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【求助】用液相测蛋白问题

液相色谱(LC)

  • 请问有人用液相测过蛋白吗??我用的流动相0.1%的三氟乙酸乙腈溶液的pH只有零点几 这对吗??我都不敢做了 pH这么低会损坏柱子的 谢谢 回复
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  • JS XY

    第1楼2009/08/26

    0.几太低了,任何硅胶柱都承受不了,一般2以上。1。多也可以,有的柱子是可以的。

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  • JS XY

    第2楼2009/08/26

    0.几太低了,任何硅胶柱都承受不了,一般2以上。1。多也可以,有的柱子是可以的。

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  • longly

    第3楼2009/08/26

    你用的是什么色谱柱?能用常规的C18柱测蛋白吗,不赌塞吗?是多肽吧!我也试过用0.1%的三氟乙酸来测多肽,还行!柱子没大问题,现在很多杂化柱或专用的柱子可以耐受一以下的PH值!
    我们测蛋白纯化一般用凝胶分析柱,不同分子量范围用不同的柱子!

    hplc1019 发表:请问有人用液相测过蛋白吗??我用的流动相0.1%的三氟乙酸乙腈溶液的pH只有零点几 这对吗??我都不敢做了 pH这么低会损坏柱子的 谢谢 回复

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  • hplc1019

    第4楼2009/08/26

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    你用的是什么色谱柱?能用常规的C18柱测蛋白吗,不赌塞吗?是多肽吧!我也试过用0.1%的三氟乙酸来测多肽,还行!柱子没大问题,现在很多杂化柱或专用的柱子可以耐受一以下的PH值!
    我们测蛋白纯化一般用凝胶分析柱,不同分子量范围用不同的柱子![/quo
    我用的是资生堂 C4 C18 呀 ph太低不行吧 不加三氟乙酸行吗

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  • yuan_log

    第5楼2009/08/28

    你的TFA恐怕加多了,呵呵。正常的0.1%TFA加入后PH大约在2.5左右,书上写的是3.0,实际要低一些。一般地硅胶柱在低PH环境下可能发生醇键断裂导致炭膜断裂,大多数用来分析蛋白质的柱子PH范围都是在2-9的样子。
    使用大孔径的(300A)柱子跑蛋白还可以,我这边跑得分子量都是50KB以上的,还可以了。不过蛋白质本身差异太大了,楼主要做好长期战斗的准备,呵呵。摸条件比较痛苦的。

    hplc1019 发表:请问有人用液相测过蛋白吗??我用的流动相0.1%的三氟乙酸乙腈溶液的pH只有零点几 这对吗??我都不敢做了 pH这么低会损坏柱子的 谢谢 回复

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  • hplc1019

    第6楼2009/08/28

    呵呵 谢谢 我刚做也不太懂啊 师姐的方案就是做不出来 一测ph太低了 你做过蛋白分离吗 怎么办 急急急

    yuan_log 发表:你的TFA恐怕加多了,呵呵。正常的0.1%TFA加入后PH大约在2.5左右,书上写的是3.0,实际要低一些。一般地硅胶柱在低PH环境下可能发生醇键断裂导致炭膜断裂,大多数用来分析蛋白质的柱子PH范围都是在2-9的样子。
    使用大孔径的(300A)柱子跑蛋白还可以,我这边跑得分子量都是50KB以上的,还可以了。不过蛋白质本身差异太大了,楼主要做好长期战斗的准备,呵呵。摸条件比较痛苦的。

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  • hplc1019

    第7楼2009/08/28






    请问你有这方面的资料吗

    hplc1019 发表:
    呵呵 谢谢 我刚做也不太懂啊 师姐的方案就是做不出来 一测ph太低了 你做过蛋白分离吗 怎么办 急急急

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  • amwuem

    第8楼2009/08/31

    你好,请问你是研究什么样品里的蛋白呀?我司有专门测试蛋白多肽的仪器,如有兴趣可以联系13632374563黄生

    hplc1019 发表:请问有人用液相测过蛋白吗??我用的流动相0.1%的三氟乙酸乙腈溶液的pH只有零点几 这对吗??我都不敢做了 pH这么低会损坏柱子的 谢谢 回复

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  • richies

    第9楼2009/08/31

    测定多肽不就是一个梯度HPLC么??有啥专用仪器么??

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