【转帖】薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量

2 方法与结果
2．1 对照品溶液及标准曲线的制备
精密称取黄皮酰胺对照品0.53mg，置5mLmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为1.06mg／mL的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液5，l0，20，30，50μL，按层析条件点样，展开，扫描测定其峰面积，以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=503.26 一42.2l，r=0.99l 9，线性范围为5.3～53μg／mL。
扫描条件及有关参数的确定：将对照品斑点在200～370nm波长范围内进行光谱扫描，其最大吸收波长为259 nm，确定测定波长λ=259nm。扫描方式：单波长反射法锯齿扫描，光源氘灯，线性参数为Sx=3，振幅为l0，背景校正。
2 2 样品溶液的制备
分别精密称取黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物1.02，1.02，1.06 mg，置10 mL量瓶中，分别加甲醇溶解，超声振荡30min，过滤，再加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
2，3 层析条件及方法
取硅胶G(过240目筛)加0.5％CMC-Na(1：2.5)混合，研磨混匀超声除去气泡后，用自动铺板器铺板，规格10cm×20 cm，厚度为0.6mm。室温晾干，于105℃活化0.5h，置干燥器内备用。展开剂为置冰箱过夜的氯仿一甲醇(85：l5)的下层溶液，显色剂为碘化铋钾：碘-碘化钾(1：1)。
在同一薄层板上，分别点黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物样品溶液及黄皮酰胺对照品溶液各50μL，在上述层析条件下进行展开，展距为12.0cm，取出晾干，喷以显色剂，自然阴干，于可见光下观察结果，可见样品溶液在相同Rf=0.76处分别与对照品溶液均有相同的棕红色斑点。
2，4 样品含量测定
分别精密吸取黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物样品溶液各20μL，点于同一薄层板上，展开定位后测定其峰面积，按标准曲线计算。结果黄皮酰胺粗品含量为(34.70±l.79)％ ，一次甲醇提取物含量为(47.55±1.91)％ ，二次甲醇提取物含量为(83.28±2.61)％ 。
2 5 回收率试验
分别精密吸取已知含量的黄皮酰胺二次甲醇提取物溶液3份各20μL，点于同一薄层板上，同时分别精密加入对照品溶液l0，20，30μL，展开定位后扫描测定。
2．6 精密度试验
精密吸取对照品溶液20μL，点于薄层板上，展开定位后，连续扫描5次。结果各次测得峰面积的RSD为1.16％(n=5)。
2 7 稳定性试验
精密吸取对照品溶液20μL，点样，展开，定位，扫描测定峰面积，从15 min起测定，每隔30min测定1次，直至2h。结果对照品溶液在2h内基本稳定，RSD为1.7l％。

3 讨论
3 1 试验中采用薄层色谱法，所用展开剂系统是经过多次选择确定的，所展出的斑点基本无拖尾， 适当，稳定性好，利于扫描测定。
3 2 从方法的精密度和线性关系考察及加样回收试验的结果来看，样品在点样范围内，浓度与峰面积呈线性关系。TLCS法重现性、准确度好。
参考文献：
【1】杨明河，曹延怀，李伟勋，等，黄皮叶中黄皮酰胺的分离和结构测定【J】药学学报，1987，22(1)：33—40
【2】饶尔昌，程家宠，杨光中，等，黄皮酰胺的合成【J】，药学学报，1994，29：502，