蟾酥中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基检测方案(液相色谱仪)

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酯蟾毒配基标准曲线 【仪电分析】《药典》蟾酥测定方法-高效液相色谱法 蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor 或黑框蟾蜍余Bufomelanistictus Schneider 的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，洗净，挤取耳后腺和皮肤腺的白色浆液，加工，干燥。味辛性温，有毒，归心经。有解毒，止痛，开窍醒神的功效，用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，，中暑神昏，痧胀腹痛吐泻。 、方法原理 参照《药典》中蟾酥的液相色谱检测方法，以华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为目标物，以保留时间定性，峰面积外标法定量。 二、主要仪器和试剂 a. LC220 高效液相色谱仪：含紫外检测器； b. 万分之一天平； c.回流冷凝装置； d. 华蟾酥毒基对照品； e.酯蟾毒配基对照品； f.乙：色谱纯； g.甲醇：色谱纯； h. 磷酸二氢钾：分析纯； i.磷酸：分析纯。 三、实验方法 3.1色谱条件 色谱柱 C18(250mm*4.6mm， 5um)或性能相当者 流速 0.8mL/min 波长 296nm 柱温 40°℃ 进样量 20uL 流动相 乙腈：0.5%磷酸二氢钾缓冲液=50：50(用磷酸调节 pH 到3.20) 3.2试剂配制 3.2.1华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准储备液 分别准确角取 10mg(精确到0.1mg)华蟾酥毒基和酯蟾毒配基对照品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度均为 100mg/L 的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基混合标准储备液，于4℃避光保存。 3.2.2华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准工作液 取上述标准储备液用甲醇分别稀释成10、20、50、70、100mg/L的标准工作液，待测。 3.2.3样品处理 称取 25mg(精确至0.1mg)蟾酥细粉于50mL具塞锥形瓶中，加入20mL 甲醇，称定重量，加热回流1h，放冷，再尔定重量，用甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 四、实验图谱及计算结果 4.1标样谱图 [mV] 华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准色谱图 4.2样品谱图 [mV] 蟾酥样品色谱图 4.3样品重复性 计算已存档：均值与RSD(注： 内标定量，务必选... 标题 组分1->面积 组分2->面积 组分总面积 .]-样品2. JF 539114.6875 92681.4844 631796.188 |-样品1-1.J 547562.5000 91642.8359 639205.313 I-样品1-2.J 548289.6250 91873.2813 640162.875 1]-样品1.JK 544950.5625 91443.4375 636394.000 I-样品1-3.J 543547.1250 91518.0156 635065.125 6 FSD=0.0067 FSD=0.0055 1 FSD=0.0053 7 平均值=544692.8750= 平均值=91831.8125 ：均值=636524.687 极大值=548289.6250= ：大值=640162.875 9 极小值=539114.6875= 极小值=91443.4375 ：小值=631796.187 10 极差值=9174.9375 极差值=1238.0469 极差值=8366.6875 4.4标准曲线 华蟾酥毒基标准曲线 4.5计算结果 544692.875X华= -=36.50mg/L，15197.9.f15197.9×98.2% 【仪电分析】《药典》蟾酥测定方法-高效液相色谱法蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑框蟾蜍Bufo melanistictus Schneider的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，洗净，挤取耳后腺和皮肤腺的白色浆液，加工，干燥。味辛性温，有毒，归心经。有解毒，止痛，开窍醒神的功效，用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，痧胀腹痛吐泻。一、方法原理参照《药典》中蟾酥的液相色谱检测方法，以华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为目标物，以保留时间定性，峰面积外标法定量。二、主要仪器和试剂a. LC220高效液相色谱仪：含紫外检测器；                                               b. 万分之一天平；c. 回流冷凝装置；d. 华蟾酥毒基对照品；e. 酯蟾毒配基对照品；f. 乙腈：色谱纯；g. 甲醇：色谱纯；h. 磷酸二氢钾：分析纯；i. 磷酸：分析纯。三、实验方法3.1 色谱条件色谱柱C18（250mm*4.6mm，5μm）流  速0.8 mL/min波  长296 nm柱  温40 ℃进样量20 μL流动相乙腈:0.5%磷酸二氢钾缓冲液=50:50（用磷酸调节pH到3.20）3.2 试剂配制3.2.1 华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准储备液分别准确称取10mg（精确到0.1mg）华蟾酥毒基和酯蟾毒配基对照品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度均为100mg/L的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基混合标准储备液，于4℃避光保存。3.2.2 华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准工作液取上述标准储备液用甲醇分别稀释成10、20、50、70、100mg/L的标准工作液，待测。3.2.3 样品处理称取25mg（精确至0.1mg）蟾酥细粉于50mL具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。四、实验图谱及计算结果4.1 标样谱图华蟾酥毒基和酯蟾毒配基标准色谱图4.2 样品谱图蟾酥样品色谱图4.3 样品重复性4.4 标准曲线华蟾酥毒基标准曲线酯蟾毒配基标准曲线4.5 计算结果