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【讨论】CE中蛋白的标记问题

plf0717

2009/10/25

毛细管电泳（CE）

各位，
用标记物对蛋白质进行标记时常用EDC和NHS，
有文献标记方法如下：1、先配标记液标记物+EDC+NHS 2、用标记液对蛋白进行标记。

个人现有疑问：EDC作为交联剂，主要使氨基和羧基聚合，如果标记液中EDC过量的话，再用其标记蛋白质，同时应该会使蛋白质自身的氨基和羧基发生聚合反应而降低标记效率，那有什么办法可以消除这种影响呢？希望大家指导！谢谢。

顺便有啥好的标记方法请提供参考！再次感谢！

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plf0717

第1楼2009/10/25

我现在做胺标记蛋白

0

i_am_ling

第2楼2009/10/25

楼主不知道大概的含量是多少么？
plf0717 发表:各位，
用标记物对蛋白质进行标记时常用EDC和NHS，
有文献标记方法如下：1、先配标记液标记物+EDC+NHS 2、用标记液对蛋白进行标记。

个人现有疑问：EDC作为交联剂，主要使氨基和羧基聚合，如果标记液中EDC过量的话，再用其标记蛋白质，同时应该会使蛋白质自身的氨基和羧基发生聚合反应而降低标记效率，那有什么办法可以消除这种影响呢？希望大家指导！谢谢。

顺便有啥好的标记方法请提供参考！再次感谢！

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sunpengwjh

第3楼2009/10/25

可以做单因素实验，随着EDC交联剂的量增加，先是增加，然后在继续加入的时候开始减小的那个点，就是最佳用量！

0

spfeng

第4楼2009/10/26

同意三楼的说法，在电泳中，很多事用单因素实验来确定最佳实验条件的！

0

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