【讨论】BSTFA衍生三聚氰胺的问题

应助达人

我们在同一大小规格的瓶子里面加入标样，氮气吹干，加入同样量衍生试剂和吡啶。70C反应30分钟。曲线尚可以。有一次换过大一点的瓶子，好像反应瓶的大小无关。

我们也是这样衍生的。关键是标样的衍生很没有重复性，同样的浓度放在不同的瓶内衍生，检测结果不同，差异挺明显的。我说的不同的瓶子是指大小规格什么的完全相同的两个瓶子，不是规格不同的瓶子。

这也是三聚氰胺气相分析比液相定量分析差的原因，如果可以建议采用内标法，结果比较准确。

1、吡啶的挥发性佷强，所以密封是关键；
2、在做标准曲线时，所使用的容器最好一致；
3、同样浓度的标准溶液重现性差，原因是质谱每次调谐值不一样；
4、衍生时，所用容器最好小于5mL,推荐使用1.5mL螺纹口高回收率样品瓶（美国Agilent公司，P/N5183-2030）及PTFE/硅橡胶/PTFE隔垫。（美国Agilent公司，P/N5182-0729）。如用5mL试管，最好使用质量好的刻度试管，磨口密封性能好。
5、衍生化时间最好为45min，以使反应完全。
6、只能进样一次，因进样后，密封损坏，吡啶挥发，体积改变。

应助达人

这个反应应该对仪器含水的要求很高

应助达人

谢谢4楼的经验分享。讲的很关键很详细。

衍生化反应对水分的要求佷高，如衍生时有水分存在时，水分和衍生化试剂反应。所以在样品前处理时，如用水浴式氮吹仪，吹干后，最好在75度烘箱烘5min，不能挂有水珠和水雾。
如果能做到以上要点，标准曲线的线性和相关系数就不会有问题。我们0.025-2.5ug/mL的相关系数能达到0.999以上。

楼上已经提到了衍生化反应对水分的敏感.另外,衍生化反应的重复性一直是一个问题,所以要求每批样品都得同时做校准品的衍生化反应,校准曲线,在我的理解只能是做为质控用.
我当时做标准曲线的时候,曲线还是不错的,其实在相同的条件下,衍生化反应相同,只要你的校准品配制没问题,一般标准曲线都不会有问题的.

再补充一点,吡啶和衍生化试剂的保存除了要注意密封之外,还得注意防湿.