蛋白聚集体

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蛋白聚集体相关的耗材

  • 安捷伦 AdvanceBio 聚集体及片段分析
    Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱能够简单快速而准确地进行 mAb 聚集体定量和片段分析。AdvanceBio SEC 提供 2.7 和 1.9 µm 两种不同填料粒径。这些创新的体积排阻色谱柱由安捷伦设计和制造,可实现高分离度和高效分离,同时具有稳定可靠的性能。不同色谱柱、不同批次以及不同实验室均可获得一致结果,确保方法可以跨部门和地区转移,有助于消除不确定性。AdvanceBio SEC 1.9 µm 色谱柱经过特别设计,旨在改善使用 HPLC 和 UHPLC 分离 mAb 聚集体和片段的分离度,同时提高分离速度。经过优化的亚 2 微米填料为单分散状态,并通过独特的亲水键合化学改性,提供重现性和稳定性,防止次级相互作用和蛋白质吸附。 AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µm 色谱柱旨在满足各部门对定性和定量关键质量属性 (CQA) 分析和方法转移的需求。
  • 纳谱分析DNACore AAV-SEC色谱柱 AAV聚集体分析专用柱
    DNACore AAV-SEC色谱柱采用单分散、高孔容硅胶微球,孔径经过特殊优化,结合独特的表面亲水化学修饰而成,具备良好的分离选择性,适用于不同血清型AAV聚集体分析。特性:分离选择性佳,普适性强柱效高,非特异性吸附低微球机械强度高,柱寿命长良好柱间一致性参数:产品名称DNACore AAV-SEC色谱柱官能团二醇基基质单分散、高孔容、多孔硅胶微球 粒径3 µ m孔径保密常用规格 7.8×300 mm 7.8×150 mm4.6×300 mm4.6×150 mm耐压上限3000 psi耐温上限 40 °CpH范围 2 - 8应用领域不同血清型AAV聚集体分析DNACore AAV-SEC色谱柱技术:不同血清型聚集体分析:不同血清型聚集体分析-高通量:批次间一致性:DNACore AAV-SEC色谱柱可以为不同血清型AAV聚集体分析提供良好分离选择性,批次间一致性佳,普适性强,是AAV聚集体分析的强有力工具。产品货号信息:Product NameParticle Size(µ m)Length(mm)ID (mm)7.84.6DNACore AAV-SEC3300D203-030AAV-07830SD203-030AAV-04630S150D203-030AAV-07815SD203-030AAV-04615S
  • 安捷伦 ZORBAXGF-250/450 聚集体及片段分析
    Agilent ZORBAX GF-250 和 GF-450 体积排阻(凝胶过滤)色谱柱适用于蛋白质和其他生物分子的体积排阻分离。 将 GF-250 和 GF-450 色谱柱串联使用时,球状蛋白质的分离范围为 4000–900000。 GF-250/GF-450 体积排阻色谱柱具有亲水性二醇键合固定相,可实现蛋白质的高回收率(通常 90%),还具有独特的经过氧化锆改性的硅胶,从而可实现 3–8 的 pH 操作范围。 GF-250 和 GF-450 色谱柱填充有体积精确的多孔硅胶微球,孔径和粒径分布窄。 这使得该色谱柱可在流速高达 3 mL/min 的条件下用于实现蛋白质的分析性和制备性分离。 这些色谱柱与流动相中的有机改性剂 ( 25%) 和变性剂兼容,可减少蛋白质聚集。 常见的应用包括蛋白质单体、二聚体和聚集体的分离、脱盐、蛋白质分子量估算以及修饰蛋白质的分离等。 根据您感兴趣的领域,查看我们的全系列 BioHPLC 色谱柱,获取相关资源,享受特价优惠。 高柱效和高重现性,分析时间短 半制备和制备柱规格 与有机改性剂和变性剂兼容 pH 范围宽(3–8)

蛋白聚集体相关的仪器

  • 1260 Infinity II Bio-SEC 多检测器系统 1260 Infinity 多检测器 Bio-SEC 系统完全不含金属,具有光散射和动态光散射功能,无需经过 SEC 色谱柱校准即可测定蛋白质形状和大小。体积排阻色谱 (SEC) 是测定并定量分析单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的标准方法,是相关注册审批中的常见技术要求。该检测器具有一个简单的低死体积接口,可连接至 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统。仅限研究使用。不可用于诊断目的。特性光散射检测提供可重现的准确分子量信息,无需使用窄分布聚合物标准品进行色谱柱校准能够鉴定并表征低聚物,同时可获得有关聚集和折叠效应的信息市场领先的低死体积光散射检测技术可最大程度减小任何峰谱带展宽,确保获得准确的绝对分子量同一流通池还可用于执行动态光散射测量(例如,有关分子在溶液中的大小的详细信息,称为流体动力学半径(或 Rh))由于球蛋白是不对称的散射体,因此可提供精确的详细信息
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  • Eshmuno®采用聚乙烯醚基架,刚性强,‍亲水性好‍,平均粒径为85 µm或50 µm,高流速下背压更低。另,Eshmuno®在触手结构与配基密度上做了相应的优化,使得Eshmuno®系列填料在与目标蛋白的结合过程中,能够更好地克服空间位阻,达到更快速的传质,从而加速生物药剂的制备过程。优点:- 下游加工的生产能力优越- 更高的选择性和HCP去除- 活性触手吸附- 稳健、安全的装柱程序- 切实地节约成本和时间分类:- Eshmuno® A层析填料Eshmuno® A填料含有一种默克专有的配基,源自金黄色葡萄球菌蛋白A的C域,为五聚体形式。在大肠杆菌中,该配基被重组表达。生产过程中,未使用动物源性产品。将该配基固定在Eshmuno®介质(基于聚乙烯醚的硬质、亲水聚合物)上即合成Eshmuno® A蛋白A亲和层析填料。 Eshmuno® A为刚性、高载量、耐酸碱的层析填料,用于含Fc的蛋白质的纯化。与竞品相比,它的优势在于耐酸、耐碱和去除聚集体,有效地去除聚体可以减少含Fc蛋白质纯化工艺中层析之后步骤的负担。- Eshmuno® CMX层析填料Eshmuno® CMX是一种基于Eshmuno®树脂技术的混合模式层析填料,它创新地将弱阳离子交换性能与疏水相互作用结合在一起,为单克隆抗体,融合蛋白和ADC药物的纯化以及低分子量杂质和HCP的分离提供了高选择性。 Eshmuno® CMX填料的优势在于:工艺整合降低成本(通过减少层析步骤和降低缓冲液消耗);提升纯化性能(更高的回收率,高选择性和出色的载量);提升用户体验(更宽的操作空间,简化工艺开发过程,基于硬质基架更容易装柱)。- Eshmuno® P层析填料Eshmuno® P填料选用了高度稳定的Eshmuno®基质与特异性的配基相结合的可靠技术,将多糖抗原(A & B)固定到亲水性聚乙烯醚的Eshmuno®基质上。Eshmuno® P anti-A, Eshmuno® P anti-B是两种不同的亲和层析填料,分别用于有效去除anti-A和anti-B凝集素。 Eshmuno® P的优势在于:降低患者风险,提高经济效益,提高产品质量,操作灵活。- Eshmuno® CPX层析填料Eshmuno® CPX填料是强阳离子交换层析填料,采用了可靠的Eshmuno®填料技术。Eshmuno® CPX填料为50 µm粒径圆球基质,配套默克专有的触手技术,下游纯化工艺中在聚集体去除方面表现出色,同时动态载量依旧表现卓越。 Eshmuno® CPX填料的优势在于:优异的抗体单体/聚体分离效率;中间纯化工艺的高分辨率;优异的动态载量表现;满足高通量纯化需求;硬性基质,易于装填;卓越的低反压,高流速特性。- Eshmuno® CP-FT层析填料Eshmuno® CP-FT阳离子交换(CEX)填料是为在流穿前沿层析操作模式下有效去除mAb聚集体而特别设计的,与传统的结合/洗脱CEX层析相比,载量提高了10倍。Eshmuno® CP-FT填料有助于提高生产灵活性并简化工艺,从而降低了mAb下游纯化的总成本。 Eshmuno® CP-FT的优势在于:提高性能(流穿模式去除mAb聚集体,效果优越;载量及产品回收率高);降低成本(填料和缓冲液体积显著减少;层析柱、缓冲罐等更小因而生产占地面积更小);简化工艺(低盐工艺条件,其后的离子交换步骤之前无需稀释;处理体积显著减少,改善了病毒过滤和超滤处理的经济效益);提高易用性(硬质基架,高流速,更易装填)- Eshmuno® S层析填料Eshmuno® S填料是Eshmuno®系列离子交换填料的第一个成员。它是强阳离子交换剂,在直接捕获与蛋白A之后步骤中具有高生产能力。与其他阳离子交换剂相比,它显示了优越抗体结合力。而且,Eshmuno® S填料能够采用高得多的流率,而生物分子仍与触手强力结合。 Eshmuno® S的优势在于其对所感兴趣的生物分子的高选择性。Eshmuno® S填料有效地去除HCP,因而选择性比传统层析填料更高。由于Eshmuno® S填料具有优良的压力流动特性,您的下游加工可获得杰出的生产能力(超过40 mg/mLh),为mAb的生产节约客观的制造成本。- Eshmuno® CPS层析填料Eshmuno® CPS阳离子交换填料在高盐条件下,在重组蛋白纯化工艺中具有高动态载量和高分离效率的优点。Eshmuno® CPS填料的耐盐性已被证明可支持直接上样高电导率样品,降低对稀释的需求。直接节约了缓冲液和时间,减少生产所需占地空间,简化生产步骤结合高效纯化,从而可提高整体的生产效率。 Eshmuno® CPS的优势在于:在高电导率水平下具有优异的结合载量;强阳离子交换剂,无疏水集团,便于工艺开发;刚性基质颗粒,支持更高的流速,易于装柱;节约成本和时间,从而提高生产效率。- Eshmuno® HCX层析填料作为最新的创新性Eshmuno®填料系列产品之一,Eshmuno® HCX填料是一款智能型混合模式填料,结合了默克著名的触手(tentacle)结构和全新的亲水聚乙烯醚基质。因此即使在盐浓度高的传统阴阳离子交换,或是流穿模式的应用,Eshmuno® HCX填料都有出色的表现。 Eshmuno® HCX的优势在于:在高盐浓度下更高的载量;产量优越的生产效率;出色的选择性;刚性基质,易于装柱;优异的压力流速性能。- Eshmuno® Q层析填料Eshmuno® Q阴离子交换填料兼具Eshmuno®填料的触手结构与新型亲水聚乙烯醚基质。Eshmuno® Q填料在典型的阴离子交换应用(例如以流穿模式去除杂质,或在血液制品加工时分离血液因子)中,效果杰出。 Eshmuno® Q的优势在于:卓越的生物分子下游工艺产率;高流速,低背压;优异的杂质去除;稳健安全的装柱流程;优秀的化学稳定性 更多信息,e.g., 填料性能,详细参数列表等,可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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  • 欧奇奥 IPAC1 蛋白质聚集体成像计数分析仪粒度分析粒子计数(颗粒数/毫升)特殊细胞蛋白聚集体分析(最小体积100微升)生物技术专用特殊光学台欧奇奥 IPAC1 蛋白质聚集体成像计数分析仪 蛋白质是怎样构成的?蛋白质是以氨基酸为基本单位构成的生物高分子。蛋白质分子上氨基酸的序列和由此形成的立体结构构成了蛋白质结构的多样性。蛋白质具有一级、二级、三级、四级结构,蛋白质分子的结构决定了它的功能。一级结构:蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序,以及二硫键的位置。二级结构:蛋白质分子局区域内,多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。三级结构:蛋白质的二级结构基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的空间构象。四级结构:多亚基蛋白质分子中各个具有三级结构的多肽链,以适当的方式聚合所形成的蛋白质的三维结构。欧奇奥 IPAC1 蛋白质聚集体成像计数分析仪 蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除了遗传密码所编码的20种“标准”氨基酸,在蛋白质中,某些氨基酸残基还可以被翻译后修饰而发生化学结构的变化,从而对蛋白质进行激活或调控。但是,如果蛋白质间发生非特异性结合,不仅蛋白质失去应有活性,而且易形成包涵体,导致蛋白基因工程成本增加。聚集体的结构包括淀粉样蛋白纤维结构和包涵体结构。生物医学工程中为什么必须研究和观测蛋白质聚集体?蛋白质聚集已经成为药物与生物学领域中的研究热点,其中蛋白质以非天然构象存在,还常伴随着β-折叠量的增加。老年痴呆症和II型糖尿病都与蛋白质聚集有关。研究蛋白质聚集体有助于理解体内分子病的形成。在蛋白质和药物的后基因组时代,寻找蛋白质晶体的优化条件一直是晶体生长工作者的目标。而成核前溶液中蛋白质形成的聚集体的状态(包括聚集体的大小,形貌,甚至于构象等)的变化会直接影响到成核的情况。因此,对于无序聚集体状态的变化研究,有助于分析有序聚集体的出现条件并提供蛋白质晶体生长的合适条件。清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室购置“多角度激光光散射凝胶色谱系统”,用于生物样品溶液形态分析、蛋白质及其聚集体分子量和分布测定,蛋白质均一性、稳定性分析及其结晶状态和条件的筛选,研究蛋白质聚集体对膜污染过程的影响。蛋白聚集严重影响以蛋白为基础研发的药物。在药物制剂中,蛋白聚集在生物活性和免疫原性方面影响药效。蛋白聚集发生在生产过程的各个阶段包括细胞培养、纯化、生产、储存、运输等方面。制药工业希望在生物工艺中找到新的方法,可用于检测、追踪、定量分析影响蛋白聚集的因素。近年来以冻干稳定形式存在的蛋白聚集体作为标准品,可以准确地定量检测蛋白聚集,加上新颖的只需在酶标仪里即可实验的ProteoStat protein aggregation assay,可对蛋白检测方法进行优化。科学家目前并不确定为何不正确的蛋白质形式和聚集成团现象是神经变性疾病的重要标志,神经变性疾病包括肌萎缩侧索硬化(ALS)、阿尔兹海默氏症和疯牛病等。刊登在11月1日的国际杂志Molecular Cell上的研究报告中,来自耶鲁大学的研究者通过在细菌中研究疾病的发病过程来揭示不正确形式的蛋白质的聚集体的形成过程。蛋白质是由DNA编码控制并且在核糖体的装配下在细胞中形成,然而,有时候蛋白质并不会被正确地装配,这些错误折叠的蛋白质就趋向于聚集。错误折叠的蛋白质的聚集现象就在阿尔兹海默症患者大脑中表现尤为明显。来自耶鲁的研究团队揭示了抗生素链霉素可以诱发大肠杆菌蛋白质的聚集。使用大规模的蛋白质组学及遗传学筛选技术,研究者分析了蛋白质的聚集现象以及筛选了可以使得大肠杆菌对抗生素产生耐药性的细菌蛋白质,最终研究者发现细菌中一种特殊的蛋白质如何保护细菌免于过氧化氢的压力,以及这种蛋白质如何减弱由于链霉素所刺激引发的蛋白质的聚集。
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蛋白聚集体相关的试剂

蛋白聚集体相关的方案

  • 蛋白聚集体的分子量研究
    使用了美国怀雅特技术公司的MALS(DAWN HELEOS)与Optilab rEX 检测器以及UV 检测器联,来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器,可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化,这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性
  • 重组蛋白表征——聚集体分析
    蛋白质药物中聚集体的数量、类型和大小对药物的安全性和有效性有很重要的影响。蛋白质聚集体的形成涉及多种机理,包括疏水基团之间的非共价键相互作用以及二硫键的形成等。蛋白质药物中任何一种聚集体的存在都是有害应当避免的,这是因为聚集体可能导致免疫原性反应(小的聚集体)或者可能影响给药(微粒)。不可逆的聚集体对蛋白质药物潜在的影响最大,尤其是在长期储存和运输过程中产生的不可逆聚集体。常用于聚集体分析的方法有高速离心、体积排阻色谱(光散射检测),以及非变性凝胶电泳。中性pH 条件下的非变性凝胶电泳可用于研究蛋白质的构像、自结合或聚集体。SDS-PAGE(SDS 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)也可用于分离聚集体,但该技术非常耗时且不能很好地分离分子量接近的聚集体或潜在杂质。安捷伦2100 生物分析仪和高灵敏度Protein 250 Assay 可以快速分离完整蛋白质、聚集体和低分子量的杂质,如非糖基化的完整单克隆抗体和游离的轻链和重链。这个分析方法具有很高的重现性 (%CV 6%),并很容易用于开发和生产过程中的质量控制。
  • 蛋白质中聚集体的直接可视化、尺寸测量和计数
    检测蛋白质聚集状态对了解生物医药产品的稳定性和功效是至关重要的。当有蛋白质聚集体时,对产品的质量的生物活性和原免疫性两方面有很大的影响。很多聚集体遇到生物样品会按照大小和特性排列(如:可溶的和不可溶的,共价的和非共价的或者可逆的和不可逆的)。蛋白质聚集体的范围跨度很大,从小型的低聚体(纳米级)到包含成百万的单体单元构成的不可溶的微米级的聚集体。在制造过程(细胞培养、提纯、形成)、贮存、分配和产品处理过程中的任何一步都可能产生蛋白质聚集体。它可能是由于各种压力引起的,比如,搅拌、暴露在极端的pH下、温度、离子强度或者各种界面(如,气-液界面)。在高蛋白含量(像单克隆抗体形成的情况)情况下,会出现进一步增加聚集体的可能性。因此,在开发、制造以及药物的后续贮存和描述产物时都必须仔细描述和控制聚集体。同样地,可以通过监测聚集体的状态,修改或者优化生产过程来实现。现在NanoSight提供一种以激光为基础的纳米粒子跟踪分析(NTA)的新系统,它可以使纳米粒子(如蛋白质聚集物)直接在液相中实时地观测到单个的颗粒并且对其计数。此外还可以获得高分辨率的粒度分布图。该技术具有快速、可靠、准确并且成本低,正因为这些特点使之成为现存纳米颗粒分析方法(如DLS(又称电子相关光谱PCS,)或者电子显微镜(EM))的很好的替代或者补足。

蛋白聚集体相关的论坛

  • 【网络会议】 应用安捷伦最新AdvanceBio SEC色谱柱解决生物制药聚集体分析中挑战

    【讲座主题】应用安捷伦最新AdvanceBio SEC色谱柱解决生物制药聚集体分析中挑战【讲座时间】2016年03月15日 10:00:00【主讲老师】米建秋 毕业于北京大学化学系,有着丰富的色谱、质谱经验!【会议简介】近年来随着生物制药行业在国内蓬勃发展,相应的产品表征方法研究成为行业热点。聚集体是生物药物的关键质量属性,也是表征的难点。聚集体的不稳定性以及与色谱柱之间的次级相互作用往往会带来测试结果偏离真实含量,甚至导致对产品质量和生产工艺的错误判断,影响药物的安全性。安捷伦致力于研发新一代创新的体积排阻硅胶填料,降低次级相互作用,消除聚集体分析中的不确定性。本次网络讲堂将会介绍安捷伦科技基于全新填料技术推出的高分辨、高惰性AdvanceBio SEC色谱柱在真实表征聚集体方面的应用。抗体药物结合物(ADC)由于连接了疏水性的药物,在SEC分析中疏水相互作用更为明显,导致峰拖尾和分离变差,本讲座特别呈现AdvanceBio SEC色谱柱在全面改善ADC聚集体分析峰形和分离的应用实例,为生物药物研究工作者提供性能优越的表征工具。AdvanceBio SEC 色谱柱亮点:• 2.7um小颗粒粒径实现更好的柱效• 优化的孔径实现更高的分离度和现更准确的定量• 良好的惰性可实现高灵敏度和低浓度聚集体的定量分析• 更高的重现性可避免重复工作【会议报名】http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/1778

蛋白聚集体相关的资料

蛋白聚集体相关的资讯

  • Postnova场流分离系统应用举例:蛋白质聚集体分离的理想解决方案
    Postnova场流分离系统应用举例——蛋白质聚集体分离的理想解决方案 蛋白质聚集体已经成为药学发展和质检上一个重要的问题。其活性,生物利用度和可能的消极免疫响应等性能直接与不同程度的聚集态的存在有关。因此不仅FDA, 更多的官方和私人研究机构都对聚集态结构产生越来越大的兴趣。他们研究的目标是确定精确的聚集情况,即药物中的蛋白质中某个时间有多少聚集态结构形成以及如何避免这种情况。 场流分离技术是分离技术的一种,它可以与液相色谱(LC)相比。就像液相主要用来分离小分子一样,场流分离主要用来分离大分子或粒子(可称为:粒子色谱)。场流分离技术是一个独特的分离技术,所有场流分离技术都使用相同的基本分离的原则,但采用不同的分离场。根据不同分离场,场流分离技术可分为流动场流分离,沉淀场流分离,热场流分离等。 当样品注射到场流分离通道时,分离应力作用于聚合物或粒子强迫它们向通道底层移动,通道底层就被称为聚集壁。样品不能透过聚集壁,所以它们再次扩散到通道中心。扩散应力被分离应力抵消,在很短的时间(一般是30~120秒)内两种力之间就建立起一个稳定的动态平衡。大小不同的颗粒有着不同的扩散系数,所以它们在通道内由于速度梯度而被分离。注射后的粒子/聚合物由于“垂直场力”的存在,受迫向垂直于流动相流动的方向移动。小粒子由于具有较大的扩散系数将会比大粒子在通道内扩散的更深远。结果就是,小粒子在通道内被“层流”更快的定位,并因此而被洗脱出来;而大粒子则定位较慢,后洗脱出来。 上图是使用AF4非对称场流分离单克隆抗体的结果。在20分钟内,不同程度的聚集态被分开,整个分离过程由于没有固定相存在,因此蛋白质的空间结构不会被破坏。样品不需要前处理,更可以通过联用多种在线检测器(LS, UV, RI, SEM, DLS),方便迅速得到需要的数据。 场流分离技术具有以下优点: • 快速、温和的分离,可以兼容任何溶剂和缓冲液 • 超高的分辨率(±1nm) • 没有任何固定相的分离通道 • 宽分离范围:粒径1nm~100mm /分子量1000Da~1012Da • 无需前处理及过滤,直接进样复杂基质样品 • 可收集所需要的样品,方便升级至制备级 • 能够连接各种检测器,如在线串联紫外、光散射、荧光、质谱等检测器 • 可同时测定分子的分子量及粒子的粒径。 这些优点使场流分离技术在蛋白质及其聚集体分离方面可以发挥巨大的作用。 更多产品详情,敬请登陆:www.tegent.com.cn 德祥热线:4008 822 822 info@tegent.com.cn
  • 揭秘岛津生物药聚集体粒子表征的创新之道
    导读生物药发生聚集后药效会明显减弱,还可能导致人体出现休克,岛津基于流动成像技术开发的粒子分析系统,对生物药中亚可见类聚集体以及不溶性微粒物或外源性组分检测提供了全新分析手段。 受新冠疫情影响,世界各国经济遭受重创,在面临资本寒冬的大环境中生物医药产业一枝独秀,逆势增长,俨然成为世界经济发展以及全球健康保障的指明灯。生物药可对病原体进行特异性攻击,副作用小,药效显著,但易受到环境温度、压力、存储条件、外界异物引入等因素影响而发生聚集。研究表明,生物药发生聚集后药效会明显减弱或消失,严重时还会因免疫反应而导致人体出现休克症状。 对于生物聚集体的分析,小于100nm的不可见聚集体通常使用空间排阻色谱法(SEC)检测,对于10um以上可见区聚集体美国药典和日本药典规定使用光阻法进行检定,但在100nm至10um之间并无合适的定量评价方法。2020版中国药典第四部关于不溶性微粒物检查,第一法光阻法,第二法显微计数法。光阻法只能给出计数浓度,不能查看粒子形貌及聚集状态,显微计数法虽然能查看粒子形貌及个数,但检定效率低且代表性差。 图1 生物聚集体大小及粒径范围分布 岛津iSpect DIA-10基于流动成像技术开发的粒子分析系统综合了粒度、显微观察、粒子计数三类仪器的特点,可以精确捕捉粒子形貌、粒径大小分布、能对不同大小粒子进行有效区分并给出对应粒径范围粒子的计数浓度结果,最低仅需50uL样品消耗且有非常高的灵敏度。对于生物药中亚可见类聚集体的检定以及相关的不溶性微粒物或外源性组分检查可提供一个全新分析手段。图2 岛津iSpect DIA-10动态颗粒图像分析系统 应用实例 生物药中不溶性亚可见微粒物的检查 样品处理:人体免疫球蛋白(1mg/mL)两份,一份80℃加热3min,一份机械搅拌10min样品分析:使用iSpect DIA-10分别观察其蛋白聚集形成状态 图3 80℃加热3min后粒子状态 图4 机械搅拌10min后粒子状态 图5 粒子检定结果 生物蛋白聚集体的粒径范围一般在0.2~10um之间,传统的蛋白聚集体评价方法中存在“无法一次性完成亚可见区的测定、”无法边施压(加热或机械刺激)边测定“、”无法回收已测样品“和“无法进行定量”等问题。岛津开发的生物医药聚集体评价系统Aggregates Sizer可以完美解决上述问题。图6 生物聚集体评价系统Aggregates Sizer ? 定量评价生物聚合体浓度(ug/mL)? 高灵敏度生物聚合体分析,一次仅需0.4mL? 具有温度控制及机械搅拌功能? 间隔1秒的超快速聚集过程监控? 可进行超过15小时的连续不间断测定 应用实例 不同温度及机械压力刺激下,生物蛋白聚集情况分析 样品:静脉注射免疫球蛋白(IVIG)热压力处理:在70℃下对1mL IVIC溶液进行5、7、9分钟培养后,取0.4ml进行测定机械刺激处理:5mL IVIC溶液室温中按190次/分钟速度搅拌,进行8个小时的连续测定 通过Aggregates Sizer生物医药聚集体评价系统对聚集体粒径、生成的聚集体浓度随时间的变化进行评价,结果如图7、图8所示。由图可知,施加热压力时,只在0.2um附近增加聚合体,而1um以上的粒径处并未生成聚集体。施加机械刺激时,随着时间的增加,可以发现在0.2~10um区域聚集体增加。FDA认证中将亚可见区分为0.2~2um和2~10um两个区域进行分别评价,而使用Aggregates Sizer只需一次测定即可得到整个区域的聚合体生成量信息。Aggregates Sizer采用的qLD法可以有效评价蛋白质在研发制造过程中受热压或机械刺激对生物药品的影响评价。图7 70℃加热 图8 190次/分钟速度搅拌 总结 生物药具有副作用小药效显著的特点,但在生产、运输、使用过程中容易产生聚集而影响药效,在生物聚集体大量存在的100nm~10um粒径范围内并无有效的评价方法,无相关的在线模拟实验(温度、机械压力影响)手段、无法进行定量分析、无法回收已测样品等,针对这一系列问题,岛津开发的Aggregates Sizer生物医药聚集体评价系统以及基于流动成像技术开发的iSpect DIA-10粒子分析系统可以很好的解决上述问题,可为生物药开发及品质监控提供全新的解决方案。
  • 我国科学家利用聚集体调控探针实现多种细胞器动态超分辨成像
    近日,中科院大连化学物理研究所研究员徐兆超团队发展了聚集体调控探针,解决了以往蛋白标签荧光探针在超分辨成像应用中缺乏对多种细胞器通用性标记的问题。相关研究成果已发表于《聚集体》。  纳米尺度下细胞器与亚细胞器动态行为的监测与解析对于生命进程的解密至关重要。徐兆超团队前期针对溶酶体内酸性微环境设计合成了溶酶体自闪染料,并借助单分子定位显微镜(SMLM)实时监测了溶酶体运动并发现4种溶酶体间相互作用模式,针对脂滴内部高度疏水环境设计了缓冲脂滴探针,实现了脂滴的稳定超分辨成像并发现脂滴融合的新模式。该团队构建的SNAP蛋白标签探针还克服了传统线粒体探针易受电位波动而脱靶的问题,实现了对线粒体的稳定标记和动态超分辨成像。  然而,蛋白标签荧光探针依然面临细胞渗透性差的问题,特别是探针在细胞内局域分布使得单一探针难以具有对多种细胞器广谱性标记的性能。对此,该团队发展了具有“单体—二聚体—聚集体”多体系动态调控的SNAP蛋白标签探针BGAN-Aze,该探针在细胞外形成荧光淬灭的纳米聚集体而具有快速穿透细胞膜和在细胞内广泛分布的能力,在细胞内以单体的形式与目标蛋白共价连接,并伴随荧光的恢复,最终实现细胞内多种细胞器选择性荧光识别与细胞器亚结构的动态超分辨成像。  此外,研究发现BGAN-Aze为不带电荷的中性分子,可保持高度的细胞渗透性与生物相容性,能够实现纳米尺度下对细胞膜、线粒体、细胞核等多种细胞器亚结构的长时间追踪。  该探针基于遗传编码技术,实现了细胞内多种细胞器选择性荧光识别的广谱应用性,并且实现了细胞器亚结构的动态超分辨成像,进而揭示了多种未见报道的细胞器结构动态变化,为进一步研究不同细胞器的功能提供工具。
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