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【求助】自己装的色谱柱造成的拖尾

液相色谱(LC)

  • 我们自己装填的液相色谱柱,分离样品时,柱效也挺高,但是就是峰有点拖尾,拖尾因子能达到1.7多或更高,想请问一下,造成的拖尾都会有哪些原因啊?
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  • sleepy840304

    第1楼2009/09/22

    造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因及解决方法和如何贮存色谱柱2008-10-05 17:56一、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因

    1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷;

    2.柱头有污染;

    3.样品超载;

    4.样品溶剂不合适;

    5.柱外效应;

    6.化学或二次保留(硅羟基)效应;

    7. 缓冲容量不足或不合适;

    8. 重金属污染。

    二、如何解决峰形拖尾的问题

    A. 与化学有关的拖尾问题

    1.流动相中,加入30mM的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物), 未知化合物加醋酸三乙胺;

    2.如仍然拖尾,将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);

    3.降低进样量至<1μg。

    B. 与色谱柱有关的拖尾问题

    1.如柱头处有强保留的样品组分积聚,反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇,加1%氢氧化铵混合液冲洗;正向柱可用甲醇冲洗;

    2.使用保护柱。

    C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽

    1.进样体积过大,(通常≤25μL);

    2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(最佳连接管应<20cm,内径为0.007");

    3.检测器流通池的体积过大。

    三、如何贮存色谱柱

    1.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少, 或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌生长(一定当心其毒性和潜在的爆炸性);或在流动相中加20%的有机改性剂,也可抑制微生物生长, 有机改性剂还有助于流动相脱气。

    2.尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂(乙晴最好)中,避免在缓冲溶液中保存。

    3.使用缓冲溶液后的色谱柱,应用15~20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成100%有机溶剂贮存。

    4.避免用纯水冲洗键合致密的C18柱。

    5.将色谱柱的两端用堵头拧好,以免柱床填料干裂。

    网上搜的。我自己也用湿法装过柱子,一般拖尾的柱子拆开看会有一定的塌陷。

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