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病理和微生物样品中显微镜观测检测方案(生物显微镜)

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如何为临床样本观察选择显微镜和摄像头 过去几年中,无论是组织病理学、细胞学、血液病理学、临床显微镜检查或是其他应用,从事临床样本观察的实验 室对拍摄图像的要求明显提高了。除了用于判读形态,它们还有其他很多用途。然而,通过目镜观察到的与摄像 头记录到的图像是有着本质的不同,一种是光学图像,另一种是数码图像。了解摄像头相关的知识和特点,有助 于选择合适的摄像头,从而拍摄到必要细节和彩色保真度高的图像。

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From Eye to Insight DM1000- DM3000 人体工学系统显微镜 地址:上海市长宁区福泉北路518号2座5楼,200335 电话:400-650-6632 Web: www.leica-microsystems.com.cn 病理和微生物样本观察的正置显微镜解决方案 联系我们 MYcroscopy:专为您的日常工作需求而量身定制 DM1000 DM1000 非常适合以下实验的筛查应用,例如组织病理学、细胞学、血液学,以及微生物学。 DM2000 DM2000 旨在用于更加复杂的日常病理学和细胞学实验室应用。 单手操作的对焦旋钮和载物台驱动器有助于加快操作速度,同时腾出另一只手去做其他工作。 0-35°可倾斜人体工学观察镜筒搭配目镜延伸件这种优化解决方案可以让您在一天之中方便改变工作姿态。 DM2500 DM2500特别适用于经常需要做诸如:荧光或微分干涉对比(DIC)等特殊观察方法的病理学或生物医学研究的应用。 借助智能自动化功能,DM3000 主要服务于细胞学和病理学实验室,满足它们在日常工作中的速度要求,又不会牺牲使用者的舒适度。 高度可调的对焦旋钮可以让您的双手和前臂舒适地靠在工作台上,且不受个人手部大小影响。 显微镜的人体工学操作体验,源于同轴驱动和对焦旋钮的对称布局。肩膀水平,脊柱笔直,手臂以舒适的角度倚靠,无需伸长。 DM4B 领域专家的显微镜 人体工学设计:触手可及的载物台、放大以及对焦控制件,加上全自动聚光镜头部移动装置,让您轻松完成工作。 智能自动化:一键切换不同观察方法,让您快速、便捷地从明场切换到荧光。 性能出色:支持配备19mm 视野照相机。该端口与常规 sCMOS传感器相辅相成。可以明显提高样本检查的效率和精度。 DM6B 能满足各种应用的正置全功能平台 荧光成像:特有的荧光强度管理系统(FIM)有助于轻松且可重复地调节激发光,这有助于保护样本免受光漂白。 快速观察:1.25倍物镜搭配宽视野,确保用户能够在单次概览中查看大型标本。 产品 DM1000 DM2000 DM2500 透射光观察方式 明场、相差、暗场、偏振 微分干涉(MIC) x 光源 LED 或30瓦卤素灯 LED 或 30 瓦卤素灯 超亮 LED 或 100瓦卤素灯 光线和对比度管理功能(TL和FL) x x x 物镜转换器操作 手动 手动 手动 物镜数量 5 6或7 6或7 粗调/精调/中等/ 粗调/精调/中等/ 机械对焦 粗调/精调/聚焦限位 聚焦限位/可调扭矩 聚焦限位/可调扭矩 电动对焦 x x x FL 选项-—滤光块数量 3 5 5 可编程功能按钮 x x x 显示屏/触摸屏 X X X 主要特点: ( > LED 透射光照明可以方便地实现恒定色温 ) ( > DM2000-3000 采用精密的对焦机制-2档或(可选)3档对焦,搭配扭矩调节和可调节物台高度限位器。 ) ( > DM2500 还提供强大的 LED 灯或 100万卤素灯光源,非常适合需要微分干涉(DIC)等特殊观察方法的病理学研究。 ) ( > DM3000的"智能自动化”功能能提高效率,改善操作的舒适度。 ) ( > DM4 B的人体工学设计与自动化功能相结合,为大量病例检查提供了理想的平台,明亮清晰的图像让判读更有信心。 ) 产品 DM3000 DM4B DM6B 透射光观察方式 明场、相差、暗场、偏振 微分干涉(DIC) 光源 LED 或 30 瓦卤素灯 亮LED(相当于100瓦) 超亮LED(相当于100瓦) 光线和对比度管理器(TL和FL) x (√TL) 物镜转换器移动 加强版的电动加切换模式 完全编码控制 手动和电动 物镜数量位置 6 6或7 7 机械对焦 粗调/精调/中等/ 聚焦限位/可调扭矩 粗调/精调 粗调/精调 电动对焦 x x FL 选项数字滤光块数量 5 5 6个,外加选配 STP8000 可编程功能按钮 4个,外加可选脚踏开关 6 控制面板的11个 显示屏/触摸屏 x 状态显示屏 智能触摸屏 神经元:微分干涉对比对比 (DIC) 神经元:相差(PH) 神经元:荧光(FL) 多头观察系统非常灵活,而且高度模块化。它们可以连接到单台显微镜并且允许多人同时实时查看同一标本的高分辨率图像。 指明观察方向 可以定位到一个明亮的白色 LED 发光箭头,以指出视野中任何位置的感兴趣区域的位置(ROI),让每个观察站的所有观众都能清楚地看到。 获取真实体验 DM 多头观察系统多视系统是获洱不同意见、咨询他人意见方便相互交流和或开展培训的设备,因为所有观察者都能实时看到同一样本的精准图像。 全金属外壳以及坚固的金属支柱可牢牢支撑外部观察 镜筒,提供出色的稳定性和耐久性。 不论您选择2站、3站还是20站型号,所有观察站均可 360度旋车 钳 061 c0 D U505 >2站,面对面 >2站,并排 >>3站 5站 >10站 > 可以轻松设计大型和小型定制配置,以满足观察站数量和房间大小或形状等方面的独特要求 >20站 MYcroscopy:专为高灵敏度而设计 DMC6200 DFC7000T K3M K5DFC7000 GT K8摄像头产品特点:420万像素 sCMOS摄像头摄像头像素偏移摄像头 CCD 显微镜彩色摄像头 CMOS 显微镜摄像头CCD 显微镜摄像头 sCMOS 显微镜摄像头> 高灵敏度的传感器可以缩短曝光时HD BF>FL >BF>FL >FL >FL>Fl >FL间,因而能够防止光漂白并主动保护DMC6200 可以超快速地进行 DFC7000T 基于新一代的索 K3M 单色 CMOS 摄像头具有 以合理的成本将 sCOMS 技术的基于新一代索尼 EXview HAD IITM传 得益于量子效率(QE)高达95%的细胞免受任何光损伤图像采集,并在每个像素中 尼EXview HADIITM传感器 高帧率采样特性,拥有优异的 灵活成像和强大功能带入实验感器的摄像头,兼具高分辨率和高 背透 CMOS 传感器,K8摄像头出众提供精确的色彩信息。即使 技术,兼具高分辨率和高灵动态范围和出色的色彩重现室。借助 K5 高分辨率的420万灵为敏度。拥有高速触发功能,并且>摄像头降温可以减少噪点,在黑暗性。它能提供每通道12 位的性能 的灵敏度可以帮助您在实验环境性能 是细微的色彩差异也可以通 敏度。一部摄像头就兼顾高 像素传感器进行成像分析所需传感器有冷却功能背景下产生清晰的荧光信号RGB 可量化图像。利用K3摄下从样本中获取尽可能多的数据。过多次采样来实现。这款摄 质量的荧光和明场图像。像头,您可以针对特定需求打的细节进行精准成像。得益于> 硬件触发以及重叠读取模式可以实现像头采用先进的 Sony Exmor 造量身定制的成像系统。您可 K5高达80%的量子效应(QE),高速实时活细胞成像CMOS传感器。 以扫描并拼接大型样本的图 可以减少光毒性效应。像且时间只有上一代摄像头的一半。280万像素 CCD 420万像素 sCMOS像素尺寸4.54x4.54微米 像素尺寸6.5x6.5微米230到2070万像素CCD 280万像素 CCD 629 万像素 CMOS 420万像素2048x2048像素传1感器920x1440 像素像素尺寸5.86x5.86微米 像素尺寸4.54x4.54微米 像素尺寸2.4x2.4微米 像素尺寸6.5x6.5微米8/11/12/16 位8/12,搭配16位比特深度95fps(11位模式)1920x1200-5760x3600像素 1920x1440像素 3072x 2048 像素 2048x2048像素40fps(全幅) 卷帘快门传感器3x16位 8/12,搭配16位比特深度 36 位 RGB,12位单色 16位比特深度123fps(5x5像素融合) 触发方式 MMCX30fps (1920x1200) 40fps(全幅) 15fps (SMA 连接的硬件触发), 40fps(全分辨率)123fps(5x5像素融合) 21fps 被动式降温多功能制冷单色高灵敏度摄像头, 借助先进的传感器技术和制冷系统,可用于对FP表达细胞和组织进行 从而提升科学实验的极限。无论您是用途广泛的彩色摄像头,用 制冷荧光摄像头,既可以拍 可以快速准确地执行生命科 可以为研究实验室、生物科技公荧光拍摄和标准活细胞成像。需要捕捉超高分辨率图像、对亚细胞于超高分辨率明场拍摄,色 摄明场,又可以进行荧光拍 学和临床应用领域的任务。 司中对荧光拍摄有更高要求的应用 器进行低光跟踪,还是对高速的细胞彩色摄像头彩保真度高,特别适用于拍 摄,此外还可以进行同时多 K3M 摄像头在荧光拍摄方面 客户提供有力帮助。其可以进行生理学现象进行成像,各种高难度的单色摄像头特别擅长,可以对大量难以处 高通量的扫描,拍摄日常2D和应用 摄荧光染色标本。 色荧光成像。应用K8均能从容应对。理的样品进行成像。例如采用 3D细胞增殖,以及全标本的拍高清摄像头荧光标记染色的组织和细胞摄。和观察。此外,K5可以根据实验所有对比方法(荧光除外)要求进行高速触发,以减少光毒性的方式减轻对细胞生理学专用荧光摄像头上的伤害。 铃兰 地培养的皮质神经元细胞(小鼠) COS7细胞 DAPI-核(蓝色), Alexa488-肌动蛋白(绿色), 黑腹果蝇幼虫样本:来自Stephan Sigrist教授,德国柏林自由大学 草履虫 Ralf. Jacob教授, 马尔堡大学 MitoRed-线粒体(红色), Alexa647-WGA(洋红) 过去几年中,无论是组织病理学、细胞学、血液病理学、临床显微镜检查或是其他应用,从事临床样本观察的实验室对拍摄图像的要求明显提高了。除了用于判读形态,它们还有其他很多用途。然而,通过目镜观察到的与摄像头记录到的图像是有着本质的不同,一种是光学图像,另一种是数码图像。了解摄像头相关的知识和特点,有助于选择合适的摄像头,从而拍摄到必要细节和彩色保真度高的图像。 您需要拍摄什么样本? 样本的性质决定了观察方法。组织染色和涂片样本通常使用明场显微镜检查颜色强度和色调上的差别,未染色样本则需要使用偏正方法观察结构或形状上的异常。在对特定靶点基因的增减和异位观察时,荧光原位杂交(FISH)是一种常用的方法。 您需要的观察方法会影响摄像头的选择? A. 如果您只想拍摄明场图像,推荐使用高质量彩色色像头。 B.如果您需要不时拍摄荧光图像,一台高质量彩色摄像头便可满足需求 C.单单就荧光图像而言,单色摄像头的效果会优于彩色摄像头 D. 如果您的应用同时需要明场和荧光图像,推荐使用两种摄像头 图A:一个脊髓节组织病理学样本的彩色图像,使用40倍物镜拍摄。 图C: Hoechst 33342 标记的细胞核。 了解明场或荧光成像所需的摄像头之前,我们先介绍一下以下成像技术。 简短的技术科普 ( 相比选择日常摄影用相机,显微镜观察对摄像头的要求截然不同。分辨率并不是理想图像的代名词。相比之下,像素尺寸、芯片尺寸、动态范围和帧率等因素可能更为重要。 ) 摄像头的技术参数通常是此消彼长的。如果某一个方面非常好,那么肯定会有一个方面不那么理想。 > 动态范围是指摄像头传感器记录高强度或低强度信号的性能。它会影响图像中显示细微色彩和信号强度差异的效果。高动态范围需要低噪声和大景深。 像素大小会影响图像的分辨率。像素尺寸越小,分辨率越高。但是小像素不一定会给您带来更好的图像,因为较小的像素比较大的像素收集的光更少,这可能会对图像的动态范围产生不利影响。 噪声也会影响图像的质量。低噪声有助于获得更好的图像质量。您可能会看到信噪比这个术语,它指的是摄像头传感器检测到的光(信号)与几个基本源产生的噪声之间的关系。在荧光成像中,低噪声尤其重要,因为荧光信号一般会弱于明场信号。 > 摄像头帧率决定摄像头在一秒内拍摄的图像数量,以每秒帧数(fps)表示。例如,帧率决定了是否可以很好地显示实时图像或快速获取图像以分析实时样本中发生的动态过程。 比特深度,以位数表示,表示相机分辨灰色调[图D]或彩色(图E)的能力。位深度通常在8到16之间。每个颜色通道的位数越多,彩色或灰色阴影之间的过渡就越精细和平滑。 比特深度的影响对于病理成像很重要,其中明显的颜色差异可能是组织状态的反映,并且可能表明某些异常,例如肿瘤变化。对于用于荧光成像的单色摄像头,更高的位深度意味着样本中荧光标记的强度分层更精细。 这有助于对荧光标记的样本进行成像,这些样本的特征是其中的信号强度非常低或非常高。 图D:摄像头传感器的比特深度是将模拟信号转换为以灰度级为特征的数字信号的能力。比特深度越大,灰度值越多。 8位色深度 12位色深度 ( 图E: 更 大的颜 色位 深 度意 味着 可以 解 析更多 颜 色 的图像。 这 些图表显示 了 8位和12位色深度之 间 的差异 。 Richa r d Ca n cho Ni e m ie tz 供 图 。 ) 希望这部分内容可以激发您对摄像头兴趣。 拍摄明场图像需要什么摄像头? 彩色摄像头适合明场成像。观察染色样本时,彩色保真度和再现性相对重要,因为色调和强度会显示出样本的异常情况。高动态范围的摄像头可以捕捉到细微的色彩差别,因此可以准确地拍摄到病理学家通过目镜观察到的结果,然后他们便可以通过这些数字图像得出诊断结论。由于明场信号通常强于荧光信号,传感器的像素会较小,介于1.5pm到2.5pm之间,但该尺寸仍可以捕捉到高质量图像所需的足够光量。 拍摄荧光图像需要什么摄像头? 荧光信号一般弱于明场信号,因此拍摄荧光图像的摄像头应具备高灵敏性,或者更准确地说,高信噪比。为捕获足够的信号,成像所需的曝光时间通常在 20-1500毫秒之间,但这一时间在很大程度上取决于荧光波长或荧光标记物的强度。 如果仅捕捉荧光信号,那么单色摄像头便是合适的选择,因为它所获得的结果要优于彩色摄像头。彩色摄像头因为窄频灵敏度的问题,特别是在捕捉可见光谱中的紫色和远红色部分,以及传感器架构和整体设计方面的限制,所以在拍摄荧光信号时会有一定的局限性。此外,彩色摄像头往往都配置有 UV/IR 滤镜,也就是说您可能无法在图像中看清或看到紫色、深蓝色和红色荧光信号。如果决定用彩色摄像头拍摄荧光图像,需要考虑到这些局限性。 您将图像用于什么目的? 1.存档和报告 大多数病理实验室都会将用摄像头拍摄的用于诊断的图像进行存档。病理学家会将图像和报告一起保存至实验室或更上级的信息系统。这样就可以通过样本活检的信息溯源并访问到对应的存档图像。如果主要用于存档和报告,就需要能注释图像件和通过 TWAIN 驱动将图像在信息系统中存档的软件。徕卡显微系统的K3摄像头(该型号分别有彩色和单色两个版本)是一个不错的选择。 2.分享和实时成像 有时也会将存档的图像发送给其它人进行会诊。如果用于教学或需要在讨论会上展示,还需要将图像在大屏幕上播放。如果用于实时分享,摄像头的帧率要达到每秒30帧。如果低于 30 fbs,移动样本以在屏幕上显示另外一个感兴趣的区域时,图像会有延迟或抖动。有独立运行能力的摄像头特别适合某些场景。一台独立式摄像头可以直接连接显微镜,无需计算机便可工作,这对于实时展示会大有帮助。代表性产品是徕卡显微系统的 Flexacam C3 摄像头。 3.研究和出版 一些病理实验室开展高水平的科学研究,拍摄的图像要达到用于发表的标准。研究过程中,经常需要深度观察细节,因此能满足诊断判读要求的摄像头并不一定可以满足科学研究的要求,特别是在需要拍摄微弱荧光信号的情况下。如果您的应用中也存在这种情况,可以使用徕卡显微系微的K5摄像头。或者您也可以考虑主动制冷的 sCMOS 摄像头,例如K8,它的制冷系统可以大大降低噪音,获得清晰锐利的图像,因此可以在荧光成像中获得理想的成像效果。 摄像头的选择需要根据样本类型和观察方法来定。但是因为现在科技水平的限制,还没有一种摄像头能适合所有应用。所以摄像头的选择需要对其性能参数和使用者的真实要求之间进行平衡。如果需要同时在明场和荧光成像中获得高质量的图像,推荐的方案是配备两个摄像头或购买两套显微镜系统,分别用于明场和荧光。如果需要对不同品牌和型号进行对比,推荐的方法是在相同的条件下拍摄相同的标本来进行对比。除了图像质量之外,还要考虑如何将摄像头集成到您的工作流程中,是在独立模式下使用,还是在计算机上使用。如果摄像头可以独立使用,只需将其连接上显微镜即可。如果摄像头自带软件,使用起来也会更直观,这样不管是成像、注释还是报告,都很容易处理。通过这种方式,摄像头可以帮助您及时做出判读。 ( 推荐阅读 ) ( [ 1] G r eb,C. , L a s key, P., S chw a b, K. , I n t roduction to Dig i tal C amera Technol o gy, Science Lab ( 2016), Lei c a M i c r osystems ) ( [ 2] Mu ller, C., Greb, C . , Sch w ab, K., Definitio n s of Basic Tech n ical T erms for D igi t al Mi cr oscope C a meras and Ima g e Analysis,Science L ab ( 2016) , Leic a Microsystems ) 准确记录下样本细微的颜色变化 通过显微镜所得到的组织病理学、细胞病理学、血液病理学和微生物等的图像在结构和临床病理学实验的判读中非常重要。这些图像除了用于存档外还有很多其他用途,如被用于会诊。K3摄像头能采集到富含细节颜色准确的图像。 ( K3摄像头可以使用TWAIN,其是一种连接软件和摄像头的协议,被用于图片和指定软件间的通讯。TWAIN可以安全地将图片传输到信息管理系统中,如:LIS/HIS/LIMS。 ) 无需调节光强 具有4x、10x、20x 和 40x放大倍率的 HI PLAN SL(同步光)系列物镜对眼睛特别友好。这些SL物镜相互同步,因此无论选择何种放大倍率,用户看到的亮度始终保持恒定。这样就不需要连续调整亮度,因而减少了可能发生的眼睛疲劳。 每次都能正确设置光圈 光圈标尺采用彩色标记,后者与物镜的颜色代码相对应。只需匹配颜色,即可设置光圈病理显微镜和系统 徕卡显微系统(上海)贸易有限公司 如何为临床样本观察选择显微镜和摄像头过去几年中,无论是组织病理学、细胞学、血液病理学、临床显微镜检查或是其他应用,从事临床样本观察的实验室对拍摄图像的要求明显提高了。除了用于判读形态,它们还有其他很多用途。然而,通过目镜观察到的与摄像头记录到的图像是有着本质的不同,一种是光学图像,另一种是数码图像。了解摄像头相关的知识和特点,有助于选择合适的摄像头,从而拍摄到必要细节和彩色保真度高的图像。您需要拍摄什么样本?样本的性质决定了观察方法。组织染色和涂片样本通常使用明场显微镜检查颜色强度和色调上的差别,未染色样本则需要使用偏正方法观察结构或形状上的异常。在对特定靶点基因的增减和异位观察时,荧光原位杂交(FISH) 是一种常用的方法。您需要的观察方法会影响摄像头的选择?A. 如果您只想拍摄明场图像,推荐使用高质量彩色摄像头。B. 如果您需要不时拍摄荧光图像,一台高质量彩色摄像头便可满足需求C. 单单就荧光图像而言,单色摄像头的效果会优于彩色摄像头D. 如果您的应用同时需要明场和荧光图像,推荐使用两种摄像头简短的技术科普相比选择日常摄影用相机,显微镜观察对摄像头的要求截然不同。分辨率并不是理想图像的代名词。相比之下,像素尺寸、芯片尺寸、动态范围和帧率等因素可能更为重要。摄像头的技术参数通常是此消彼长的。如果某一个方面非常好,那么肯定会有一个方面不那么理想。动态范围是指摄像头传感器记录高强度或低强度信号的性能。它会影响图像中显示细微色彩和信号强度差异的效果。高动态范围需要低噪声和大景深。像素大小会影响图像的分辨率。像素尺寸越小,分辨率越高。但是小像素不一定会给您带来更好的图像,因为较小的像素比较大的像素收集的光更少,这可能会对图像的动态范围产生不利影响。噪声也会影响图像的质量。低噪声有助于获得更好的图像质量。您可能会看到信噪比这个术语,它指的是摄像头传感器检测到的光(信号)与几个基本源产生的噪声之间的关系。在荧光成像中,低噪声尤其重要,因为荧光信号一般会弱于明场信号。摄像头帧率决定摄像头在一秒内拍摄的图像数量,以每秒帧数(fps)表示。例如,帧率决定了是否可以很好地显示实时图像或快速获取图像以分析实时样本中发生的动态过程

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