【资料】熊猫整理－－常用贮存液的配制

2．40%丙烯酰胺

　　【配制方法】
　　把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

　　【注意】
　　见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

　　3．放线菌素D溶液

　　【配制方法】
　　把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。

　　【注意】
　　放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

　　药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。

4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
　　【配制方法】
　　在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃

　　5．10mol/L乙酸酰溶液
　　【配制方法】
　　把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

　　6．10%过硫酸铵溶液
　　【配制方法】
　　把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。

　　7．BCIP溶液
　　【配制方法】
　　把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

　　8．2×BES缓冲盐溶液
　　【配制方法】
　　用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节　该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

　　9．1mol/L CaCl2溶液
　　【配制方法】
　　在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
　　【注意】
　　制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。

　　10．2.5mol/L CaCl2溶液
　　【配制方法】
　　在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

　　11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液

　　【配制方法】
　　用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

　　【注意】
　　DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
　　【配制方法】
　　把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节　每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基    波长（nm）    消化系数（ε）[L/（mol•cm）]
A    259    1.54×104
G    253    1.37×104
C    271    9.10×103
T    260    7.40×103
　　比色杯光径为1cm时,吸光度=εM

　　13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
　　【配制方法】
　　在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na•2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节　溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
　　【注意】
　　EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。

　　14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
　　【配制方法】
　　在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
　　【注意】
　　小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

　　15．2×HEPES缓冲盐溶液
　　【配制方法】
　　用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4•2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节　pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。

　　16．IPTG溶液
　　【配制方法】
　　IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

　　17．1mol/L乙酸镁溶液
　　【配制方法】
　　在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

　　18．1mol/L MgCl2溶液
　　【配制方法】
　　在800ml水中溶解203.4g MgCl2•6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
　　【注意】
　　MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

19．β-巯基乙醇（BME）溶液
　　【配制方法】
　　一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
　　【注意】
　　BME或含有BME的溶液不能高压处理。

　　20．NBT溶液
　　【配制方法】
　　把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。

　　21．酚/氯仿溶液
　　【配制方法】
　　把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris•HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris•HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
　　【注意】
　　酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

　　22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
　　【配制方法】
　　用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
　　【注意】
　　PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
　　PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

　　23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
　　【配制方法】
　　在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

　　24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
　　【配制方法】
　　将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节　pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。

　　25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
　　【配制方法】
　　在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

　　26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
　　【配制方法】
　　在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节　pH值至5.2或用稀乙酸调节　pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。

　　27．5mol/L NaCl溶液
　　【配制方法】
　　在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。

　　28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
　　【配制方法】
　　在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节　溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
　　【注意】
　　SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。