【原创】大家图谱来找茬(第三季)－板油见解

〓猪哥哥〓

2008/12/01

私聊

液相色谱（LC）

首先感谢各位板油参加“图谱来找茬”，各位回答“大家图谱来找茬(第三季)”的板油都已经收到积分奖励了嘛？因为系统原因，结帐后，首页没有显示具体每人分数。接到积分奖励的板油请回复此帖，通知下我。
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大家图谱来找茬(第三季)
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请您来分析:
1.产生倒峰的原因有哪些？

2.图谱中一个重要问题是倒峰，一个是离峰1很近的倒峰，一个是离峰1比较远，请问有什么区别？针对峰的漂移你有什么好的建议嘛?

3.如果要对图中的峰1进行含量测定,你觉得应该怎样改善条件才可以更好的进行定量分析.
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图谱如下:

1、样品峰1：

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2、该物质的对照品图谱：

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3、另一类倒峰：

【附录】凡参与活动者，必有重奖

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(hyban)：出现倒峰可能原因有氘灯老化，流通管道或池不通畅，样品和流动相中含有小颗粒,气泡等，也有文献认为倒峰主要是水分引起。
甚至还有可能是溶剂峰，如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰。
用示差折光检测器时，如果组分的折光指数低于流动相的折光指数，也会出现倒峰。
此外，检测器的极性接反了，也会出现倒峰。
对于该谱图出现的情况，可以考虑使用流动相溶解稀释样品，这招效果蛮不错的；或者考虑改变检测波长。
针对峰的漂移：
在更换流动相后，要尽量冲久一点，待系统充分饱和再进样；
尽量使用柱温箱，温度对出峰时间也会影响，尤其是昼夜温差较大的时候；
还可以考虑样品和对照穿插交替进样，因为试过遇到某些比较变态（只能这样形容）的检品，无论怎么折腾都会飘，无奈，只能样品和对照穿插交替进样，在报告书中附带说明。

(lovehonghong)：第三个很可能是因为电压干扰导致的倒峰

(tanghongmin)：对于已经25min出峰后的倒峰，应该不会是溶剂峰，溶剂峰出来比较早，一般在5min前，所以用流动相来配比定容供试液不会有作用
倒峰产生的原因我认为主要有两个，就如1、2楼的hyban说的检测器问题，光源不稳定，背景噪音大，如果我没有说错的话，你用的这个检测器是Agilent的紫外或是DAD（仪器用的比较多的板油做仪器耐用性的时候就能对比出来）；另外一方面是当流动相极性比例发生大幅度改变时，泵后流动相由于死体积大或者泵来不及调整导致流动相混合不均匀，或者气泡没有完全除干净，温度未恒温等原因都会产生倒峰

(ygx)：1.倒峰的出现，无怪乎有一下几个原因：试样的溶剂峰；试样中的杂质峰（且含量较大）；流动相中有气泡；检测器性能不稳等。
2.第三幅图的倒峰应该不是溶剂峰。对于峰漂移的问题，对照品浓度和样品浓度应尽可能的接近，另外两者稀释的溶剂也应一致。
3.对于第三幅图，应该对峰1的定量不会带来多大影响的。
对于第一幅图，应该在流动相、检测器方面着手改进或完善：若是气泡问题，就对流动相彻底脱气；若是杂质问题，就改变流动相组成或配比，或者由恒流变梯度，或变换检测器波长等；若是溶剂的问题，就更换溶剂或用流动相稀释；若是检测器的性能问题，就降低检测器的灵敏度或更换光源等。

(juju11)：倒峰产生的原因：
1 信号线极性接反了或是参数设置成倒峰的；
2 走梯度走出来的；
3 溶剂峰
4 氘灯老化，流通管道或池不通畅；
5 样品和流动相中含有小颗粒,气泡等；
6 参比波长设置的不合适，如楼主的图，参比波长选择360nm，如果在出峰位置的某化合物在360nm左右的某一范围内有吸收，那么就可能出现倒峰
前面两张图的倒峰不是很明显，特别是第二个倒峰像是基线波动，样品峰后面的倒峰是不是样品溶剂的关系？换个溶剂看看？或是这个地方有干扰？调整保留时间看看？
第3张图可能都是第6种原因导致，建议把参比波长重新设置，或是干脆把参比波长关掉看看，可能就会好了。

(hmzhou83)：对于第二个倒峰我估计是因为梯度的剧烈变化导致的.

(xy200609)：2和3图比较，23.9分钟倒峰有可能是DAD类检测器参考波长设置不对（设置参考波长有吸收）引起。

(jinseng_zh)：个人认为倒峰主要有两个原因：1.设了参比波长，但检测波长处的吸收没有参比波长处大，就会出现倒峰。2.样品吸收比溶剂吸收弱，也会出现倒峰。所以，最好用流动相溶解样品，参比波长也慎设。

(young8693370)：图一其实可以通过改变你的流动相中有机溶剂的加量来调节出峰时间来消除。

(tanggangfeng)：第一张图的现象是溶剂峰。
一减少或避免溶剂峰
1）增加样品浓度，减少进样量。2）尽量用流动相比例配样品 3）更换波长，溶剂峰在低波长比较明显，在高波段不明显。4 ）有自动进样器的尽量用自动进样器进样。
二与溶剂峰分开
1）优化流动相 2)更换色谱柱
第三张是参比波长处或背景的紫外吸收值要大于检测出的紫外吸收值
1）可以把参比设的更高的波长 2）关闭参比值

(cuiyanbing)：基线漂移很大程度上是色谱柱没有平衡好，本人以前做HPLC-ELSD做指纹图谱时，色谱柱平衡时间少于30min时，基线会飘的很厉害。此外可以更换流动相。

(feixianglyx):在紫外检测过程中，采集的数据都是相对数据，这些数据是物质对紫外光的吸收程度而对物质进行定量分析的，而这些采集到的数据是以流动相的吸光度为基础的，如果样品里含有的物质的吸光度低于流动相吸光度，就会产生倒峰！

(feixianglyx):鉴于你的这个试验，在25分钟总会出一个倒峰，只是你的峰1的出峰时间在变，如果可以确定在25分钟是一个成分，我建议更换低吸收的流动相，定量需要重现，现在看来你做的样品不能够保证样品的保留时间重现，一是建议多稳定一段时间，二是，保证进样条件和进样量重现，三，保证样品不被污染和溶液成分的改变！（乙腈和水的吸收较小）

(jacksonliyue):倒峰主要以下原因：溶剂峰/杂质峰/有气泡/检测器性能不稳等。
第3幅图:峰漂移，更换流动相后，冲久时间长点，待系统充分饱和再进样；
使用柱温箱，温度也会影响，尤其是温差大的时候

(lr2008_ongi):1.峰1进行含量测定：要改变一下流动相的比例，含量测定出峰时间最好控制在10min左右为好；做含量可以把波长设高点，可避免倒峰的出现。
2.图一倒峰主要有可能是样品溶解时产生的，最好用流动相的初始比例；图三倒峰有可能是参比波长设置不合适，把参比波长设高点。
3.漂移：有可能是氘灯老化、气泡、流动相等因素引起的。

blacktea320:不应该是溶剂峰。我觉得最有可能是参比波长设置的不合适，其次是样品吸收比溶剂吸收弱（空针如果没有倒峰的话）。

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