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【分享】含量测定方法学分析

〓猪哥哥〓

2009/06/30

液相色谱（LC）

含量测定方法学分析

一、准确度
　　准确度是指测定结果与真实值或参考值接近的程度，表示分析方法测量的正确性，一般以回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。
对于单味药材可用已知含量的对照药材或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果比较。以报告测定结果平均值与真实值之差及其可信限。由于药材对照品数目尚少和提供的参考值也存在误差，且许多成分缺少分析方法，因此通常单味药材也和制剂一样，在考察其准确度时常用加样回收法来计算回收率。即于已知被测物含量（A）的试样中加入一定量（B）的被测物对照品进行测定，得总量（C）。
　　回收率（%）=（C—A）/B×100
　　在规定范围内（即A+B在标准曲线的线性范围内，且控制A：B在1：1左右），测定次数n≥5，报告平均回收率（%）和RSD。中药制剂含量测定的回收率一般要求在95%~105%，一些方法操作步骤繁复，可要求略低——不可小于90%。RSD一般应在3%以内。而生物样品分析时，一般控制回收率应在85%~115%（样品药浓≥200μg/L）及80%~120%（样品药浓<200μg/L），RSD尽可能在5%以内，但不超过10%。

　二、精密度
精密度系指用该法经多次取样测定同一个均匀样品，各测定值彼此接近的程度。精密度一般用标准偏差(S)或相对标准偏差(RSD)表示，或同时报告可信限。
在相同条件下，由一个分析人员同一次测定所得结果的精密度称为重复性。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。考察的变动因素包括不同实验室、不同分析人员、不同仪器、不同批号试剂、不同测试耗用时间、不同环境（分析温度、湿度等)，不同测定日期等。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时，通过协同检验得出重现性结果。

三、选择性
选择性是指在样品中有其他组分共存时，该分析方法对被测物准确而专属的测定能力。它与专属性的含义稍有不同。专属性是指一种方法仅对一种分析成分产生唯一信号；选择性则可对多种化学成分产生不同响应，而主要成分的响应可与其他响应区分。因此，选择性是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的量度。
在中药及其制剂分析中，考察一个分析方法的选择性时，应着重考察共存组分是否对被测组分的测定有干扰。一般来说，可以通过添加上述物质的样品与未曾添加的样品所得分析结果进行比较而确定。不过，由于中药及其制剂的组成复杂，且成分不完全清楚，以及干扰物质的化学纯品不一定都能得到，给考察分析方法的选择性带来困难，因此常用阴性对照法来考察分析方法的选择性，即以被测成分与除去该成分或除去该药材的成药进行对照，考察被测成分的响应是否受到干扰组分的影响。由此可见，在中药制剂分析中，通过样品的预处理(提取、净化分离、衍生化等)来提高分析方法的选择性，显得尤为重要。
色谱法或其他分离方法，应附代表性的实验研究图谱，图中标明被测成分的位置，以说明专属性，必要时用光电二极管阵列检测或质谱检测鉴定被测成分。

四、线性与范围
分析方法的线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度成正比关系的程度。换言之，就是试样中被测物浓度的变化与试验结果(或测得的响应信号)成线性关系。
所谓线性范围是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。
线性与范围可通过绘制标准曲线来确定。通常是在一定条件下，分别精密制备至少5个不同浓度的供试样品(或对照品)进行测定，用作图法[响应信号或经数学转换的响应信号（Y）对被测物浓度或量（X）作图]或计算回归方程（Y=a+bX)得标准曲线。用相关系数(r)来衡量标准曲线的线性度，并控制r≥0．999，但薄层色谱扫描定量中r≥0．995即可。

五、耐用性
耐用性是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。液相色谱法典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速等。气相色谱法的变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体及柱温、进样口和检测器温度等。薄层色谱法的变动因素有：吸附剂或薄层板的型号和厂牌，展开时的温度、湿度等。

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zxc198502

第1楼2009/06/30

学习了

0

dong3626

第2楼2009/06/30

应助达人

这样看来，耐用性本身就需要多次的实验得出来了。。
还有，是不是做标准曲线，样品的含量尽量的在曲线范围内才更为准确？？

0

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