及方法！ 一、细胞简介平台编号：bio-106163a规格：1*10 6拉丁属名：TU212（人喉癌细胞）型号：HTX2130细胞名称：TU212人喉癌细胞生长特性：贴壁组织来源：人喉癌细胞培养基：89%1640+10%FBS+1%双抗物种：人规格：2X10^6 cells培养温度：37℃引种来源：BioSample传代：1：2~1：4传代，两天左右换液。冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）。包装：专业的无菌保温运输包装。细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。 二、细胞特性1）来源：头颈鳞癌2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备IMDM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 五、TU212（人喉癌细胞）的注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 六、TU212（人喉癌细胞）的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 中国微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

生化培养皿BLOCHEMISTRY PETRI CULTURE DISHES 定量培养皿QUANTITY PETRI CULTURE DISHES 别名:双重皿、二重皿、双蝶、培养蝶、平板皿、(阜氏皿、 皮氏皿、陪替氏皿.均为petri 外文译音) 一、概况及用途 培养皿 目前在国外已出现塑料代替，在出厂前已进行消毒，用过一次即丢掉。在我国目前有三种培养皿，它生产使用的玻璃料不同，普迪培养血是用硬料或中性料在大炉炉台上经桃料、吹泡、再入模具人工吹制成型，经联合烘爆口(或磨口)、退火、喷(印) 标即成产品。生化培养皿其生产工艺相同，但它是用“g5”料玻璃生产，在质量要求较普通培养皿为高。定量培养皿使用玻璃料为“95热料，生产工艺完全不同，它是先在大炉炉台上，吹制成5000ml烧杯,然后将口、底爆去成为玻璃筒，再将玻璃筒燥开，经加温到玻璃软化点压成平板玻璃，再用金钢刀划成园片，经加温熔融逐步成型。由于工艺复杂、成品率低、成本高。速度慢所以产量不高。 用途:适用于防疫特别是02病的带菌病人的菌种培养化验、医院临床诊断、食品、药品检验分析，这些单位用于细菌的分离培养。抗菌素效价检验(微生物测定法一一杯蝶法)以及在农业科学研究对种子发芽、植物、昆虫、鱼种的人工培养、孵化研究。近年来由于电子工业的发展，大规格的培养皿又用于“锗”片的保管及烘干做盛器。固此培养皿使用面广、用量大。一般讲防疫、医院单位多用90--- -100mm 规格:农科院、水产学院多用120m/m以上的大规格。 生化培养皿，适用于生物制品、制药工业作生物检验、或对抗菌素的药效测定。当然也可代替普通培养皿使用。 定量培养皿、适用于在显微镜下进行检查、观察细菌的形态、分类或对药物效价的检定、培养作定量分析操作使用，它不但要决定培养细菌的性质、而且还要决定培养的量。 二、造型: 它的造型是根据pet ri氏设计的,是口、底垂直、底平、壁钱的二个平底皿套合而成。皿四成烘光(或磨平)皿口烘光的优点是边沿光滑机械强度高，不易崩损和染色吸附于皿口。缺点是在爆口时留有玻滴，对底和盖之间的密合性有影响，新菌易侵入。口. 部磨平的优点是口部边沿平整，密合性好，新荡不易侵入，缺点是边沿易崩损，在染色操作时，染色易吸附于皿口，不易清除。 三、使用方法: 使用前经过清洁消毒，培养皿清洁与否对工作影响较大,可影响培养基的酸硷度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌的生长。新购的培养皿应先用热水冲洗，再置于1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离险性物质除去(或用砂皂洗刷)，再用蒸馏水冲洗二次，若要培养细蘭再用高压蒸气灭菌(一般在15磅高压蒸气) ,即l20C的温度下30分钟灭蘭，置室温中干燥，或用干热灭蘭，就是将培养皿置于烘箱内 温度控制在120C左右的情况下维持2小时，即可杀死细菌的胞芽。经过消毒的培养皿才能接种培养使用。“培养皿通常使用固体培养基制成平板培养(就是平板皿名称的由来)，平板培养基制作是将已装好的灭菌琼脂培养基，用温水(无菌)熔化，取下试管的棉花塞，管口于酒精灯火焰上通过，然后微启灭菌的培养皿盖，使试管口能深入为宜，倾入培养基后即可盖密，再轻轻的摇匀倾入的培养基，使之均匀的分布f皿底上疑结,即得平板培养基。由于细菌的繁殖、发育生长是与所供给的培养基(营养) 有直接关系，尤其是作定量检验分析，对提供营养物的多少，有决定意义，细菌培养时对营养物提供的多少，是否均匀，这对于培养皿、皿底是否平整极为重要。如培养皿皿底不平，琼脂的培养基分布的厚薄将随培乔m血底是否平整而有厚有薄，薄的部分营养供给就不足，这对定量分析有着密切关系，故对定量培养皿m底要求特别平整的原因所在。但作-般定性培养皿(检验细菌、菌落生长、繁殖等)，使用普通培养皿即可。 细菌的分离培养，一般标本中常同时混有数种细菌,如口腔咽喉菌及耳朵的分泌物、痰液、小便、大便等，凡需研究的细菌，须先用分离培养法，使其成为纯培养，通过对细菌作纯培养，用肉汁加2 %琼脂的固体培养基，经保温湖斗以脱脂棉花过滤，注入试管中，二天后检验无新菌，再投入培养皿内，先制成平板，在无菌的条件下进行接种, 接种后把培养I倒置移入25--30^C的恒温箱内(倒置是避免水蒸气凝成液滴滴入m底内，影响菌落的生长)，通过培养进一步观察细菌的形态和色泽，研究致病的病菌，以及对它防治的效果。 生化培养皿、定量培养皿的使用方法，基本与普通培养皿相同，但它的质量要求为高。定量培养皿培养后，还要放在显微镜下进行检验， 四、规格及质量要求: (一)规格及参考尺寸: 培养皿规格尺寸的计算，在国际上有两种不同的计算方法，-种方法是按皿盖计算，理由是在培养时使用恒温箱内进行培养，它可以计算恒温箱的体积可存放多少个培养皿。另一种计算方法是按照培养皿皿底计算，理由是在培养时可按照培养m的皿底体积计算使用多少培养基。目前在我国亦存在二种计算方法，但在轻工部QB520-- 66 规定标准中是按皿底计算。 (二)玻璃色泽，无色透明或微带青绿色或微黄色

生化培养皿BLOCHEMISTRY PETRI CULTURE DISHES 定量培养皿QUANTITY PETRI CULTURE DISHES 别名:双重皿、二重皿、双蝶、培养蝶、平板皿、(阜氏皿、 皮氏皿、陪替氏皿.均为petri 外文译音) 一、概况及用途 培养皿 目前在国外已出现塑料代替，在出厂前已进行消毒，用过一次即丢掉。在我国目前有三种培养皿，它生产使用的玻璃料不同，普迪培养血是用硬料或中性料在大炉炉台上经桃料、吹泡、再入模具人工吹制成型，经联合烘爆口(或磨口)、退火、喷(印) 标即成产品。生化培养皿其生产工艺相同，但它是用“g5”料玻璃生产，在质量要求较普通培养皿为高。定量培养皿使用玻璃料为“95热料，生产工艺完全不同，它是先在大炉炉台上，吹制成5000ml烧杯,然后将口、底爆去成为玻璃筒，再将玻璃筒燥开，经加温到玻璃软化点压成平板玻璃，再用金钢刀划成园片，经加温熔融逐步成型。由于工艺复杂、成品率低、成本高。速度慢所以产量不高。 用途:适用于防疫特别是02病的带菌病人的菌种培养化验、医院临床诊断、食品、药品检验分析，这些单位用于细菌的分离培养。抗菌素效价检验(微生物测定法一一杯蝶法)以及在农业科学研究对种子发芽、植物、昆虫、鱼种的人工培养、孵化研究。近年来由于电子工业的发展，大规格的培养皿又用于“锗”片的保管及烘干做盛器。固此培养皿使用面广、用量大。一般讲防疫、医院单位多用90--- -100mm 规格:农科院、水产学院多用120m/m以上的大规格。 生化培养皿，适用于生物制品、制药工业作生物检验、或对抗菌素的药效测定。当然也可代替普通培养皿使用。 定量培养皿、适用于在显微镜下进行检查、观察细菌的形态、分类或对药物效价的检定、培养作定量分析操作使用，它不但要决定培养细菌的性质、而且还要决定培养的量。 二、造型: 它的造型是根据pet ri氏设计的,是口、底垂直、底平、壁钱的二个平底皿套合而成。皿四成烘光(或磨平)皿口烘光的优点是边沿光滑机械强度高，不易崩损和染色吸附于皿口。缺点是在爆口时留有玻滴，对底和盖之间的密合性有影响，新菌易侵入。口. 部磨平的优点是口部边沿平整，密合性好，新荡不易侵入，缺点是边沿易崩损，在染色操作时，染色易吸附于皿口，不易清除。 三、使用方法: 使用前经过清洁消毒，培养皿清洁与否对工作影响较大,可影响培养基的酸硷度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌的生长。新购的培养皿应先用热水冲洗，再置于1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离险性物质除去(或用砂皂洗刷)，再用蒸馏水冲洗二次，若要培养细蘭再用高压蒸气灭菌(一般在15磅高压蒸气) ,即l20C的温度下30分钟灭蘭，置室温中干燥，或用干热灭蘭，就是将培养皿置于烘箱内 温度控制在120C左右的情况下维持2小时，即可杀死细菌的胞芽。经过消毒的培养皿才能接种培养使用。“培养皿通常使用固体培养基制成平板培养(就是平板皿名称的由来)，平板培养基制作是将已装好的灭菌琼脂培养基，用温水(无菌)熔化，取下试管的棉花塞，管口于酒精灯火焰上通过，然后微启灭菌的培养皿盖，使试管口能深入为宜，倾入培养基后即可盖密，再轻轻的摇匀倾入的培养基，使之均匀的分布f皿底上疑结,即得平板培养基。由于细菌的繁殖、发育生长是与所供给的培养基(营养) 有直接关系，尤其是作定量检验分析，对提供营养物的多少，有决定意义，细菌培养时对营养物提供的多少，是否均匀，这对于培养皿、皿底是否平整极为重要。如培养皿皿底不平，琼脂的培养基分布的厚薄将随培乔m血底是否平整而有厚有薄，薄的部分营养供给就不足，这对定量分析有着密切关系，故对定量培养皿m底要求特别平整的原因所在。但作-般定性培养皿(检验细菌、菌落生长、繁殖等)，使用普通培养皿即可。 细菌的分离培养，一般标本中常同时混有数种细菌,如口腔咽喉菌及耳朵的分泌物、痰液、小便、大便等，凡需研究的细菌，须先用分离培养法，使其成为纯培养，通过对细菌作纯培养，用肉汁加2 %琼脂的固体培养基，经保温湖斗以脱脂棉花过滤，注入试管中，二天后检验无新菌，再投入培养皿内，先制成平板，在无菌的条件下进行接种, 接种后把培养I倒置移入25--30^C的恒温箱内(倒置是避免水蒸气凝成液滴滴入m底内，影响菌落的生长)，通过培养进一步观察细菌的形态和色泽，研究致病的病菌，以及对它防治的效果。 生化培养皿、定量培养皿的使用方法，基本与普通培养皿相同，但它的质量要求为高。定量培养皿培养后，还要放在显微镜下进行检验， 四、规格及质量要求: (一)规格及参考尺寸: 培养皿规格尺寸的计算，在国际上有两种不同的计算方法，-种方法是按皿盖计算，理由是在培养时使用恒温箱内进行培养，它可以计算恒温箱的体积可存放多少个培养皿。另一种计算方法是按照培养皿皿底计算，理由是在培养时可按照培养m的皿底体积计算使用多少培养基。目前在我国亦存在二种计算方法，但在轻工部QB520-- 66 规定标准中是按皿底计算。 (二)玻璃色泽，无色透明或微带青绿色或微黄色