【转帖】了解生物试剂——封固剂!

平凡人

2009/02/13

私聊

分析化学

由于组织学制片需随时检查或保存，故要在盖玻片下封固。封固剂又称婊媒，顾名思义，它既能使染色后的组织封固于载玻片和盖玻片之间，不使直接与空气接触，避免氧化褪色。另一方面使组织切片在封固剂的充实下，其折光率能和玻片的折光率相近，从而获得清晰的镜检效果。（玻片折光率为1．518）

封固切片的介质需根据多种因素而定。常用的有两类：
1．含水封固剂：如甘油，甘油明胶和Apath糖浆等，用于未染色的材料，脂肪染色，异染染色等。
如：甘油明胶常用于脂肪染色的冰冻切片
Apath糖浆则用于证明淀粉样变的结晶染色法中。
此类封固剂使用方便，组织切片不必经过脱水、透明等步骤即可封固。但切片仍可以久存。
2．无水封固剂：如中性树胶，大马树脂及人工树脂等。用于石蜡，冰冻和火棉胶切片的封固，使用时组织切片必须脱水，透明彻底，不然片中会出现云雾状混浊，妨碍镜检。
通常这些封固剂系将一种树脂（天然或合成的）溶于其天然溶剂或二甲苯内直至呈适当的易干易凝的流体状以便封固。其粘稠度以便易排除气泡且在盖玻片与切片之间能自由流动为好，稍稠一点则可避免干燥后在盖玻片下形成空气间隙。
选择一种封固剂，应以对所用的各种染色剂不褪色为原则。
如：用碱性苯胺染料染色需封固于不含酸的封固剂内。象普鲁士蓝反应的切片应封固于非还原性封固剂内。
封固剂还应具有准确的折光率：
未染色组织最好用有很高或很低折光率的封固剂封固。而染色的切片则以折光率在1．52至1．54之间的封固剂封固则透明度最佳。
我们常用的无水封固剂为市售的中性二甲苯树胶液，亦称中性树胶；为无色或淡黄色的透明液体，因酸或碱性封固剂均可引起组织切片的褪色，故宜用中性封固剂。封固剂应保存于有色瓶中避免日光照射，并存放于暗处以防酸变。
中性树胶是很好的封固剂，不仅折光率（1．52）及色散作用都近似于玻璃，而且在很薄一层时几乎是完全无色透明。用以封存HE染色的切片则色彩非常鲜艳。干固后即变硬，能把盖玻片和载玻片紧紧地粘在一起。仅有的缺点是随着保存时间的延长，树胶逐渐使二甲苯氧化，产生甲苯酸及邻苯二甲酸能使碱性染料褪色。

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