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求助:丹参中丹参酮类的行列计算方法?先要计算出隐丹参酮和丹参酮I的保留时间?还是直接用丹参酮IIA的峰面积乘以校正因子来计算3个成分的含量?
请问,增补二,丹参—丹参酮类中隐丹参酮与丹参酮1的峰就是分不开的吗?[img=,690,511]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907251441315687_7589_1750127_3.jpg!w690x511.jpg[/img]
[align=center][b][/b][/align][align=center][b][/b][/align][align=center][b]液相色谱泵及色谱柱对丹参酮类化合物分离度影响[/b][/align]1. [b]色谱条件与系统适用性试验[/b] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.02% 磷酸溶液为流动相B ,按下表中的规定进行梯度洗脱;柱温为20°C 检测波长为270 nm。理论板数按丹参酮II A峰计算应不低于60000。表1 梯度洗脱程序表[img=,598,240]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041605406100_5206_2613952_3.jpg!w598x240.jpg[/img]2. [b]对照品溶液的制备[/b] 取丹参酮II A对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加甲醇制成25.2 μg/mL溶液,即得。3. [b]供试品溶液的制备 [/b] 取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率140W,频率42kHz) 30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。4. [b]测定法 [/b] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL, 注入液相色谱仪测定。以丹参酮IIA对照品为参照, 以其相应的峰为S 峰,计算隐丹参酮、丹参酮I的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的± 5 %范围之内。相对保留时间及校正因子见下表:表2 药典丹参酮类化合物相对保留时间及校正因子[align=left][img=,523,200]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041606235938_8876_2613952_3.png!w523x200.jpg[/img][/align]5. [b]结果与讨论[/b]5.1 二元高压泵色谱峰定位 依次将隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA对照品溶液在配置有二元高压泵的液相色谱仪上机分析,在依据保留时间对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA进行色谱峰定位。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA色谱图及保留时间见下图。[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041641467848_7200_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图1 丹参酮I色谱图[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041642177002_7482_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图2 隐丹参酮色谱图[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041642305674_9673_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图3 丹参酮IIA色谱图5.2 四元泵色谱峰定位 依次将隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA对照品溶液在配置有四元泵的液相色谱仪上机分析,在依据保留时间对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA进行色谱峰定位。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA色谱图及保留时间见下图。[img=,690,219]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041646050499_4164_2613952_3.png!w690x219.jpg[/img] 图4 四元泵隐丹参酮色谱图[img=,690,232]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041646211305_4912_2613952_3.png!w690x232.jpg[/img] 图5 四元泵丹参酮I色谱图[img=,690,220]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041646454301_6774_2613952_3.png!w690x220.jpg[/img] 图6 四元泵丹参酮IIA色谱图5.3不同色谱柱对丹参酮类化合物分离度影响(二元高压泵) 在配置有二元高压泵的液相色谱仪上,分别以XDB C18、SB C18色谱柱分析同一丹参药材供试品溶液,色谱图见图7、图8。[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041647134017_3086_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图7 XDB C18色谱柱药材色谱图[img=,690,307]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041647453361_5976_2613952_3.jpg!w690x307.jpg[/img] 图8 SB C18色谱柱丹参药材色谱图5.4 不同泵对丹参酮类化合物分离度影响 分别在在配置有二元高压泵、四元泵的液相色谱仪上,SB C18色谱柱分析同一丹参药材供试品溶液,色谱图见图9、图10。[align=left][img=,690,307]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041649350009_4280_2613952_3.jpg!w690x307.jpg[/img][/align][align=left] 图9 SB C18色谱柱丹参药材色谱图(二元高压泵)[/align][align=left][img=,690,220]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041650042149_4182_2613952_3.png!w690x220.jpg[/img][/align][align=left] 图10 SB C18色谱柱丹参药材色谱图(四元泵)[/align][b]6 讨论[/b]6.1 丹参中丹参酮类化合物含量测定时不同色谱柱、不同类型的泵对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA分离度影响较大。6.2 丹参酮类化合物在同一厂家二元泵的分离度优于四元泵,二元泵仪器上隐丹参酮、丹参酮I分开,隐丹参酮、丹参酮I在四元泵仪器采集色谱图上是一个对称性良好的一个色谱峰,未见分开趋势。6.3 不同类型的C18色谱柱对于丹参酮类化合物分离度也有影响,本实验中二元泵仪器上XDB色谱柱分离丹参酮类化合物效果优于SB色谱柱。 综上,建议测定丹参中丹参酮类化合物时选择合适的仪器、色谱柱,丹参酮类化合物才能更好分离,进而准确定位及含量计算。