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【求助】我的色谱柱是不是堵住了?

液相色谱(LC)

  • 我用的是安捷伦高效液相1100,主要在用于做血药浓度测定。
    其中一根色谱柱,TC-C18,4.6*250mm,5um,用于测定血浆中甲氨蝶呤浓度。流动相用的是甲醇:磷酸缓冲盐(PH=5.41)=21:79。
    之前有停了将近两个月没有做,运作也是正常的。
    可是上次洗完系统后,做这根柱子时,压力由原来的140bar左右骤升至310bar左右,由于是马上出结果,所以只好硬着头皮做下去,但峰形没有变化,出峰时间稍有滞后1~2min。
    系统压力绝对没有问题,做别的柱子正常。
    打电话给客服,让我脱检测器,反向冲柱子,先用水冲了25ml,后用异丙醇0.5ml/min,2h,155bar,但正向冲甲醇5%、水95%、0.2ml/min时压力都非常高,而且都是以4~5bar的速度上升,可至300多bar,奇怪的是我将流速设为零后,压力还不降低,降低速度最多以1bar的速度降低,太反常了。

    请问:我的柱子是不是堵了?如果是还有救吗?我在医院工作,液相水平太低,麻烦各位高手给我支支招!
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  • 柏坡

    第1楼2009/08/19

    判断是不是柱子的问题,你可以先拿掉柱子设流速,看压力,这个一般很低。

    看你说的情况 柱子可能是堵了,低流速低有机相(5%的有机相,0.5左右的流速)先冲冲看,是否有改善,带缓冲盐的流动相一定要冲干净。处理柱子可能会花费多一些的时间。注意保养柱子。

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  • isee

    第2楼2009/08/20

    有可能是堵了,使用缓冲盐时,一定要过滤,切不可省去此步.

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  • 〓猪哥哥〓

    第3楼2009/08/20

    做其他的柱子压力都正常,你的那根柱子可能堵得非常厉害。
    反冲的效果如果不明显的话,只能拆开色谱柱,看看是不是柱筛板堵了,如果不是把表面的填料挖去一点。但是可能会影响保留时间。

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  • pandora98

    第5楼2009/08/20

    应该是柱子堵了,可能是磷酸盐的问题,使用之前应该过滤的,现在最好是用95%的水倒着冲洗一下看看。
    还有可能是样品前处理不到位,可以试试用二氯甲烷等强极性溶剂洗一下柱子,注意洗的时候流动相用异丙醇做过渡,同时注意压力。

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  • 小卢

    第6楼2009/08/20

    你用的都是高杂质的东西,血和盐。所以堵得可能很大!!!
    按照1楼的说法可以试下看;然后,再继续反冲!!!

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  • jeanee

    第7楼2009/08/20

    看下过滤白头上是不是有盐析出了
    我遇到过这种情况

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  • prefers

    第8楼2009/08/21

    这么高的压力,建议不要再用了,即使这次冲下来了,几天后压力就又上去了。维持在高的压力(大于300bar)下对你的系统损坏很厉害,换新的吧。

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  • zhouxiaoyun930

    第9楼2009/08/21

    柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,所以堵的可能性很大,还有用的是磷酸盐缓冲,盐易吸出。 当压力太大时易损坏高压泵。

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  • dony2008

    第10楼2009/08/21

    是不是上次用完没平衡柱子啊 得用不含缓冲盐的流动相冲一下 在保存在纯的甲醇或乙腈中 不过度的话 缓冲盐溶解度降低 容易结晶 堵塞柱子

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  • 小余儿

    第12楼2009/08/21

    这是缓冲盐没洗干净结晶堵了柱子。把前面的白头和柱子的筛板还掉。

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