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【求助】HPLC基线不稳以及峰展宽

  • yiqingyiyu
    2009/11/09
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 求助各位大虾,我近日来做HPLC遇到如下两个问题:
    1、我用的是waters e2695HPLC,紫外检测器,流动相是乙腈-0.2%甲酸=50:50,均过0.45um滤膜,检测波长在230nm的时候发现基线总是走不平,出现连续上下波动的尖锐峰,AU值只能稳定在3个零,第4位就出现很大变化,峰面积在1万到2万,不知道是什么原因引起的基线不稳,应该不是气泡问题吧,因为柱压变化基本在5psi
    2、今天做实验突然发现色谱峰比以前变宽的很厉害,拖尾严重,用的是菲罗门的柱子(使用不到半年),换了一根waters的新柱子后,同样的条件峰形就变好了,是不是柱子污染了,能不能反冲来解决?

    因为我做的化合物只在230nm有吸收,而且都是低浓度的,基线波动那么大,基本上没法做了,,请大家一定帮忙解决啊,非常感谢非常感谢!
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  • 〓猪哥哥〓

    第1楼2009/11/10

    柱子有些污染,压力和原来相比增加了多少?维护一下再试试。

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  • yiqingyiyu

    第2楼2009/11/10

    压力和以前相比好像没有增加多少,用甲醇和水走梯度冲了一下,还是不能缓解峰展宽哦

    〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:柱子有些污染,压力和原来相比增加了多少?维护一下再试试。

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  • kubile2005

    第3楼2009/11/10

    换上一根新的Waters柱子,峰形就好了
    那么很有可能phenomenex的柱子柱效下降了,建议重新测一下柱效

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  • 〓猪哥哥〓

    第4楼2009/11/10

    用苯,甲苯等测下柱效看看。

    kubile2005(kubile2005) 发表:换上一根新的Waters柱子,峰形就好了
    那么很有可能phenomenex的柱子柱效下降了,建议重新测一下柱效

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  • 柏坡

    第5楼2009/11/10

    也有可能是柱连接的不好,菲罗门的柱子换到其他机器上试试?

    基线尖锐波动也有可能是检测器里有气泡。

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  • 哇咔咔

    第6楼2009/11/11

    菲罗门的柱子,寿命貌似就是有点短

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  • gonghaofan

    第7楼2009/11/11

    如果使用半年就污染了,最好还是使用保护柱比较节约色谱柱

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  • yiqingyiyu

    第8楼2009/11/14

    谢谢各位的热心帮助,我后来把柱子反接,用纯甲醇0.2的流速冲了5个小时,再正过来用就好了,回想了一下,之前进过正辛醇,没有稀释,可能是正辛醇对柱子不好。
    基线尖锐波动的原因还没找到,怎么排气泡都不管用,但是在420nm波长下基线就非常稳定,打算看看同型号的其他仪器有没有这个问题

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  • 青橙

    第9楼2009/11/15

    是不是甲酸在230nm处有吸收啊?
    羧酸基的最大吸收波长在203nm

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  • syqjy

    第10楼2010/05/13

    应该与乙酸是有点关系的,我之前也出现这样的问题,后来把乙酸换掉后就好了。。

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