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【分享】液相色谱日常维护及故障排除(二)

shallwe

2008/12/29

液相色谱（LC）

三）谱图问题
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A）峰拖尾
原因解决方法
1、筛板阻塞反冲色谱柱、更换进口筛板、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷填充填料至色谱柱中
3、干扰峰改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误调整PH值，一般在3-7
5、样品与填料表面的溶化点发生反应加入离子对或碱性修饰剂、更改色谱柱
6、柱外效应调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）使用小体积的流通池
7、二级保留效应，反相模式加入三乙胺（碱性样品）、加入乙酸（或酸性样品）、加入盐缓冲剂（离子化样品）换柱
8、缓冲液不合适使用浓度20-100mM的缓冲液、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
B）峰前延
原因解决方法
1、柱温低升高柱温，一般为25-40度，不得超过60度
2、样品溶剂选择不恰当使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载降低样品含量
4、色谱柱损坏更换新柱
C）峰分叉
原因解决方法
1、分析柱污染可能是柱子污染，再生；入口可能被阻塞，拆下来清洗必要时更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相采取流动相作为样品溶剂。
D）峰变形
原因解决方法
1、样品过载减少样品载量
2、样品溶剂选择不恰当减少进样体积、运用低极性样品溶剂
E）额外的峰
原因解决方法
1、样品中有其他组份正常
2、前一次进样的洗脱峰增加运行时间或梯度斜率、提高流速
3、空位或鬼峰检查流动相是否纯净、使用流动相作为样品溶剂、减少进样体积
F）保留时间波动
原因解决方法
1、温控不当调好柱温
2、流动相组分变化防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡在运行前给予足够的时间平衡色谱柱
4、流速变化重新设定流速
5、泵中有气泡从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当更换合适的流动相、选择合适的混合流动相

G）基线漂移
原因解决方法
1、柱温波动。控制好柱子和流动相的温度
2、流动相不均匀或纯度不高使用HPLC级的溶剂、高纯度的盐及添加剂、重蒸水、流动相在使用前进行脱气
3、流通池被污染或有气体用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池
4、检测器出口阻塞取出阻塞物或更换管子
5、流动相配比不当或流速变化更改配比或流速
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时更改流动相时，平衡半小时
7、流动相污染、变质检查流动相的组成、重新配制
8、样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。重新用水及甲醇清洗柱，除去强留份。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。将波长调整至最大吸收波长处
H）基线噪音
原因解决方法
1、在流动相、检测器或泵中有空气流动相脱气。强极性溶剂冲洗系统除去气。
2、漏液检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
3、流动相混合不完全用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响（柱温过高）减少差异、稳定时间长一点
5、在同一条线上有其他电子设备检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动在系统中加入脉冲阻尼器
7、流动相污染、变质或由低质溶剂配成检查流动相的组成。
8、流动相各溶剂不相溶选择互溶的流动相
9、检测器/记录仪电子元件的问题断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
10、流通池污染清洗流通池
11、检测器灯能量不足更换灯
12、色谱柱填料流失或阻塞更换色谱柱
13、流动相混合不均匀或混合器工作不正常维修或更换混合器
I）宽峰
原因解决方法
1、流动相组成变化重新制备新的流动相
2、流动相流速太低调节流速
3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
4、检测器设定不正确调整设定
5、柱外效应影响：柱子过载；检测器对反应时间或池体积响应过大；柱与检测器间管路太长或管路内径太大小体积进样、减少响应时间或使用更小的流通池、使用内径为0.007-0.01的短管路、减少响应时间
6、缓冲液浓度太低增加浓度
7、色谱柱污染或失效，塔板数较低更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。
8、柱入口塌陷打开柱入口，填补塌陷或更换柱子
9、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
10、柱温过低提高柱温。温度不宜超过60℃
12、检测器时间常数太大使用较小的时间常数
J）所有的峰面积都太小
原因解决方法
1、检测器衰减设定过高或过低减少或增加衰减的设定
2、检测器时间常数设定太大设定较小的时间常数
3、进样量太少或太多增大或减少进样量
4、记录仪连接不当使用正确的连接

四）进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。
A）手动进样阀，转动不灵
原因解决方法
1、转子密封损坏更换或调整转子密封
2、转子太紧调整转子的松紧度
B）手动进样阀，载样困难
原因解决方法
1、进样阀安装不当重新安装
2、定量环阻塞清洗或更换定量环
3、进样器污染清洗或更换进样器
4、管路阻塞清洗或更换管路

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老多_小多

第1楼2008/12/29

加点自己的东西就好了

0

q313327118

第2楼2008/12/30

我曾经遇到过峰分叉的问题。就是做有关物质测定时，由于进样的浓度相对来说都比较大，产生了主峰分叉。其实这不是进样量过载~！因为平时做样就按照这样的分析方法检测的。后来我换了下泵的过滤白头（我用的是安捷伦1200），过滤白头很脏，换了新的之后就没出现峰分叉的现象。
所以很多都需要自己动手摸索。

0

3107

第3楼2008/12/30

实践出真知。
q313327118 发表:我曾经遇到过峰分叉的问题。就是做有关物质测定时，由于进样的浓度相对来说都比较大，产生了主峰分叉。其实这不是进样量过载~！因为平时做样就按照这样的分析方法检测的。后来我换了下泵的过滤白头（我用的是安捷伦1200），过滤白头很脏，换了新的之后就没出现峰分叉的现象。
所以很多都需要自己动手摸索。

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