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【求助】急!异硫氰酸苯酯(PITC)衍生测18氨基酸方法求助

  • liujian132008
    2008/06/18
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 急!
    最近在做18氨基酸
    查了一些资料,最后选择了异硫氰酸苯酯(PITC)衍生测18氨基酸
    但遇到不少问题,希望得到大家帮助!
    主要体现在丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸。。。。到脯氨酸不能很好的分离开,且峰形不好看理论板数不高,后面9个氨基酸又能很好的分离峰形好
    不知道是那里出了问题?流动相还是衍生过程?
    不知道你们能否提供一份成熟的方法,我好做下对比找到问题所在
    在此感谢!
    可发邮箱:liujian132008@yahoo.com.cn
    也可以提供意见!大家一起讨论讨论。
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  • 活到九十 学到一百

    第1楼2008/06/18

    应该是流动相比例不合适造成的。楼主用的应该是梯度洗脱,将流动相比例或变化速度微调试一试,应该能达到比较好的效果。

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  • nnsss

    第2楼2008/06/18

    考虑流动相和柱子的选择

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  • niufen

    第3楼2008/06/18

    我们现在用2,4--二硝基氟苯做衍生试剂,目前只检测一种酸,还不错的

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  • liujian132008

    第4楼2008/06/18

    谢谢!
    是梯度不是梯度18种那种得了
    我想还是柱子的问题,用一般的C18柱还是不行,不知道你们都用那种柱子好用点?不要太贵了。
    流动相比例我做了什么调整,效果不明显。

    wangboxzzjs 发表:应该是流动相比例不合适造成的。楼主用的应该是梯度洗脱,将流动相比例或变化速度微调试一试,应该能达到比较好的效果。

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  • liujian132008

    第5楼2008/06/18

    我也问了一些柱子的价格要四五千一根还说不一定做得出来
    就是要我买什么氨基酸分析包,如果那样就没得意思了,什么都配好了照着一做就完事,量有少一下就用完了就好几千,那着得住。

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  • 色色猪

    第6楼2008/06/18

    其实也不难,我用的是agilent TC-C18的柱子,可以完全分开的,条件是:
    流动相A:0.1mol/L乙酸钠+乙腈=97+3
    B:乙腈+水=4+1
    梯度:时间 A B
    0 100 0
    13 93 7
    23 77 23
    29 65 35
    35 60 40
    40 0 100
    45 0 100
    47 100 0
    50 STOP

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  • 色色猪

    第7楼2008/06/18

    对了,如果要谱图可以加我QQ26804020,申请消息请加:仪器信息,欢迎大叫交流经验

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  • liujian132008

    第8楼2008/06/18

    谢谢!
    我是用得这个流动相
    我调了PH值的6.5不知道合适不
    我用的岛津的C18柱
    好像也有用A=30mM醋酸钠:乙腈(355:14),B=乙腈:水(4:1)的
    不知道乍样?

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  • liujian132008

    第9楼2008/06/18

    你能不能发一张18氨基酸图谱给我看哈,我心里有个底,上面有我的邮箱
    顺便问一下你那柱子要好多钱一根?

    huangqining 发表:对了,如果要谱图可以加我QQ26804020,申请消息请加:仪器信息,欢迎大叫交流经验

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  • liujian132008

    第10楼2008/06/19

    18氨基酸图
    帮忙看一下是那里出了问题
    主要是前面几个峰
    希望给点好的见意!

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