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wunan1986

2008/12/29

私聊

分析化学

1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度 1 M Tris-HCl
配制量 1L
配制方法 1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4 约70 ml
7.6 约60 ml
8.0 约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度 1.5 MTris-HCl
配制量 1 L
配制方法 1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓HCl调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)
组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
配制量 1 L
配制方法 1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0) 100 ml
500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)
组份浓度 3 M醋酸钠
配制量 100 ml
配制方法 1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。
3.加去离子水将溶液定容至100 ml。
4.高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer
组份浓度 137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
配制量 1 L
配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
NaCl 8 g
KCl 0.2 g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27 g
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M醋酸铵
组份浓度 10 M醋酸铵
配制量 100 ml
配制方法 1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100 ml。
3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶，室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚
配制方法 1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇
配制方法 l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10%(W/V)SDS
组份浓度 10%(W/V)SDS
配制量 100 ml
配制方法 1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。
2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。
3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。

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