AlphaLISA试剂中自动化分液检测方案(移液工作站)

智能文字提取功能测试中

FORMULATRIX www.formulatrix.com/tempest波士顿富默乐科技@ TEMPESTR是一台拥有96个独立控制喷嘴的高通量、非接触式自动分液设备，最多可将12种试剂任意体积分配到任意孔中。 主要特性 模块化-高通量分液模块可同时连接12种不同液体芯片，每种芯片分液由8个喷嘴共同完成(96通道可同时使用，也可拆分成12个8通道灵活使用)高效-管路死体积仅有 40uL，使用移液吸头死体积仅有 100uL 快速-往96孔板里加入200nL 液体仅需3秒，往384孔板里加入1uL液体仅需5秒 灵活多变-TEMPEST 可匹配 SBS板，并可选配孔板堆叠模块及扫码模块，可轻松松其他自动化工作站进行整合· 可靠-非接触式微隔膜技术，正压排液 应用方向：实验设计/试剂开发，高通量筛选，PCR/qPCR ， NGS文库构建，细胞分液，磁珠法相关应用 方法移液，在数百万次分液后仍能保持极优的分液精确度及准确度最前沿的分液技术 TEMPESTR的核心技术微流控芯片，内建一组微阀通过正压协同微隔膜完成分液工作，可准确分配一系列不同体积的液体(0.2uL到mL)。这组微阀中包含两组体积的隔膜，分别是200nL 和1uL，或者 1uL 和5uL，压缩频率每秒可达8次。通过该专利技术，能实现不同粘稠度液体的精准分液。 12种液体分液信手拈来 TEMPEST 可同时处理12种不同液体的分液，通过12组微流控芯片，每组芯片分液由8个独立控制的喷嘴共同完成 深孔板分液 TEMPEST 已升级兼容深孔板分液节约试剂用量 TEMPEST 能够从微流控芯片中将残留的液体退回到试剂瓶，从而使死体积仅有40uL。使用移液吸头作为液体容器分液，死体积仅有 100uL。 通过疏水管路连接可使12种液体存放在几乎任意的器皿中 直观且易用的软件 TEMPEST 软件提供直观且用户友好的交互界面，在几分钟内就可以完成复杂的分液流程设计。该软件提供直观可视的分液设计及硬件设置，并提供梯度处理及反选的快捷工具。Excel表格的读取更是能满足手动输入每孔不同的独立分液体积的高阶需求。 用户友好的交互界面简化复杂的移液流程设计 灵活的不同粘稠度液体分液通过软件控制压力及真空设置，能轻易地根据试剂的粘稠度需求调整优化分液效果 快速高通量完成分液任务 绝大多数分液任务在40秒内可完成 96孔板加入200nL 液体仅需3秒 384孔板加入200nL液体仅需6秒 1536孔板加入200nL 液体仅需11秒 96孔板加入5uL液体仅需4秒 384 孔板加入1uL液体仅需5秒 384孔板加入10uL液体仅需9秒 384孔板加入20uL 液体仅需13秒 选配扫码模块自动追踪分液过程 无需手工清洗维护 TEMPEST 拥有自动化的双洗液清洗循环设计，无需用户干预即可彻底清洗整个液流通路。 整合设计 小巧的仪器尺寸设计及强大的自动化交互功能使 TEMPEST 可轻松地与机械手臂、抓手及调度软件进行整合根据需求定制化产品 由于 TEMPEST 可同时处理12组微流控芯片，每台机器可根据应用方向及预算定制不同高通芯片( 1uL和5uL)及低通芯片(0.2uL和1uL)组合方案扫码模块选配的扫码模块可根据孔板上的扫码记录进行分液。扫码后相关的分液文件被调出并执行 选配孔板堆叠模块可放置24块 SBS板 孔板堆叠模块 TEMPEST 可匹配几乎所有 SBS板，包括24孔-，96孔-，384孔-及1536 孔板。选配的孔板堆叠模块可放置24 块SBS板(根据14.35mm板高计算)该模块高350mm，双向设计，孔板从 任意一边开始循环皆可。 节省空间 宽：555mm (22”) 宽：选配垃圾站可达595mm(23.5”) 深：325mm(13°) 深：选配管载架：370mm(14.5") 高：265mm(10.5”) 高：选配孔孔堆叠模块 560mm(22”) 重：30磅或者13.6 kg TEMPEST 微流控芯片选项 Pulses DeadVol. Dead Vol.Chip Type Part # Diaphragm Vol. Min Vol. Max Vol. CV'sPer Second With Tube* PipetteLow Volume TSCL 0.2 uL+1uL 0.2 uL 8 40 pL 100 pL <8% at 0.2 pL. <5%at 1pLHigh Volume TSCH 1pL+5 uL 1pL OO 4 40 uL 100 pL <5% at1pL. <5%at5uL add 350 uL if not recovered 介绍药代动力学 (PK) 和药效学 (PD) 研究在药物发现和开发过程中发挥着关键作用。这些研究通常需要从具有高灵敏度和广泛分析范围的大量样品中表征药物和生物标志物的浓度。AlphaLISA® 技术（PerkinElmer, Inc., Waltham, MA）是传统固相 ELISA 检测的均相免洗替代品，可用于血浆和血清样品中的生物标志物检测。在 AlphaLISA 检测中，使用生物素化抗体和抗分析物偶联的受体珠来捕获目标分析物。生物素化抗体与链霉亲和素包被的供体珠结合。当样品中存在分析物时，供体珠和受体珠会聚在一起。激发后，供体珠内的光敏剂将环境氧转化为激发单线态。单线态氧扩散到200 nm 以在受体珠中产生化学发光反应，从而导致光发射。光量与样品中存在的分析物的量成正比，并且可以通过对照标准曲线对测定进行量化。与传统 ELISA 相比，AlphaLISA 工作流程已被证明可提供更低的检测限、更高的测定精度和更宽的动态范围，同时在测量血浆样品中胰岛素的样品时体积减少 5 倍。该技术已应用于支持高通量生物分析的自动化过程，在 6 小时内可处理超过 10,000 个数据点。与基于电磁阀的分液仪器相比，TEMPEST® 微流体分液仪器将 AlphaLISA 试剂添加步骤自动化，从而使试剂死体积从 30-65 毫升减少 6 倍至 5-10 毫升，同时在自动化的工作流程中保持分析性能。材料和方法如前所述制备生物素化抗体和抗分析物偶联的受体珠和测定缓冲液。在 384 孔板 (Optiplates, PerkinElmer) 中进行该测定。在该测定中，校准品和样品一式两份。通过从 96 孔样品板转移到 384 孔酶联板，将测试样品 (2 μL) 和标准品添加到反应孔中。使用 TEMPEST 或 FlexDropTM (PerkinElmer) 自动分液器，将 15 μL的 预混合抗体偶联受体珠和置于测定缓冲液中的生物素化抗体添加到反应孔中。将酶联板盖上盖子并在室温 (RT) 下培养60 分钟。在培养结束时，使用 TEMPEST 或FlexDrop 分液器添加置于测定缓冲液 (30 μL) 中的链霉亲和素供体珠。 将酶联板再次盖上盖子并在室温下培养30分钟。此后立即使用 EnVision® 读板器 (PerkinElmer) 检测酶联板。结果通过AlphaLISA自动检测系统处理736个样品，连续两天进行两次单独的测定。第一天的使用两台FlexDrop装置处理样品，将抗体和珠子分配到酶联板上。第2天使用TEMPEST来处理样品和分配试剂，并对所得的浓度值进行比较（图3）。得到的R2值为0.9741，平均回收率为101%。第二个实验的目的是为了判断使用TEMPEST分配试剂检测方法的稳定性。使用50 pM的样品处理了20块微孔板。微孔板测试后CVs小于5%，20块微孔板双重测定的平均CVs小于3%（图4）。讨论AlphaLISA免疫测定的同质免洗特性有利于实施高通量的自动化工作流程；然而，在扩大流程以支持大规模PK/PD研究中的生物标志物检测需求时，必须考虑试剂的成本。我们设计了一个集成的机器人工作站，在6小时内处理多达25个384孔板。为了满足所需的检测灵活性，最初的系统设计使用了两台FlexDrop仪器来分配AlphaLISA试剂。虽然这个系统设计能够提供所需的产量，但FlexDrop分配器在充注步骤中消耗了多达50毫升的试剂，导致每块微孔板的试剂成本大幅增加。TEMPEST仪器采用的微流控隔膜泵技术使AlphaLISA试剂的充注量减少了3-5倍（图5），同时保持了PK/PD研究所需的检测性能和重复性。此外，TEMPEST能够从96个喷嘴中分配多达12种试剂，这使得一台TEMPEST仪器可以取代两台FlexDrop仪器，降低了系统硬件的复杂性。最后，TEMPEST增加了容量，可以选择运行多达8种不同的测定，而其他分配仪器只能运行6种测定。