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【求助】实验做的不顺利,请教各位专家帮我分析一下

液相色谱(LC)


  • 请各位中药分析的专家帮我分析一下,到底是什么原因导致后半段图谱基线漂移,还有部分峰分离度不好。
    lc-10A岛津手动进样液相
    流动相:A:乙腈 B:0.04%辛烷磺酸钠+0.05%的磷酸水溶液
    色谱柱:大连依利特C18(4.6*200mm,5um)
    图谱打不开没办法上传啊。
    总共洗脱八十分钟,最后二十分钟基线漂到50mv了,这是什么原因呢?
    开始使用35%的乙腈,最后二十分钟使用的是75%的甲醇。
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  • 贝壳里的海

    第1楼2009/07/18

    分离度不好,我给你提供两个方案:1.可以参照分离度不好的峰的保留时间,在相应的时间段里,调整流动相的洗脱梯度,很有可能提高分离度;2.换一个填料颗粒更小,柱内径更细的色谱柱,柱子长度更长的也可以.这个能够有效地提高分离度.
    至于你说的基线漂移,估计是梯度洗脱所致,梯度洗脱是很容易出现这种情况的,多数都不能避免.只要不影响准确积分,是没有关系的.

    qzyuan601 发表:
    请各位中药分析的专家帮我分析一下,到底是什么原因导致后半段图谱基线漂移,还有部分峰分离度不好。
    lc-10A岛津手动进样液相
    流动相:A:乙腈 B:0.04%辛烷磺酸钠+0.05%的磷酸水溶液
    色谱柱:大连依利特C18(4.6*200mm,5um)
    图谱打不开没办法上传啊。
    总共洗脱八十分钟,最后二十分钟基线漂到50mv了,这是什么原因呢?
    开始使用35%的乙腈,最后二十分钟使用的是75%的甲醇。

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  • bmanker

    第2楼2009/07/19

    请问你的检测波长是多少?一般而言,甲醇的背景吸收值比乙腈高,到最后20min基线上走是很正常的事情,最后10min虽然基线比较高但应该是平稳的~
    仅供参考~

    qzyuan601 发表:
    请各位中药分析的专家帮我分析一下,到底是什么原因导致后半段图谱基线漂移,还有部分峰分离度不好。
    lc-10A岛津手动进样液相
    流动相:A:乙腈 B:0.04%辛烷磺酸钠+0.05%的磷酸水溶液
    色谱柱:大连依利特C18(4.6*200mm,5um)
    图谱打不开没办法上传啊。
    总共洗脱八十分钟,最后二十分钟基线漂到50mv了,这是什么原因呢?
    开始使用35%的乙腈,最后二十分钟使用的是75%的甲醇。

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  • qzyuan601

    第3楼2009/07/19

    谢谢您的指教,我写错了。前后都是用乙腈做的,只是到最后的二十分钟里基线突然奔的好高。我估计是不是柱子出问题了。这个实验刚开始是用一根15cm的柱子做的。有些地方有保留,老是冲不掉的。后来就换了20cm的柱子。也不知道怎么回事。我用的波长是225nm。再一次感谢您。

    bmanker 发表:请问你的检测波长是多少?一般而言,甲醇的背景吸收值比乙腈高,到最后20min基线上走是很正常的事情,最后10min虽然基线比较高但应该是平稳的~
    仅供参考~

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  • qzyuan601

    第4楼2009/07/19

    谢谢您的回复,我再试一下吧,我估计是柱子的问题。做梯度很伤柱子的是吧?下次把图谱和梯度一起传上来请你们帮我分析一下。谢谢!

    oucwzf 发表:分离度不好,我给你提供两个方案:1.可以参照分离度不好的峰的保留时间,在相应的时间段里,调整流动相的洗脱梯度,很有可能提高分离度;2.换一个填料颗粒更小,柱内径更细的色谱柱,柱子长度更长的也可以.这个能够有效地提高分离度.
    至于你说的基线漂移,估计是梯度洗脱所致,梯度洗脱是很容易出现这种情况的,多数都不能避免.只要不影响准确积分,是没有关系的.

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